油田注入水細(xì)菌分析方法+絕跡稀釋法

1、ICs 75020E 14備案號：35089-2012 SY中華人民共和國石油天然氣行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SYT 0532-2012代替SYT()5321 993油田注入水細(xì)菌分析方法 絕跡稀釋法Analysis method of the bacteria for oilfield injecting waterDisappearing dilution method2012-01-04發(fā)布2012一03一01實施國家能源局發(fā)布SYT 0532-2012目次前言 I1范圍 - 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 一 14原理 - 15試劑和材料 26儀器和設(shè)備 27采樣- 28分析步驟 29結(jié)果計算 21

2、0質(zhì)量保證和控制 211檢測報告 3附錄A(規(guī)范性附錄)細(xì)菌計數(shù)方法 4SYT 0532-2012前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GBT 112009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫給出的規(guī)則 起草。本標(biāo)準(zhǔn)代替SYT 0532-1993油田注入水細(xì)菌分析方法絕跡稀釋法。與SYT 0532-1993 相比，主要變化如下：增加了重要提示內(nèi)容(見正文首頁警告)；修改了適用范圍內(nèi)容(見第1章，1993年版第1章)；修改了術(shù)語和定義(見第3章，1993年舨第3章)；修改了培養(yǎng)溫度及培養(yǎng)時間(見8 15，1993年版8 1 5)；修改了SYT 0532-1993中采樣部分內(nèi)容(見第7章，1993年版第7章)；刪除

3、了sY，T 0532 1993中液體試管法及其關(guān)聯(lián)內(nèi)容(1993年版第5章、第6章及8 2)；增加了質(zhì)量保證和控制內(nèi)容(見第10章)；增加了檢測報告內(nèi)容(見第1 1章)；刪除了SYT 0532-1993中多組測試瓶(管)細(xì)菌計數(shù)法舉例(1993年版A2A 4)；增加了生長指標(biāo)的確定原則(見A 22)；增加了二次重復(fù)法細(xì)菌計數(shù)表(見表A2)；修改了多組測試瓶細(xì)菌計數(shù)表的標(biāo)題(見表A 3-表A5，1993年版A 5A 7)。 本標(biāo)準(zhǔn)由采油采氣專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化委員會提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：大慶油田工程有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：韓明、朱淑萍。sYT 0532-2012油田注入水細(xì)菌分析方法 絕跡稀釋

4、法警告：使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問 題。使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧２⒈ＷC符合國家有關(guān)法律規(guī)定的條件。1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用絕跡稀釋方法分析油田注入水中細(xì)菌所用的試劑和材料、儀器和設(shè)備、采樣、分 析步驟、結(jié)果計算、質(zhì)量保證和控制、檢測報告。本標(biāo)準(zhǔn)適用于油田注入水中硫酸鹽還原菌、腐生菌、鐵細(xì)菌的分析。油田其他水中細(xì)菌分析及殺菌劑殺菌效果評價可參照執(zhí)行。2規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。SYT 5329

5、201 2碎屑巖油藏注水水質(zhì)指標(biāo)及分析方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。31細(xì)菌測試瓶bacteria testing bottle用于接種、培養(yǎng)細(xì)菌進(jìn)行菌量測定的培養(yǎng)瓶，每個測試瓶中均裝有9mL液體培養(yǎng)基。32陽性瓶與陰性瓶positive bottle and negative bottle經(jīng)過接種培養(yǎng)后，有細(xì)菌生長的測試瓶呈陽性變化，稱為陽性瓶；反之則稱為陰性瓶。33稀釋等級dilution grade在對水樣進(jìn)行多組逐級接種稀釋時，同樣稀釋倍數(shù)的一組平行樣瓶之間細(xì)菌含量在一個數(shù)量級 上，為一個稀釋等級。34生長指標(biāo)growth index菌量計數(shù)統(tǒng)計時所選取的三個稀釋等級，用

