植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)(共55頁).ppt

1、 第六章第六章 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn) 1983年，日本三井石油化學(xué)工業(yè)公司在世界年，日本三井石油化學(xué)工業(yè)公司在世界上首次成功地采用紫草細(xì)胞培養(yǎng)工業(yè)化生產(chǎn)上首次成功地采用紫草細(xì)胞培養(yǎng)工業(yè)化生產(chǎn)紫草寧。紫草寧。北京錦繡大地農(nóng)業(yè)股份1 植物次生代謝產(chǎn)物概述植物次生代謝產(chǎn)物概述 2 細(xì)胞的初代培養(yǎng)細(xì)胞的初代培養(yǎng) 3 高產(chǎn)細(xì)胞系的篩選高產(chǎn)細(xì)胞系的篩選 4 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法 5 植物次生代謝物質(zhì)生產(chǎn)植物次生代謝物質(zhì)生產(chǎn)1.1 植物代謝產(chǎn)物1初生代謝：為維持植物正常的生長發(fā)育所必須的代謝。初生代謝過程中形成的各種產(chǎn)物為初生代謝產(chǎn)物。初生

2、代謝產(chǎn)物不穩(wěn)定，在體內(nèi)容易發(fā)生轉(zhuǎn)化。2次生代謝：建立在初生代謝根底上，對于植物的正常生長發(fā)育非必需的代謝，其代謝產(chǎn)物為次生代謝產(chǎn)物，次生代謝產(chǎn)物是末端代謝產(chǎn)物，比較穩(wěn)定，可以在體內(nèi)積累。 類別 次生代謝產(chǎn)物 用途 黃酮 銀杏黃酮，大豆黃酮 治療心血管疾病 醌 紫草寧 抗菌、抗炎、抗病毒、止血 簡單酚類 香豆素 香料，抗菌消炎萜 類 紫杉醇 抗癌 青蒿素 抗瘧疾生 物 堿 長春新堿 抗癌 奎寧 抗瘧疾長春堿： 2 million/kg長春新堿： 15million/kg 李時珍在李時珍在?本草綱目本草綱目?中所開列的中所開列的1892種藥物絕種藥物絕大多數(shù)是植物藥物，目前仍有約大多數(shù)是植物藥物，

3、目前仍有約25的法定藥的法定藥品來自植物。其藥物的有效成分均為次生產(chǎn)物。品來自植物。其藥物的有效成分均為次生產(chǎn)物。天然的次生代謝產(chǎn)物已經(jīng)超過天然的次生代謝產(chǎn)物已經(jīng)超過2萬種。萬種。次生代謝產(chǎn)物的應(yīng)用：色素、香料、藥物、添加次生代謝產(chǎn)物的應(yīng)用：色素、香料、藥物、添加劑、工業(yè)原料等。劑、工業(yè)原料等。 紫杉醇：二萜類化合物 最早由太平洋紅豆杉Taxus brevifolia的樹皮中別離 廣泛用于治療卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌等十幾種癌癥 目前主要來源于紅豆杉屬植物 圖圖1：國際紫杉醇原料藥需求走勢圖單位：公斤：國際紫杉醇原料藥需求走勢圖單位：公斤圖圖2：國際紫杉醇銷售額億美元：國際紫杉醇銷售額億美

4、元700歲的紅豆杉慘遭剝皮歲的紅豆杉慘遭剝皮1.2 獲得植物次生代謝產(chǎn)物的方法從植物中提取化學(xué)合成植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物植物細(xì)胞具有形態(tài)全能性，化學(xué)全能性在離體的條件下可以合成整株植物能合成的物質(zhì) 自然植物和細(xì)胞培養(yǎng)的紫草寧含量比自然植物和細(xì)胞培養(yǎng)的紫草寧含量比較較生產(chǎn)方式生產(chǎn)方式 生產(chǎn)周期生產(chǎn)周期 紫草寧含紫草寧含量干重量干重完整植物完整植物 23年年 12植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng) 3周周 14 細(xì)胞培養(yǎng)是生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的理想途徑：細(xì)胞培養(yǎng)是生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的理想途徑： 縮短周期，提高生產(chǎn)效率縮短周期，提高生產(chǎn)效率 植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)周期為植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)周期為15-30d；而完

