島津LC-10AT型HPLC操作規(guī)程2

1、12目的目的:規(guī)范島津規(guī)范島津LC-10AT型高效液相色譜儀的使用。型高效液相色譜儀的使用。范圍范圍:適用于島津適用于島津LC-10AT型高效液相色譜儀的使用。型高效液相色譜儀的使用。職責(zé)職責(zé):操作操作員對本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。員對本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。3 本系統(tǒng)由本系統(tǒng)由1個個LC-10ATvp溶劑溶劑輸送泵輸送泵、Rheodyne 7725i手動手動進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥、SPD-10Avp紫外紫外-可可見見檢測器檢測器、N2000色譜數(shù)據(jù)色譜數(shù)據(jù)工作站工作站和和電腦電腦等組成等組成，另外還包括打印機(jī)。，另外還包括打印機(jī)。41 、準(zhǔn)備所需的流動相，用合適的準(zhǔn)備所需的流動相，用合適的0.45m濾膜濾膜過濾，超

2、聲脫氣過濾，超聲脫氣20min。2 、根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜色譜柱（注意方向）和定柱（注意方向）和定量環(huán)。量環(huán)。3、 配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液，用合適的配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液，用合適的0.45m濾膜過濾。濾膜過濾。（注意（注意腐蝕性與有機(jī)系的的溶劑）腐蝕性與有機(jī)系的的溶劑）4 、檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。常。5 接通電源，依次開啟不間斷接通電源，依次開啟不間斷電源電源、 泵泵、檢測器檢測器，待，待泵和檢測器自檢結(jié)束后，打開打印機(jī)、電腦顯示器、主泵和檢測器自檢結(jié)束后，打開打印機(jī)、電腦顯示器、

3、主機(jī)，最后打開色譜機(jī)，最后打開色譜工作站工作站。三、三、 開機(jī)開機(jī)61、 波長設(shè)定波長設(shè)定：在檢測器顯示初始屏幕時(shí)，按在檢測器顯示初始屏幕時(shí)，按func鍵鍵1次次，波長波長數(shù)字鍵數(shù)字鍵閃閃動，動，輸入所需波長值，按輸入所需波長值，按Enter鍵確認(rèn)。按鍵確認(rèn)。按CE鍵退出到初始屏幕。鍵退出到初始屏幕。2 、流速設(shè)定：流速設(shè)定：在泵顯示初始屏幕時(shí)，按在泵顯示初始屏幕時(shí)，按func鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速（流速一般流速（流速一般為為超過超過1ml/min），按），按Enter鍵確認(rèn)。按鍵確認(rèn)。按CE鍵退出鍵退出 71： 將管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動相的儲液瓶中；將管路

4、的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動相的儲液瓶中；2 ：逆時(shí)針轉(zhuǎn)動泵的排液閥逆時(shí)針轉(zhuǎn)動泵的排液閥180，打開排液閥；，打開排液閥；3 ：按泵的按泵的purge鍵，鍵，pump指示燈亮，泵大約以指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的的高高流速沖洗，流速沖洗，3min（可設(shè)定）后自動停止（可設(shè)定）后自動停止，一般視管路無氣泡即可。，一般視管路無氣泡即可。4 ：將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。5 ：如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。6 ：如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中如按以上方法不

5、能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為，設(shè)流速為5ml/min，按，按pump鍵，沖洗鍵，沖洗3min后再按后再按pump鍵停泵，重鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。81、查看基線查看基線：1.1：按按N2000色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程打開打開“在線色譜工作站在線色譜工作站”軟件，軟件，1.2：輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，1.3：按下按下“數(shù)據(jù)收集數(shù)據(jù)收集”頁的頁的 按鈕。按鈕。 92 、 2.1 ：按泵的按泵的pump鍵，泵啟動，鍵，泵啟動，pump指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的指示

6、燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動相沖洗系統(tǒng)，一般最少需流動相沖洗系統(tǒng)，一般最少需6倍柱體積倍柱體積的流動相。的流動相。 2.2 ：檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。 2.3 ：觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應(yīng)觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應(yīng)不超過不超過1MPa。如超過。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按檢查管路后再檢查管路后再操作。操作。 2.4 ：觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移0.01mV/min，噪聲為，噪聲為25mmol/L的緩沖液的緩沖液4.每天沖洗柱每天沖