6、每一級陽性瓶個數(shù)計數(shù)所組成的一組數(shù)字(指數(shù))， 再乘以稀釋倍數(shù)，叫做生長指標(biāo)。4原理 將待測定的水樣用無菌注射器逐級注入到測試瓶中進(jìn)行接種稀釋，直到最后一級測試瓶中無細(xì)菌1SYT 0532-2012 生長為止。恒溫培養(yǎng)后，根據(jù)細(xì)菌生長情況和稀釋倍數(shù)，計算出水樣中細(xì)菌的數(shù)目。5試劑和材料試劑和材料包括： a)95乙醇(分析純)； b)脫脂棉(醫(yī)用) c)針頭；“_ d)硫酸鹽還原菌測試瓶 e)腐生菌測試瓶；f)鐵細(xì)菌測試瓶；g)注射器：1OraL(o 02mL分度)6儀器和設(shè)備儀器和設(shè)備包括： a)電熱恒溫培養(yǎng)箱：使用溫度3060，1 b)電冰箱。7采樣聰x玨。二采樣應(yīng)按SYT 532920饈；

7、熬溪；lj翁要寮囊綴8分析步驟81根據(jù)測試需要，對水樣中硫酸鹽還原菌、腐生藏、鐵紐蘑蕊徽單組實驗或多組實驗，多組實驗 中每組用三個以上裝有相應(yīng)菌類培養(yǎng)基的測試瓶依次編好序號豫瓤，82用75的酒精棉球?qū)⒎怊康臏y試瓶頊蓋及操榫者的手進(jìn)怒濺豢o83用無菌注射器吸取lmL水樣注入到一號瓶中，搖勻。84另取一支無菌注射器，從一號瓶中吸藏：lmL，g樣注入剄圣景羧，搖勻。85按上述操作依次接種稀釋到最后一令號躺蹙；放人35C憾瀛培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。硫酸鹽還原菌培養(yǎng)14d后觀察，測試瓶中液體由元色透明變雋羆憊，即表示有硫酸鼗還原菌生長。腐生菌培養(yǎng)7d后 觀察，測試瓶中液體由紅色變努黃色或渾濁，即表示有腐生菌生長

8、。鐵細(xì)菌培養(yǎng)7d后觀察，測試瓶 中液體產(chǎn)生渾濁或紅棕色沉淀，即浚添有鍰麴滿生長。9結(jié)果計算給出細(xì)菌含量范圍或準(zhǔn)確的細(xì)菌數(shù)目。細(xì)菌計數(shù)方法按附錄A執(zhí)行。10質(zhì)量保證和控制101通過分析一種受控的質(zhì)控樣品保證儀器的性能和檢測步驟的準(zhǔn)確。102各檢測機構(gòu)應(yīng)制定質(zhì)量控制和質(zhì)量評價方法，并能確保檢測結(jié)果的可靠性。2SYT 0532-201211檢測報告檢測報告至少應(yīng)給出以下幾個方面的內(nèi)容 a)識別被檢測樣品的全部資料； b)使用的標(biāo)準(zhǔn)(包括發(fā)布或出版年號)；c)使用的方法； d)檢測結(jié)果； e)與規(guī)定的分析步驟韻差異 f)在檢測中觀察弼的算鬻魏象I g)檢測日期。SN fT 0532-2012附錄A (

9、規(guī)范性附錄) 細(xì)菌計數(shù)方法A1一個試樣單組測試瓶細(xì)菌計數(shù)法 測細(xì)菌含量范圍，宜用一個試樣做五個稀釋等級，按稀釋等級高低依次排列。如果一號瓶有細(xì)菌生妊，其余四個瓶無菌生長，表明細(xì)菌含量范圍為1個mL-10個mL。若二號瓶有細(xì)菌生長，則 細(xì)菌含量范圍為1()1個mL102個mL。依此類推，細(xì)菌含量范圍計數(shù)見表A 1。表A1單組測試瓶細(xì)菌計數(shù)陽性瓶序號 菌數(shù)個mI。1101101102102103 四 103104 五 1041護(hù)A2一個試樣多組測試瓶細(xì)菌計數(shù)法 A21為較準(zhǔn)確地測定細(xì)菌含量，應(yīng)采用二次重復(fù)法、三次重復(fù)法、四次重復(fù)法或五次重復(fù)法。二次重復(fù)法是指每個水樣同時做二個平行樣試驗；三次重復(fù)法

