國家開放大學(xué)電大本科《農(nóng)業(yè)微生物學(xué)》形考任務(wù)4試題及答案

1、國家開放大學(xué)電大本科農(nóng)業(yè)微生物學(xué)形考任務(wù)4試題及答案形考任務(wù)41實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌的革蘭氏染色的與要求了解革蘭氏染色的原理，掌握革蘭氏染色的主要操作步驟，學(xué)會(huì)革蘭氏染色的方法。二實(shí)驗(yàn)原理革蘭氏染色是細(xì)菌學(xué)中一個(gè)重要的鑒別染色，按照細(xì)菌對(duì)這種染色反應(yīng)的不同，可以把細(xì)菌區(qū) 分為二大類群，即革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，革蘭氏陽性菌能保留初染染色劑（結(jié)晶紫）于細(xì)胞中， 不受脫色劑（酒精）的影響，而被染成紫色或深藍(lán)色。革蘭氏陰性菌不能保留初染染色劑于細(xì)胞中，因 脫色劑的作用而洗出結(jié)晶紫，然后被另一種染色劑（番紅或藏花紅）染成紅色。也有一些菌種革蘭氏染 色是可變的。三，實(shí)驗(yàn)材料菌種:大腸桿菌（Escherichi

2、a coli ）、枯草芽大桿菌（Bacillus subtilis ）、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus *番紅染液。染色液：草酸鐐結(jié)晶紫染液、路戈氏碘液、95%酒精、器皿及材料：潔凈載玻片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、酒精燈、接種環(huán)、鑲子、無菌水、廢玻片缸、火柴等。洗瓶、染色盤、載玻片架、記號(hào)筆、75%消毒酒精瓶、儀器：顯微鏡。四，實(shí)驗(yàn)方法與步驟1. 涂片固定如簡單染色。2. 初染：在涂片處加1滴草酸較結(jié)晶紫染液，染色1分鐘，水洗。3. 媒染：用路戈氏碘液染色1分鐘，水洗。4 .脫色：將載玻片略傾斜，滴加95%酒精脫色，約30-60秒，洗至流下的脫色酒精剛好無色

3、為 止，立即水洗。5 .復(fù)染：用番紅染色液染色1 2分鐘，水洗后干燥。6 ,鏡檢。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果將顯微鏡下觀察到的2個(gè)菌種的革蘭氏染色結(jié)果填于下表中，并描述菌體的顏色、形態(tài)、排列方式。菌種名稱大腸桿菌枯草芽泡桿菌菌體形態(tài)圖菌體顏色紅色紫色菌體形態(tài)兩端著色鈍圓棒狀菌體排列方式單獨(dú)存在或成雙，不是長鏈狀鏈狀排列結(jié)論（G+或G-）G-G+形考任務(wù)5實(shí)驗(yàn)十四：土壤微生物的分離和計(jì)數(shù)的與要求學(xué)習(xí)用稀釋平板法從土壤中分離微生物，掌握平板計(jì)數(shù)方法，計(jì)算土壤中微生物的數(shù)量。二實(shí)驗(yàn)原理自然界中，土壤是微生物生活的良好環(huán)境，生活在土壤中的微生物無論是數(shù)量和種類都非常豐富的，因此從土壤中分離微生物是人類獲得微生物資源

4、的重要途徑。土壤中的微生物種類、數(shù)量與土壤的肥力、類型等有關(guān)。一般情況 下，肥沃的土壤中微生物種類和數(shù)量多，貧瘠的土壤中微生物種類和數(shù)量少。從土壤中分離微生物時(shí)，應(yīng)根據(jù)被分離 微生物特點(diǎn)，設(shè)計(jì)分離方法。實(shí)驗(yàn)采用稀釋平板法，從土壤中分離微生物，采用該方法分離土壤微生物的同時(shí)，還可 以計(jì)算出土壤中微生物的數(shù)量。三，實(shí)驗(yàn)材料培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白豚瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基、高氏合成一號(hào)瓊脂培養(yǎng)基。器皿及材料：菜園土（經(jīng)2mm分樣篩過篩）、90mL無菌水瓶（內(nèi)裝玻璃珠約20粒）、9mL無菌水試管、ImL無 菌吸管、無菌培養(yǎng)皿、乳酸溶液，鏈霉素溶液（20mg/mL）、1%重銘酸鉀溶液、天平、試管架、無菌

