欖香烯聯(lián)合生物大分子合成抑制劑對Hca-F肝癌的作用

1、欖香烯聯(lián)合生物大分子合成抑制劑對Hca-F肝癌的作用         作者:郭連英，陳 駿，沈 潔，邢 嶸1，施廣霞，錢振超 【摘要】 目的 本實驗采用欖香烯與生物大分子合成抑制劑聯(lián)合處理小鼠肝癌細胞Hca-F，觀察腫瘤細胞增殖、凋亡和形態(tài)學的變化，探討抑制/干擾腫瘤細胞的DNA、RNA或蛋白質合成對欖香烯抗瘤作用的，以期為判斷欖香烯作         ; 作者:郭連英，陳 駿，沈 潔，邢 嶸1，施廣霞，錢振超 【摘要】; 目的; 本實

2、驗采用欖香烯與生物大分子合成抑制劑聯(lián)合處理小鼠肝癌細胞Hca-F，觀察腫瘤細胞增殖、凋亡和形態(tài)學的變化，探討抑制/干擾腫瘤細胞的DNA、RNA或蛋白質合成對欖香烯抗瘤作用的，以期為判斷欖香烯作用的可能靶點提供線索與依據。; 將Hca-F肝癌細胞用欖香烯（50g/ml）、吡柔比星（THP）（10mol/ml）、單獨和復合處理，設單獨瘤細胞（不處理）為陰性對照。Hca-F細胞濃度均為1×106/ml，每個觀察時間點均設3支復管，用臺盼藍拒染法細胞存活率，在透射電鏡下觀察欖香烯與THP聯(lián)合處理對腫瘤細胞超微結構的影響，用流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期。結果; 欖香烯聯(lián)合吡柔比星處理Hca

3、-F比單獨使用兩種藥物的抑瘤率都高。結論; 本實驗所用生物大分子合成抑制劑不能阻斷欖香烯的抗瘤作用，提示欖香烯抗腫瘤作用對新的蛋白質表達依賴性較低。結合欖香烯處理后瘤細胞形態(tài)學的變化，提示欖香烯可能作用于腫瘤細胞膜或細胞中的某些蛋白質（如酶）等而直接殺傷腫瘤靶細胞，使對欖香烯抗瘤作用靶點的認識又進了一步。本實驗結果表明欖香烯和THP合用可使抗癌作用增強，這對欖香烯聯(lián)合其他藥物腫瘤可能有一定意義。 ; ; 【關鍵詞】; 欖香烯；抑制劑；肝細胞癌; ; effect of elemene combined with inhibitors of macromolecular synthesis fo

4、r hepatic cancer; 【Abstract】; Objective; In this experiment of Hca-F cells (a murine hepatic cell carcinoma) were treated with elemene combined with inhibitors of macromolecular synthesis， their proliferation， survival， cell cycle， apoptosis and morphology were observed. To clarify the influences of

5、 inhibition of DNA， RNA and protein on the antitumor effects of elemene and to find the possible target site of elemene.Methods; The Hca-F cells were singled or mingled treated with elemene（50g/ml），alone or combined with THP （10mol/ml）， the Hca-F cells(without treatment) were used to be the negative

6、 compare. The end consistence of Hca-F cells is 1×106/ml， three tubles in every time point. To calculate the proportion of survival with trypanblue， and observe the impact on the ultrastructure of Hca-F cells treated with elemene and THP in transmission electron microscope， and examine the apop

7、tosis and cell cycles in flow cytometer. Results; The inhibition rate of proliferation of Hca-F treated with elemene and THP was higher than that of Hca-F treated with elemene only.Conclusion; These results showed that the antitumor effects of elemene could not abolished by combined treatment or pre

8、treatment with the inhibitors of DNA， RNA， protein synthesis， suggest that the antitumor effects of elemene may be independent on their synthesis. Combined usage of elemene with THP to cancer therapy is advisable. ; ; 【Key words】; elemene；inhibitor；hepatocellular carcinoma; ; 欖香烯(elemene)是從中藥溫莪術（經鑒定

