色譜分析基礎

1、2022-2-22第第第第第第八八八八八八章章章章章章色譜分析基礎色譜分析基礎色譜分析基礎色譜分析基礎色譜分析基礎色譜分析基礎一、色譜定性分析一、色譜定性分析qualitative analysis in chromatograph二、色譜定量分析二、色譜定量分析quantitative analysis in chromatograph 第三節(jié)第三節(jié)第三節(jié)第三節(jié)第三節(jié)第三節(jié)色譜定性、定量分析色譜定性、定量分析色譜定性、定量分析色譜定性、定量分析色譜定性、定量分析色譜定性、定量分析fundamental of chromatograph analysis qualitative and qua

2、ntitative analysis in chromatograph2022-2-22一、一、一、一、一、一、色譜定性鑒定方法色譜定性鑒定方法色譜定性鑒定方法色譜定性鑒定方法色譜定性鑒定方法色譜定性鑒定方法1.1.利用純物質定性的方法利用純物質定性的方法 利用保留值定性利用保留值定性：通過對比試樣中具有與純物質相同保通過對比試樣中具有與純物質相同保留值的色譜峰，來確定試樣中是否含有該物質及在色譜圖留值的色譜峰，來確定試樣中是否含有該物質及在色譜圖中的位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對比。中的位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對比。 利用加入法定性利用加入法定性：將純物質加入到試

3、樣中，觀察各組分將純物質加入到試樣中，觀察各組分色譜峰的相對變化。色譜峰的相對變化。2022-2-22 2.2.2.2.2.2.利用文獻保留值定性利用文獻保留值定性利用文獻保留值定性利用文獻保留值定性利用文獻保留值定性利用文獻保留值定性 利用相對保留值利用相對保留值r r2121定性定性 相對保留值相對保留值r r2121僅與柱溫和固定液性質有關。在色譜手僅與柱溫和固定液性質有關。在色譜手冊中都列有各種物質在不同固定液上的保留數(shù)據(jù)，可以用冊中都列有各種物質在不同固定液上的保留數(shù)據(jù)，可以用來進行定性鑒定。來進行定性鑒定。2022-2-223.3.3.3.3.3.保留指數(shù)保留指數(shù)保留指數(shù)保留指數(shù)保

4、留指數(shù)保留指數(shù) 又稱又稱KovatsKovats指數(shù)指數(shù)( () )，是一種重現(xiàn)性較好的定性參數(shù)。，是一種重現(xiàn)性較好的定性參數(shù)。測定方法：測定方法： 將正構烷烴作為標準，規(guī)定其保留指數(shù)為分子中碳原子將正構烷烴作為標準，規(guī)定其保留指數(shù)為分子中碳原子個數(shù)乘以個數(shù)乘以100100（如正己烷的保留指數(shù)為（如正己烷的保留指數(shù)為600600）。）。 其它物質的保留指數(shù)（其它物質的保留指數(shù)（I IX X）是通過選定兩個相鄰的正構是通過選定兩個相鄰的正構烷烴，其分別具有烷烴，其分別具有Z Z和和Z Z1 1個碳原子。被測物質個碳原子。被測物質X X的調整保留的調整保留時間應在相鄰兩個正構烷烴的調整保留值之間如

5、圖所示時間應在相鄰兩個正構烷烴的調整保留值之間如圖所示：2022-2-22保留指數(shù)計算方法保留指數(shù)計算方法保留指數(shù)計算方法保留指數(shù)計算方法保留指數(shù)計算方法保留指數(shù)計算方法)lglglglg()()()()()()()(ZttttItttZRZRZRXRXZRXRZR111002022-2-224.4.4.4.4.4.與其他分析儀器聯(lián)用的定性方法與其他分析儀器聯(lián)用的定性方法與其他分析儀器聯(lián)用的定性方法與其他分析儀器聯(lián)用的定性方法與其他分析儀器聯(lián)用的定性方法與其他分析儀器聯(lián)用的定性方法 小型化的臺式色質譜聯(lián)用儀（小型化的臺式色質譜聯(lián)用儀（GC-MSGC-MS；LC-MSLC-MS） 色譜色譜- -

6、紅外光譜儀聯(lián)用儀；紅外光譜儀聯(lián)用儀； 組分的結構鑒定組分的結構鑒定SampleSample 58901.0 DEG/MINHEWLETTPACKARDHEWLETTPACKARD5972AMass Selective DetectorDCBA ABCDGas Chromatograph (GC)Mass Spectrometer (MS)SeparationIdentificationBACD2022-2-22二、二、二、二、二、二、 色譜定量分析方法色譜定量分析方法色譜定量分析方法色譜定量分析方法色譜定量分析方法色譜定量分析方法1. 1. 峰面積的測量峰面積的測量 （1）峰高）峰高（h）乘半