5、整植；而完整植株生長短那么幾個月，長那么數(shù)年，如木瓜株生長短那么幾個月，長那么數(shù)年，如木瓜8個月，而紫草為個月，而紫草為5年年 易于管理，減輕勞動強(qiáng)度易于管理，減輕勞動強(qiáng)度 培養(yǎng)在無菌條件下進(jìn)行，可排除病蟲害干培養(yǎng)在無菌條件下進(jìn)行，可排除病蟲害干擾擾 可探索新的合成路線，獲得新的有用物質(zhì)可探索新的合成路線，獲得新的有用物質(zhì)1.3 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)：即是將植物細(xì)胞或小的細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)的技術(shù)。成功的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系必須滿足成功的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系必須滿足3 3個條件：個條件：分散性良好分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較小，一般在，細(xì)胞團(tuán)較小，一般在 3050個細(xì)胞以下，在實個細(xì)胞以下，在實際培

6、養(yǎng)中很少有完全由單細(xì)胞組成的植物細(xì)胞懸浮系。際培養(yǎng)中很少有完全由單細(xì)胞組成的植物細(xì)胞懸浮系。細(xì)胞分裂快，均一性好細(xì)胞分裂快，均一性好，細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同，懸，細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同，懸浮系外觀為大小均一的小顆粒，培養(yǎng)基清澈透亮，細(xì)胞色澤呈浮系外觀為大小均一的小顆粒，培養(yǎng)基清澈透亮，細(xì)胞色澤呈鮮艷的乳白或淡黃色。鮮艷的乳白或淡黃色。有效成分含量高有效成分含量高。次生產(chǎn)物的產(chǎn)量=細(xì)胞量*細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)率可控遺傳因素決定 植物細(xì)胞培養(yǎng)具有周期長、細(xì)胞抗剪切能力弱、植物細(xì)胞培養(yǎng)具有周期長、細(xì)胞抗剪切能力弱、易聚團(tuán)等特點。易聚團(tuán)等特點。 植物細(xì)胞培養(yǎng)反響器的設(shè)計不僅要考慮有利于植物

7、細(xì)胞培養(yǎng)反響器的設(shè)計不僅要考慮有利于細(xì)胞生長，還要考慮有利于產(chǎn)物的積累和別離。細(xì)胞生長，還要考慮有利于產(chǎn)物的積累和別離。 適合植物細(xì)胞培養(yǎng)的反響器應(yīng)具有適宜的氧傳適合植物細(xì)胞培養(yǎng)的反響器應(yīng)具有適宜的氧傳遞、良好的流動性和較低的剪切力。遞、良好的流動性和較低的剪切力。2 細(xì)胞的初始培養(yǎng)實驗中獲得適宜于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞系的過程稱為細(xì)胞的初始培養(yǎng)。2.1建立懸浮系獲取懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞細(xì)胞的振蕩培養(yǎng)酶解法愈傷組織培養(yǎng)法使細(xì)胞團(tuán)分散促進(jìn)氣體交換攪拌培養(yǎng)；攪拌培養(yǎng)； 旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)；旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)； 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)培養(yǎng)方式：2.2 2.2 建立良好的懸浮系的關(guān)鍵環(huán)節(jié)建立良好的懸浮系的關(guān)鍵環(huán)節(jié) 1. 1. 選擇適

8、宜的外植體選擇適宜的外植體雙子葉植物：幼胚、成熟胚、下胚軸、葉片單子葉植物：幼胚、成熟胚、幼穗、花藥等 2. 2. 誘導(dǎo)疏松愈傷組織；誘導(dǎo)疏松愈傷組織； 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 愈傷組織的異質(zhì)性；愈傷組織的異質(zhì)性； 繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng) 3. 3. 選擇適宜的培養(yǎng)基；選擇適宜的培養(yǎng)基； 根本培養(yǎng)基根本培養(yǎng)基+CTK/AUX+CTK/AUX+天然復(fù)天然復(fù)合物合物 eg:SH+NAA3.0+BA1.0+CM/YEeg:SH+NAA3.0+BA1.0+CM/YE 培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的PHPH李忠光，龔明. 2006.74. 懸浮培養(yǎng)初期的控制懸浮培養(yǎng)初期的控制 轉(zhuǎn)速，光，溫度5. 懸浮細(xì)胞的繼代與選擇懸浮細(xì)胞的繼代與