7、洗柱5.穩(wěn)定進(jìn)樣條件穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動相調(diào)節(jié)流動相6.采用保護(hù)柱采用保護(hù)柱391.流速增加流速增加2.樣品超載樣品超載3.鍵合相流失鍵合相流失4.流動相組成變化流動相組成變化5.溫度增加溫度增加1.檢查泵檢查泵,重新設(shè)定流速重新設(shè)定流速2.降低樣品量降低樣品量3.流動相流動相PH值保持在值保持在37.5檢查柱的方向檢查柱的方向4.防止流動相蒸發(fā)或沉淀防止流動相蒸發(fā)或沉淀5.柱恒溫柱恒溫401.流速下降流速下降2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化硅膠柱上活性點(diǎn)變化3.鍵合相流失鍵合相流失4.流動相組成變化流動相組成變化5.溫度降低溫度降低1.管路泄漏管路泄漏,更換泵密封圈更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡排除泵內(nèi)

8、氣泡2.用流動相改性劑用流動相改性劑,如加三如加三乙胺乙胺,或采用堿至鈍化柱或采用堿至鈍化柱3.流動相流動相PH值保持在值保持在37.5檢查柱的方向檢查柱的方向4.防止流動相蒸發(fā)或沉淀防止流動相蒸發(fā)或沉淀5.柱恒溫柱恒溫411.樣品體積過大樣品體積過大2.樣品溶劑過強(qiáng)樣品溶劑過強(qiáng)3.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效5.進(jìn)樣器損壞進(jìn)樣器損壞1.用流動相配樣用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的總的樣品體積小于第一峰的15%2.采用較弱的樣品溶劑采用較弱的樣品溶劑3.更換色譜柱更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件采用較弱腐蝕性條件4.更換燒結(jié)不銹鋼更換燒結(jié)

9、不銹鋼,加在線過濾器加在線過濾器,過濾樣品過濾樣品5.更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子421.進(jìn)樣閥殘余峰進(jìn)樣閥殘余峰2.樣品中未知物樣品中未知物3.柱未平衡柱未平衡4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)氧化氧化(肽譜肽譜)5.水污染水污染(反相反相)1.每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的改進(jìn)閥和樣品的清洗清洗2.處理樣品處理樣品3.重新平衡柱重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑用流動相作樣品溶劑 (尤其是離尤其是離子對色譜子對色譜)4.每天新配每天新配,用抗氧化劑用抗氧化劑5.通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級級的水的水431.氣泡氣泡(尖銳峰尖銳

10、峰)2.污染污染(隨機(jī)噪聲隨機(jī)噪聲)3.檢測器燈連續(xù)噪聲檢測器燈連續(xù)噪聲4.電干擾電干擾(偶然噪聲偶然噪聲)5.檢測器中有氣泡檢測器中有氣泡1.流動相脫氣流動相脫氣,加柱后背壓加柱后背壓2.清洗柱清洗柱,凈化樣品凈化樣品,用用HPLC級試劑級試劑3.更換氘燈更換氘燈4.采用穩(wěn)壓電源采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的檢查干擾的來源來源(如水浴等如水浴等)5.流動相脫氣流動相脫氣,加柱后背壓加柱后背壓441.柱超載柱超載2.峰干擾峰干擾3.硅羥基作用硅羥基作用4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效5.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道6.死體積或柱外體積過大死體積或柱外體積過大7.柱效下降柱效下降1

11、.降低樣品量降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相增加柱直徑采用較高容量的固定相2.清潔樣品清潔樣品,調(diào)整流動相調(diào)整流動相3.加三乙胺加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相流動相PH值值,鈍化樣品鈍化樣品4.更換燒結(jié)不銹鋼更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器加在線過濾器,過濾樣品過濾樣品5.更換色譜柱更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件采用較弱腐蝕性條件6.連接點(diǎn)降至最低連接點(diǎn)降至最低,對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管采用細(xì)內(nèi)徑的連接管7.用較低腐蝕條件用較低腐蝕條件,更換柱更換柱,采用保護(hù)柱采用保護(hù)柱451.進(jìn)樣體積過大進(jìn)樣體積過大2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢4.檢測器時(shí)間常數(shù)過大檢測器時(shí)間常數(shù)過大1. 用流動相配樣用流動相配樣,總的樣品體積小總的樣品體積小于第一峰的于第一峰的15%2.進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散3.設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)點(diǎn)4.設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的寬的10%465.流動相粘度過高流動相粘度過高6.檢測池體積過大檢測池體積過大