5、稱量紙、牛角匙、 酒精燈、玻璃刮鏟、記號(hào)筆、火柴等。四，實(shí)驗(yàn)方法與步驟土壤樣品逐續(xù)稀粹示意圖1. 土壤稀釋液的制備：稱取10克菜園土置于90mL無菌水瓶中，振蕩30分鐘，使微生物細(xì)胞充分分散，即成1（M 稀釋液；靜止片刻后（約2030秒鐘），取101稀釋液ImL置于9mL無菌水試管中，得10.2稀釋液，搖勻；按同樣 方法將土壤浸液稀釋到10-610-8稀釋度，每次更換1支無菌吸管（圖9-4）o圖9Y2. 平板接種培養(yǎng) 細(xì)菌平板培養(yǎng)：采用基內(nèi)接種法，將無菌培養(yǎng)皿編上1Q5、10.6和10/7三個(gè)稀釋度號(hào)碼，每個(gè)號(hào)碼設(shè)3個(gè)重復(fù), 共9皿。用ImL無菌吸管按無菌操作要求吸取107稀釋液各1毫升放入編

6、號(hào)10-7的3個(gè)培養(yǎng)皿中，同法吸取106稀釋 液各ImL放入編號(hào)10-6的3個(gè)培養(yǎng)皿中，再吸取10-5稀釋液各ImL放入編號(hào)10-5的3個(gè)培養(yǎng)皿中（由低濃度向高濃 度吸取菌液時(shí)，即由高稀釋度向低稀釋度吸取菌液時(shí)，可不必更換吸管)。然后在9個(gè)培養(yǎng)皿中以無菌操作方法分別倒 入已融化并冷卻至45笆50笆左右的牛肉膏蛋白豚瓊脂培養(yǎng)基，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿使菌液與培養(yǎng)基混合均勻。待冷凝后 將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)在28°C30笆的溫箱中，2448小時(shí)后觀察生長情況。計(jì)算菌落數(shù)量，計(jì)數(shù)時(shí)每皿菌落20100個(gè) 為宜。 真菌平板培養(yǎng)：方法同細(xì)菌，取土壤稀釋液10-4. 10-3和10-2分別接種，再倒入已熔化且冷

7、卻到45°C50C的 馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(培養(yǎng)基熔化后加乳酸調(diào)節(jié)pH至5.5-6.0左右，100mL培養(yǎng)大約加1滴乳酸，同時(shí)再加入20mg/mL 的鏈霉素溶液O.lmL,凝固后，將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)，置于25°C-28°C培養(yǎng)35天。檢查計(jì)數(shù)，每皿菌落以2060個(gè)為宜。 放線菌平板培養(yǎng)：采用表面接種法，按無菌操作要求，將已熔化且冷卻到45°C50°C的高氏一號(hào)瓊脂培養(yǎng)基(當(dāng) 培養(yǎng)基熔化后加1%重銘酸鉀12滴)倒入無菌培養(yǎng)皿中，共倒9皿，凝固后，進(jìn)行編號(hào)。用ImL無菌吸管按10.4、 10.3和102稀釋度吸0.1mL±壤稀釋液置于培養(yǎng)基表面，每

8、個(gè)稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù)。然后用無菌玻璃刮鏟涂布均勻。每 涂完一皿后，重新消毒玻璃刮鏟。操作完畢，將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)，置于25°C28C培養(yǎng)57天。檢查計(jì)數(shù)，每皿菌落以 20100菌落為宜。3. 土壤樣品中微生物數(shù)量的計(jì)算由于土壤含有一定的水分，且含水量不同，因此在計(jì)數(shù)時(shí)會(huì)產(chǎn)生差異。為了統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，便于比較，常以干土為標(biāo) 準(zhǔn)，在實(shí)驗(yàn)的同時(shí)測定土壤樣品含水量，然后計(jì)算出每克干土樣品含菌數(shù)。計(jì)算公式：土， 土、 菌落平均數(shù)* X稀釋倍數(shù)每克干土樣品含菌數(shù)cfii)=接種量iKmL) X (1-含水量*菌落平均值：為同一稀釋度3個(gè)重復(fù)的平均數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:土壤菌落數(shù)統(tǒng)計(jì)表稀釋液處理10-3IOIO'5123123123菌落數(shù)89921112017199172平均數(shù)96.66718.6679.333革蘭氏染色結(jié)果菌種對(duì)照A對(duì)照B分離菌株革蘭氏染色反 應(yīng)藍(lán)紫色/g+紅色/G藍(lán)紫色/G+形態(tài)長桿菌短桿菌長桿菌結(jié)論：被測土壤中的細(xì)菌數(shù)約為9.6667X1()4個(gè)，且其中含有革蘭氏陽性的桿菌。形考任務(wù)6主題討論：為什么說微生物是自然環(huán)境中的“清潔工” ？答：我們學(xué)過微生物都知道，微生物在自然界中無處不在，如果離開微生物，很難想想會(huì)是什么樣子。說微生物是白然環(huán)境的清潔工一點(diǎn)也不為過。為什么這樣說呢？1、自然界中每天都排除大量的動(dòng)物糞便，需要微生物分解，