7、峰寬乘半峰寬（Y 1/2）法：法：近似將色譜峰當作等腰三角形。此法算出的面積是實際峰面積的0.94倍： A = 1.064 hY1/2 （2）峰高乘平均峰寬法：）峰高乘平均峰寬法：當峰形不對稱時，可在峰高0.15和0.85處分別測定峰寬，由下式計算峰面積： A = h（Y 0.15 + Y 0.85 ）/ 2 （3）峰高乘保留時間法：）峰高乘保留時間法：在一定操作條件下，同系物的半峰寬與保留時間成正比，對于難于測量半峰寬的窄峰、重疊峰（未完全重疊），可用此法測定峰面積： A = hbtR （4）自動積分和微機處理法）自動積分和微機處理法2022-2-222. 2. 2. 定量校正因子定量校正因

8、子定量校正因子定量校正因子定量校正因子定量校正因子 試樣中各組分質量與其色譜峰面積成正比，即：試樣中各組分質量與其色譜峰面積成正比，即： m i = fi Ai 絕對校正因子絕對校正因子：比例系數(shù)f i ，單位面積對應的物質量： f i =m i / Ai 定量校正因子與檢測器響應值成倒數(shù)關系： f i = 1 / Si 相對校正因子相對校正因子f i ：即組分的絕對校正因子與標準物質的絕對校正因子之比。 當mi、mS以摩爾為單位時，所得相對校正因子稱為相對摩爾校正因子（f M）,用表示；當mi、mS用質量單位時, 以（f W）,表示。ississiisiiAAmmAmAmfff /2022-

9、2-223.3.3.3.3.3.常用的幾種定量方法常用的幾種定量方法常用的幾種定量方法常用的幾種定量方法常用的幾種定量方法常用的幾種定量方法 （1 1 1）歸一化法：歸一化法：歸一化法：歸一化法：歸一化法：歸一化法： 特點及要求：特點及要求： 歸一化法簡便、準確；歸一化法簡便、準確；進樣量的準確性和操作條件的變動對測定結果影響不大；進樣量的準確性和操作條件的變動對測定結果影響不大；僅適用于試樣中所有組分全出峰的情況僅適用于試樣中所有組分全出峰的情況。100)(100%121 niiiiiniiAfAfmmmmc2022-2-22 （2 2 2）外標法外標法外標法外標法外標法外標法外標法也稱為標

10、準曲線法。外標法也稱為標準曲線法。特點及要求：特點及要求： 外標法不使用校正因子，外標法不使用校正因子，準確性較高準確性較高， 操作條件變化對結果準確操作條件變化對結果準確性影響較大。性影響較大。 對進樣量的準確性控制要對進樣量的準確性控制要求較高，適用于大批量試樣的求較高，適用于大批量試樣的快速分析?？焖俜治?。2022-2-22（3 3 3）內標法）內標法）內標法）內標法）內標法）內標法 內標物要滿足以下要求：內標物要滿足以下要求：（a）試樣中不含有該物質；試樣中不含有該物質；（b）與被測組分性質比較接近；與被測組分性質比較接近；（c）不與試樣發(fā)生化學反應；不與試樣發(fā)生化學反應；（d）出峰位

11、置應位于被測組分附近，且無組分峰影響。出峰位置應位于被測組分附近，且無組分峰影響。試樣配制：試樣配制：準確稱取一定量的試樣準確稱取一定量的試樣W，加入一定量內標物加入一定量內標物mS計算式：計算式：SsiisiSsiisiAfAfmmAfAfmm; 100100100% SsiiiSsiiiiiAfAfWmWAfAfmWmc2022-2-22內標法特點內標法特點內標法特點內標法特點內標法特點內標法特點(a) 內標法的準確性較高，操作條件和進樣量的稍許變動對內標法的準確性較高，操作條件和進樣量的稍許變動對定量結果的影響不大。定量結果的影響不大。(b) 每個試樣的分析，都要進行兩次稱量，不適合大批量試每個試樣的分析，都要進行兩次稱量，不適合大批量試樣的快速分析。樣的快速分析。(c) 若將內標法中的試樣取樣量和內標物加入量固定，則：若將內標法中的試樣取樣量和內標物加入量固定，則：常數(shù)SiiAAc %2022-2-22請選擇內容請選擇內容請選擇內容請選擇內容請選擇內容請選擇內容第一節(jié)第一節(jié) 色譜法概述色譜法概述gen