9、選擇 繼代中收集小的細(xì)胞團(tuán) 條件培養(yǎng)基：新鮮培養(yǎng)基3 高產(chǎn)細(xì)胞系的篩選(P113)3.1高產(chǎn)細(xì)胞系 篩選的整體思路外植體愈傷組織的誘導(dǎo)篩選懸浮培養(yǎng)細(xì)胞高產(chǎn)細(xì)胞系篩選高產(chǎn)細(xì)胞系的建立高產(chǎn)細(xì)胞系的建立高產(chǎn)細(xì)胞株系的特點高產(chǎn)細(xì)胞株系的特點 培養(yǎng)細(xì)胞在培養(yǎng)細(xì)胞在遺傳上應(yīng)是穩(wěn)定遺傳上應(yīng)是穩(wěn)定的，以得到產(chǎn)量恒定的，以得到產(chǎn)量恒定的產(chǎn)物的產(chǎn)物 細(xì)胞生長及產(chǎn)物合成的細(xì)胞生長及產(chǎn)物合成的速度快速度快，在較短的時間內(nèi)，在較短的時間內(nèi)能得到較高產(chǎn)量的終產(chǎn)物能得到較高產(chǎn)量的終產(chǎn)物 代謝產(chǎn)物要在細(xì)胞中積累，而不被迅速分解，最代謝產(chǎn)物要在細(xì)胞中積累，而不被迅速分解，最好能將其好能將其釋放到培養(yǎng)基釋放到培養(yǎng)基中中高產(chǎn)細(xì)胞系

10、的篩選過程高產(chǎn)細(xì)胞系的篩選過程選定特定起始材料選定特定起始材料準(zhǔn)確選擇能夠產(chǎn)生目的代謝產(chǎn)物的植物種類、品種準(zhǔn)確選擇能夠產(chǎn)生目的代謝產(chǎn)物的植物種類、品種或單株或單株應(yīng)盡量選擇自然狀態(tài)下產(chǎn)生天然產(chǎn)物的組織或器官應(yīng)盡量選擇自然狀態(tài)下產(chǎn)生天然產(chǎn)物的組織或器官為外植體為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，并獲得單細(xì)胞懸浮液誘導(dǎo)愈傷組織，并獲得單細(xì)胞懸浮液誘變處理細(xì)胞懸浮液，篩選目的突變細(xì)胞誘變處理細(xì)胞懸浮液，篩選目的突變細(xì)胞通過單細(xì)胞培養(yǎng)突變細(xì)胞，獲得突變細(xì)胞無性系通過單細(xì)胞培養(yǎng)突變細(xì)胞，獲得突變細(xì)胞無性系即突變細(xì)胞愈傷組織獲得即突變細(xì)胞愈傷組織獲得高產(chǎn)細(xì)胞系的篩選方法高產(chǎn)細(xì)胞系的篩選方法目測法目測法注意：真正的變異體

11、注意：真正的變異體or生理狀態(tài)不同的細(xì)胞克隆生理狀態(tài)不同的細(xì)胞克隆根據(jù)單細(xì)胞克隆次生代謝產(chǎn)物含量進(jìn)行篩選根據(jù)單細(xì)胞克隆次生代謝產(chǎn)物含量進(jìn)行篩選抗性篩選抗性篩選如：添加抗性抑制劑如：添加抗性抑制劑 庚二酸庚二酸-生物素生物素誘變篩選誘變篩選3.2 高產(chǎn)系的穩(wěn)定性及保存方法高產(chǎn)系的穩(wěn)定性及保存方法盡量減少繼代次數(shù)，用礦物油包埋法，低溫保盡量減少繼代次數(shù)，用礦物油包埋法，低溫保存法存法0-4，超低溫保存法，超低溫保存法-196 保保存。存。同時從高產(chǎn)系中不斷克隆形成新的高產(chǎn)細(xì)胞系。同時從高產(chǎn)系中不斷克隆形成新的高產(chǎn)細(xì)胞系。4 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法懸浮培養(yǎng)：將游離的細(xì)胞或者細(xì)胞團(tuán)按一定密度，懸浮在液

12、體培養(yǎng)基中，不斷攪拌或者振蕩培養(yǎng)，使細(xì)胞快速、大量增殖。技術(shù)難點：通氣、剪切力的適應(yīng)性；細(xì)胞同步化控制。培養(yǎng)：培養(yǎng)基：根本培養(yǎng)基+CTK/AUX 培養(yǎng)條件：溫度、氧氣、PH、轉(zhuǎn)速同步化控制細(xì)胞增殖的監(jiān)測，適時測定細(xì)胞的數(shù)量，掌握放罐時機(jī)。4.1 細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法(P117) 分批培養(yǎng)法 連續(xù)培養(yǎng)法 半連續(xù)培養(yǎng)法 細(xì)胞固定化培養(yǎng)分批培養(yǎng)分批培養(yǎng)：把細(xì)胞分散在一定溶積的培養(yǎng)基中：把細(xì)胞分散在一定溶積的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。進(jìn)行培養(yǎng)。注：中途不添加也不更換培養(yǎng)基注：中途不添加也不更換培養(yǎng)基設(shè)備簡單，操作方便，重復(fù)性好。適合與突變體篩選和遺傳轉(zhuǎn)化的研究。懸浮培養(yǎng)細(xì)胞增殖曲線懸浮培養(yǎng)細(xì)胞增殖曲線 時間（時

