金相顯微鏡的使用

1、金相顯微鏡的使用超分辨熒光顯微鏡問鼎諾貝爾獎超分辨熒光顯微鏡問鼎諾貝爾獎2014年瑞典皇家科學院將諾貝爾化學獎頒發(fā)給了三名研制超級分辨率熒光顯微鏡的三位科學家。這三位獲獎科學家分別是美國霍華德休斯醫(yī)學研究所的Eric Betzig，德國Max Planck生物物理化學研究院的Stefan W. Hell和美國斯坦福大學的William E. Moerner。傳統(tǒng)光學顯微鏡的最大分辨率長期以來難以突破0.2微米的物理限制，這三名科學家研制的超分辨率熒光顯微鏡繞過了這一限制，使得光學顯微鏡能一窺納米世界。 從此熒光顯微鏡進入到一個更深層次領域。一、實驗目的一、實驗目的l了解普通光學金相顯微鏡的成像

2、原理、基本構造、各主要部件及元件的作用；l學習和掌握金相顯微鏡的使用及維護方法。二、實驗原理二、實驗原理1.顯微鏡成像原理顯微鏡成像原理被觀察物體AB放在物鏡前焦點F1略遠處，物體AB形成的道理放大實像A1B1，位于目鏡焦點F2之內。實像A1B1通過目鏡在人眼的視網膜上成像，然后再經目鏡放大后得到倒立放大的虛像A1B1,這就是顯微鏡下研究實物時所觀察到的顯微圖像。虛像以1:1成像于人眼的明視距離，即250mm的地方。物鏡的技術參數 放大倍數：是指物鏡在線長度上放大實物倍數的能力指標。一般在物鏡上刻度出如10 x、20 x、40 x等。 鏡筒長度：是指物鏡頂面到目鏡頂面的距離。 數值孔徑：主要表

3、征物鏡的聚光能力，通常用“NA”表示，其主要決定了物鏡的分辨能力（鑒別）及有效放大倍數。數值孔徑越大，聚光能力越強，從試樣放射進入物鏡的光線越多，鑒別能力越好。 視場光闌：限制成像范圍的光闌，調節(jié)其大小可以改變試樣表面被照亮區(qū)域的大小。目鏡目鏡也是顯微鏡的主要組成部分，它的主要作用是將由物鏡放大所得的實像再次放大，從而在明視距離處形成一個清晰的虛像。放大倍數 物鏡放大倍數 M1= A1B1/AB 目鏡放大倍數 M2=A1B1 /A1B1 顯微鏡總的放大倍數 M=M1*M2= A1B1 /AB 顯微鏡總的放大倍數等于物鏡與目鏡放大倍數的乘積，但有的顯微鏡為了避免鏡筒過長而操作不便，縮短了物鏡與目

4、鏡之間的距離，因此顯微鏡的放大倍數應再乘上一個修正系數G，即 M=M1*M2*G例如：德國Zeiss公司的立式顯微鏡的修正系數G=0.63. 根據數學推導放大倍數為： M1= 鏡筒長度/物鏡焦距=L/F1 M2= 明視距離/目鏡焦距=250/F2 M=M1*M2=250L/（F1* F2） 在使用顯微鏡時，應根據其組織的具體情況，選擇適當的放大倍數，以細節(jié)部分觀察得清晰為準，不要盲目追求過高的放大倍數，因為放大倍數與透鏡的焦距有關，放大倍數越大，焦距必須越小，結果會帶來許多缺陷，同時所觀察得物體的區(qū)域也越小。2.透鏡成像的缺陷透鏡成像的缺陷普通透鏡不能得到理想的像，是因為其存在球面差和色差等缺

5、陷。 球面差是指球面透鏡的中心部分和邊緣部分的厚度不同，而造成折射后的光線不能聚焦在一點，因此使影像模糊不清。 降低球面像差的辦法除了制造物鏡時采取不同透鏡的組合進行必要的校正外，在使用顯微鏡時也可 采取調節(jié)孔徑光闌，適當控制入射光束粗細，減少透鏡表面面積的辦法把球面像差降低到最低限度。 色像差是指白色光（包括一系列波長不同的紅、橙、黃、綠、靛及紫光）由于透鏡對于不同波長的光線折射率不通，因為也不能在折射后集中于一點，因此也造成影像模糊。消除色像差的辦法是在制造物鏡時進行校正。根據校正程度可分為消色差物鏡和復消色差物鏡。消色差物鏡是金相顯微鏡中結構較為簡單的物鏡，適用于低倍和中倍的放大，可在黃

6、綠光區(qū)校正球面差，在紅綠光區(qū)校正色差，因此使用時雖好與黃綠色的濾光片配合使用。復消色差物鏡是由多組特殊光學玻璃和螢石制成的高級透鏡組，對色差的矯正很完善，對球面差也有較好的校正，適用于高倍放大。3.顯微鏡的鑒別率顯微鏡的鑒別率2.金相顯微鏡的構造及使用金相顯微鏡的構造及使用金相顯微鏡的使用：金相顯微鏡的使用：接通電源;選用并安裝適當放大倍數的物鏡和目鏡;將試樣放在載物臺中心，使觀察面朝下;轉動粗調手輪先使載物臺下降，同時用眼觀察，使物鏡盡可能接近試樣表面（但不得與試樣相碰），然后反方向轉動粗調手輪，使載物臺漸漸上升以調節(jié)焦距，當視場亮度增強時再改用微調手輪調節(jié)，直到物象調到最清晰程度為止;適當調節(jié)孔徑光欄和視場光欄，以獲得最佳質量的物象.顯微鏡操作注意事項顯微鏡操作注意事項 顯微鏡觀察前，洗手干燥，操作必須仔細，嚴禁劇烈動作。 顯微鏡的低壓燈泡，切勿直接插入220伏的電源上，應通過變壓器與電源接通。 顯微鏡玻璃部分及樣品觀察面嚴禁手指直接接觸。 轉動粗調手輪，動作一定要慢，若遇到阻礙時， 立即停止操作，千萬不能用力強行轉動，否則儀器損壞。 觀察的金相樣品