9、為我國特有新種定名為溫郁金，Curcuma Wenyujin）揮發(fā)油中提取的抗癌有效成分，它是一種僅含碳氫(C15H24)，分子量只有204的小分子、脂溶性的倍半萜類化合物， 此類物質有抗癌活性屬我國首報1。動物實驗與臨床均表明欖香烯的抗癌作用確切，而且不良反應很低。我們過去的表明欖香烯處理除可抑制腫瘤細胞增殖、誘導其凋亡外，還能增強腫瘤細胞的免疫原性，欖香烯處理能增強腫瘤細胞膜HSP70的表達，用表達譜基因芯片技術的研究表明欖香烯處理引起基因表達譜的變化。過去對欖香烯抗癌作用機制的研究僅限于欖香烯對腫瘤細胞增殖、分化和凋亡、免疫原性等的影響，關于它的作用靶點及其信號傳導通路迄今研究很少。本實

10、驗在上述研究的基礎上，采用欖香烯與生物大分子合成抑制劑聯(lián)合處理小鼠肝癌細胞Hca-F，觀察腫瘤細胞增殖、凋亡和形態(tài)學的變化，探討抑制或干擾腫瘤細胞的DNA、RNA或蛋白質合成對欖香烯抗瘤作用的影響，以期為判斷欖香烯作用的可能靶點提供線索與依據。; ; 1; 材料與方法; ; 11; 動物; Balb/c系小鼠，引自醫(yī)學院北京藥物研究所，由本室自行繁殖提供。; ; 12; 瘤株; 小鼠腹水型肝癌H22的高淋巴道轉移亞系Hca-F2，由本校病教研室凌茂英教授贈送，本室常規(guī)傳代、保種。; ; 主要藥品和試劑; 1%欖香烯注射液(elemene，大連市醫(yī)藥科學研究所 )。吡柔比星(Pirarubici

11、n，THP，深圳萬樂藥業(yè)有限公司生產)。RPMI1640培養(yǎng)基（GIBCO，USA）。; ; ; Hca-F細胞懸液的制備; 將傳代保種的Hca-F腹水型肝癌細胞常規(guī)接種于小鼠腹腔，0.2ml/只，收集第78天的腹水（腫瘤細胞生長最旺盛時期，死亡細胞和紅細胞含量較少），HS液破除紅細胞，PBS 洗3次，計活細胞數(shù)，用含20%小牛血清RPMI1640培養(yǎng)液調細胞數(shù)至所需濃度。; ; ; Hca-F肝癌細胞的處理; 將Hca-F肝癌細胞用欖香烯（50g/ml）、吡柔比星（10mol/ml）按本室常規(guī)方法單獨或復合處理，設單獨瘤細胞（不處理）對照。Hca-F細胞濃度均為1×106/ml，每

12、個觀察時間點均設3支復管，加入相應的藥品，以臺盼藍拒染法于不同時間計數(shù)活細胞數(shù)，計算存活率。 ; ; ; 單純欖香烯處理和欖香烯聯(lián)合THP處理對Hca-F增殖的影響; 用MTT法測其OD值。; ; ; 欖香烯聯(lián)合THP處理對瘤細胞超微結構的影響3; Hca-F細胞用欖香烯、THP單一或復合處理，細胞濃度和處理方法同前，處理時間為1h，收細胞，用PBS洗3次，以2.5%戊二醛固定，常規(guī)包埋制片，鈾鉛雙染色，透射電鏡下觀察攝片。; ; ; 細胞凋亡的檢測和細胞周期的測定; 細胞收集同前，用PBS洗3次，加入 PI染色液染色30min（避光、室溫）。上機檢測，Cellquest軟件低速獲取。用Modfit2.0軟件。; ; 2; 實驗結果; ; ; 欖香烯聯(lián)合THP處理對Hca-F存活的影響; 單純用欖香烯處理，Hca-F的存活率就明顯降低，在30min1h的時間內，細胞死亡率隨著藥物濃度增加而增加（表1），單用THP處理，也可導致Hca-F細胞死亡、藍染，其細胞死亡率也隨著藥物濃度增加而增加，欖