13、間（d）細(xì)胞數(shù)量細(xì)胞數(shù)量123451滯后期、滯后期、 2對數(shù)生長期對數(shù)生長期3直線生長期直線生長期 、4減緩期減緩期5靜止期靜止期1細(xì)胞擴(kuò)增生長成S形曲線2繼代培養(yǎng)：要求縮短滯后期 滯后期的長短：a 繼代細(xì)胞所處的生長時期；對數(shù)期 b 繼代的細(xì)胞密度 104-105個/ml連續(xù)培養(yǎng)：在培養(yǎng)過程中，不斷向反響連續(xù)培養(yǎng)：在培養(yǎng)過程中，不斷向反響 器中以一定流量添加新培養(yǎng)基，同時以器中以一定流量添加新培養(yǎng)基，同時以 一定流量從系統(tǒng)中取出培養(yǎng)基及培養(yǎng)物的一定流量從系統(tǒng)中取出培養(yǎng)基及培養(yǎng)物的方式。方式。加入培養(yǎng)基加入培養(yǎng)基排出培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物排出培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物半連續(xù)培養(yǎng)：在完成分批培養(yǎng)的一個周期半連續(xù)

14、培養(yǎng)：在完成分批培養(yǎng)的一個周期 后，從反響器中取出大局部細(xì)胞懸液，只后，從反響器中取出大局部細(xì)胞懸液，只 保存小局部細(xì)胞懸液作為下一培養(yǎng)周期的保存小局部細(xì)胞懸液作為下一培養(yǎng)周期的 種子細(xì)胞，然后參加新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)種子細(xì)胞，然后參加新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng) 的方式。的方式。細(xì)胞固定化培養(yǎng)：將細(xì)胞固定在固相基質(zhì)上，細(xì)胞固定化培養(yǎng)：將細(xì)胞固定在固相基質(zhì)上，放入培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)的方式。放入培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)的方式。懸浮培養(yǎng)反響器的類型： 機(jī)械攪拌式反響器 氣動式反響器內(nèi)循環(huán)氣升式外循環(huán)氣升式機(jī)械攪拌式機(jī)械攪拌式內(nèi)循環(huán)氣升式內(nèi)循環(huán)氣升式外循環(huán)氣升式4.2 培養(yǎng)基：與培養(yǎng)的細(xì)胞密度相關(guān)1高密度懸浮系5*104個/

15、mla 用B5，ER等專用培養(yǎng)基b 對傳統(tǒng)培養(yǎng)基做出改進(jìn)如：加大2,4-D用量；改進(jìn)MS，參加VB、CH等天然復(fù)合物2低密度懸浮系5*104個/mla 條件培養(yǎng)基b 向培養(yǎng)基中添加多種成分，盡可能滿足細(xì)胞生長的需要細(xì)胞同步化：同一懸浮培養(yǎng)體系的大多數(shù)細(xì)胞細(xì)胞同步化：同一懸浮培養(yǎng)體系的大多數(shù)細(xì)胞都同時通過細(xì)胞周期的某一特定時期。都同時通過細(xì)胞周期的某一特定時期。細(xì)胞培養(yǎng)的同步化方法：細(xì)胞培養(yǎng)的同步化方法：饑餓法：限制必需物質(zhì)的供給饑餓法：限制必需物質(zhì)的供給抑制法：化學(xué)抑制，物理抑制抑制法：化學(xué)抑制，物理抑制分級培養(yǎng)：細(xì)胞分級儀分級培養(yǎng)：細(xì)胞分級儀4.3 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的同步化懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的同步化(

16、P121)4.4 懸浮細(xì)胞的生長量和活力分析(P122)1測定懸浮細(xì)胞數(shù)量的方法：細(xì)胞計數(shù)-血球計數(shù)板 鮮重、干重的測定細(xì)胞密實體積(PVC)2細(xì)胞活力測定二乙酸熒光素法 FDA-活細(xì)胞內(nèi)有熒光產(chǎn)生伊凡蘭染色法-染色受損細(xì)胞核-死細(xì)胞相差顯微鏡法-胞質(zhì)環(huán)流是否存在 5 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的技術(shù)要求：植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的技術(shù)要求： 從工程的角度講必須要進(jìn)一步研究和開發(fā)適宜從工程的角度講必須要進(jìn)一步研究和開發(fā)適宜于植物細(xì)胞生長和次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)的生物反響于植物細(xì)胞生長和次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)的生物反響器，建立最正確的控制和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。器，