10、是指每個水樣同時做三個平行樣試驗；依 此類推。水樣應(yīng)稀釋至不長菌的稀釋等級為好。 A22在進(jìn)行多組測試瓶細(xì)菌計數(shù)時，確定生長指標(biāo)應(yīng)遵循的原則：從出現(xiàn)陰性瓶的稀釋等級開始 向后選取三級稀釋等級，各稀釋等級以陽性瓶數(shù)量進(jìn)行計數(shù)而得到指數(shù)(遇000情況時需向前順推一 級計數(shù)，不足三個稀釋等級時，也需向前順推至達(dá)到三個等級時止)，指數(shù)再乘以水樣的稀釋倍數(shù)1(r(n為指數(shù)位置之前所稀釋的次數(shù))，得出生長指標(biāo)(根據(jù)SYT 5329 1994中5 6 5 3總結(jié)歸 納)。查相對應(yīng)的細(xì)菌計數(shù)表，把由指數(shù)查得的菌數(shù)代入，就得出了水樣中該種細(xì)菌含量(個mL)。 A23多組測試瓶細(xì)菌計數(shù)見表A 2表A 5。表A2二

11、次重復(fù)法細(xì)菌計數(shù)指數(shù) 菌數(shù)，個mL指數(shù) 菌數(shù)，個mL指數(shù) 菌數(shù)，個mI00() 0 011 01 3 21113 00010 51112() 212 20 0010 0 512()2 022() 25 0 ()110 91 21 3 022170 0020 0 92(】02 5222 110(10I)0 6 2015 0101l 221(】6()注：I自SYT 53292012。SYT 0532m2012表A3三次重復(fù)法細(xì)菌計數(shù)指數(shù) 菌數(shù)，個mL指數(shù) 菌數(shù)，個mI。指數(shù) 菌數(shù)，個mL000 0 01 221 8232 4 0001()3 1 232 2233 4 5002 0 61 301 6

12、30() 2 5003 0 8 1311 93014()01 00 31 322 131)2 6 5 ()110 6 1332 4 303 10 0 ()12 O 8200 ()9 310 4 5020 I)6 2(H 1 4311 7 5 ()21(】8 202 2 0312 1】50221 021【)1 5313 16 01()()()4 2112 0320 9 51(】10 721 2 3 0 32115 01021 1213 3 44 0 322 20(】110()722(1 2(】 323 30 O1111 12213 O330 25 01121 4222 3 533145 0113

13、1 7223 4【】332 110 01201 1230 3 0333 140 01211 5231 3 5表A4四次重復(fù)法細(xì)菌計數(shù)指數(shù) 菌數(shù)，個ml。指數(shù) 菌數(shù)，個rnl。指數(shù) 菌數(shù)，個mL()00 0 0t_40 1 43313 5001O 2 1411 7332 4 0002 ()5 200 0 6333 5 0 ()03 O 7 201-9 340 3 5010 0 2202 1 23414 5011 0 52031 6400 2 5012 0 7210 ()9 4013 5013 ()9 2111 34025()020 0 521 2 1 6403 7 0 (】21O 721 32【

14、1 410 3 5022()92201 34115 5030f1 7 2211 64128()031f)9 222 2 0413 11 0040 0 9230 1 7414 14()100 0 32312 0420 6 01f)10 524(】2() 4219 5102(】8 2413 O 422 13 01()31 0300 1 1423 14 0110()53()11 6424 20 0111()8 302 2 0 430 151121 0303 2 5431 16 51131 331 r) 1 6432 20 01 2()()8 3112 O434 35(11211 1312 3() 4

15、40 25 01221 3313 3 544140 01231 632() 2() 442 70 01301 13213 0443140()1311 4322 3 5444 16n(11321 6330 3 0sYT 0532-2012表A5五次重復(fù)法細(xì)菌計數(shù)指數(shù) 菌數(shù)，個mL指數(shù) 菌數(shù)，個mL指數(shù) 菌數(shù)，個mL000 0 0 2311 4500 2 50010 2 240 1 45013 0002 0 4300 O 8502 4 001002 3011 1503 6 0011 0 4302 1 4504 7 5012 0 6310 1 1510 3 5020 O 4 3111 45114 5

16、021 0 6312 1 7512 6 003006 313 2 0513 8 5100 0 2320 1 4520 5 O1010 4322 2 O5217 0102 0 6330 1 7522 9 5103 O 83312 O523 12 0110 0 4340 2 0524 15 01110 6341 2 5525 17 5112 0 8350 2 5530 8 O120 0 6400 1 3 53111 0121O 8 401 1 7532 14 01221 O402 2【) 53317 5130 0 8403 2 5534 20 01311 0410 1 7535 25 01401 1411 2 0540 13 0200 O 5412 2 554117 02010 7420 2 0542 25 0202 0 9 4212 5543 30 02031 2422 30 544 35 0210 0 7430 2 5545 45 02110 94313 0550 25 02121 2432 4 055135 0220 0 9440 3 5552