17、建立最正確的控制和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。 從細(xì)胞生長與培養(yǎng)技術(shù)方面講必須滿足以下從細(xì)胞生長與培養(yǎng)技術(shù)方面講必須滿足以下3個個條件：條件： 1、培養(yǎng)的細(xì)胞在遺傳上應(yīng)是穩(wěn)定的，以得到產(chǎn)、培養(yǎng)的細(xì)胞在遺傳上應(yīng)是穩(wěn)定的，以得到產(chǎn)量恒定的產(chǎn)物。量恒定的產(chǎn)物。 2、細(xì)胞生長及生物合成的速度快，在較短的時、細(xì)胞生長及生物合成的速度快，在較短的時間內(nèi)能得到較高產(chǎn)量的終產(chǎn)物。間內(nèi)能得到較高產(chǎn)量的終產(chǎn)物。 3、代謝產(chǎn)物要在細(xì)胞中積累而不被迅速分解，、代謝產(chǎn)物要在細(xì)胞中積累而不被迅速分解，最好能將其釋放到培養(yǎng)基中。最好能將其釋放到培養(yǎng)基中。5.1 技術(shù)路線技術(shù)路線 (1) 選擇適宜的外植體；誘導(dǎo)疏松愈傷組織；選擇適宜的外植體；

18、誘導(dǎo)疏松愈傷組織； (2) 通過含量分析，選擇高產(chǎn)細(xì)胞系通過含量分析，選擇高產(chǎn)細(xì)胞系 (3) 研究培養(yǎng)條件到達(dá)高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)；研究培養(yǎng)條件到達(dá)高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)； (4) 建立懸浮細(xì)胞培養(yǎng)、優(yōu)化培養(yǎng)條件建立懸浮細(xì)胞培養(yǎng)、優(yōu)化培養(yǎng)條件 到達(dá)高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)；到達(dá)高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)； (5) 小試、中試、優(yōu)化培養(yǎng)條件；小試、中試、優(yōu)化培養(yǎng)條件； (6) 大規(guī)模培養(yǎng)；大規(guī)模培養(yǎng)； (7) 工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)品別離，純化。工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)品別離，純化。 5.2 提高次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)量的方法1篩選高產(chǎn)細(xì)胞系 不同植物種類，不同植株及同一植株的不同部位，往往有不同的代謝能力； 通過人工誘變改進(jìn)細(xì)胞系； 通過遺傳改進(jìn)篩選細(xì)胞系。 云云南南紅

19、紅豆豆杉杉東北紅豆杉東北紅豆杉中國紅豆杉中國紅豆杉南方紅豆杉南方紅豆杉雜種紅豆杉雜種紅豆杉 篩選出的高效、高產(chǎn)細(xì)胞株系，有篩選出的高效、高產(chǎn)細(xì)胞株系，有的植物細(xì)胞系其高效、高產(chǎn)性能穩(wěn)定的植物細(xì)胞系其高效、高產(chǎn)性能穩(wěn)定多年，但有的植物細(xì)胞系不穩(wěn)定，因多年，但有的植物細(xì)胞系不穩(wěn)定，因此，還需要定期檢測，更新細(xì)胞株系。此，還需要定期檢測，更新細(xì)胞株系。培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分一方面要滿足植物細(xì)胞的生物量培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分一方面要滿足植物細(xì)胞的生物量增長，另一方面要使細(xì)胞能合成和積累次生產(chǎn)物。增長，另一方面要使細(xì)胞能合成和積累次生產(chǎn)物。故在生長的第一階段使用故在生長的第一階段使用生長培養(yǎng)基；生長培養(yǎng)基；第二階段使第二階段使用用生產(chǎn)培養(yǎng)基生產(chǎn)培養(yǎng)基一般來說增加培養(yǎng)基的一般來說增加培養(yǎng)基的N、P和和K濃度能促進(jìn)細(xì)胞濃度能促進(jìn)細(xì)胞生長，而適當(dāng)增加糖濃度那么有利于次生產(chǎn)物的合生長，而適當(dāng)增加糖濃度那么有利于次生產(chǎn)物的合成；而激素需根據(jù)實驗確定成；而激素需根據(jù)實驗確定適于植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的根底培養(yǎng)基主要是適于植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的根底培養(yǎng)基主要是B5和和ER 2優(yōu)化培養(yǎng)基優(yōu)化培養(yǎng)基 根本培養(yǎng)基根本培養(yǎng)基+激素激素+天然復(fù)合物天然復(fù)合物 3改善培養(yǎng)條件改善培養(yǎng)條件 對于任何一種細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)