細(xì)胞生物學(xué)研究中的激活劑和抑制劑

1、細(xì)胞生物學(xué)研究中的激活劑和抑制劑Anandika Dhaliwal (anandika dot dhaliwal at gmail dot com)Rutgers University, New Jersey, United States譯者王秀英 (mary at labome dot com)美國(guó)新澤西州普林斯頓合原研究有限責(zé)任公司 (Synatom Research)DOI/10.13070/.3.185日期更新 : 2015-10-19; 原始版 : 2013-04-27引用實(shí)驗(yàn)材料和方法 2013;3:185摘要在細(xì)胞生物學(xué)研究中使用的化學(xué)激活劑和抑制

2、劑的綜述。英文摘要A comprehensive review of chemical activators and inhibitors used in cell biology research.介紹細(xì)胞生物學(xué)研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、生理特性及細(xì)胞功能。它涉及到對(duì)細(xì)胞器、細(xì)胞與周圍環(huán)境間相互作用、生命周期、分化及死亡的研究。細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和生物化學(xué)等其它生物學(xué)領(lǐng)域是密切相關(guān)的。放大圖 1. 真核細(xì)胞骨架。肌動(dòng)蛋白纖維顯示為紅色，微管為綠色，核為藍(lán)色。肌動(dòng)蛋白染色使用的是羅丹明-鬼筆環(huán)肽，微管使用的是連接有Alexa488的抗微管蛋白著色劑，DNA則使用的是Hoe

3、chst染料。對(duì)于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的研究者而言，為了更加全面地理解細(xì)胞的功能、細(xì)胞的信號(hào)傳遞以及控制細(xì)胞命運(yùn)、功能及表型的胞內(nèi)機(jī)制，抑制劑與激活劑是至關(guān)重要的研究工具。許多抑制劑和激活劑都被廣泛用于研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)及功能。這里我們對(duì)真核細(xì)胞中各種細(xì)胞生物學(xué)研究如細(xì)胞內(nèi)吞、分泌、粘附、細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體研究中常用的抑制劑和激活劑進(jìn)行了綜述。細(xì)胞骨架細(xì)胞骨架為細(xì)胞提供了特定的結(jié)構(gòu)與形狀。真核細(xì)胞主要有三種細(xì)胞骨架纖維：1）微絲，2）中間絲和3）微管。· 微絲（肌動(dòng)蛋白絲）：這是細(xì)胞骨架中最細(xì)的纖維。它們由肌動(dòng)蛋白亞基的線性聚合物所組成，通過(guò)在纖維一端的伸長(zhǎng)并伴隨著另一端的收縮來(lái)

4、產(chǎn)生力，從而使其間的纖維產(chǎn)生凈移動(dòng)。· 中間絲：這種纖維的平均大小為直徑10納米并且比肌動(dòng)蛋白絲更穩(wěn)定（是緊密結(jié)合的），是細(xì)胞骨架的異質(zhì)成分。中間絲負(fù)責(zé)組織細(xì)胞內(nèi)部的三維結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器，是核纖層的結(jié)構(gòu)性組成部分。它們也參與一些細(xì)胞-細(xì)胞間和細(xì)胞-基質(zhì)間的連接過(guò)程。· 微管：它們是直徑為23nm的空心圓柱，大多數(shù)情況下由13條原纖維組成，而這些原纖維則是alpha微管蛋白和beta微管蛋白的聚合物。它們具有很高的動(dòng)態(tài)活性，通過(guò)結(jié)合GTP來(lái)進(jìn)行聚合反應(yīng)并通常由中心體來(lái)組織。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商細(xì)胞松弛素D（C30H37NO6）肌動(dòng)蛋白結(jié)合于肌動(dòng)蛋白核

5、和F-肌動(dòng)蛋白的生長(zhǎng)端，從而抑制聚合反應(yīng)。誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白解聚。溶于DMSO和乙醇。抑制收縮。抑制依賴于p-53的細(xì)胞通路。引起G1-S轉(zhuǎn)化過(guò)程中的細(xì)胞周期阻滯。抑制胰島素刺激的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。1-3, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Tocris Bioscience, Enzo Life Science, Invitrogen, Santa Cruz Biotechnology, Cayman ChemicalLantraculin A（C22H31NO5S）肌動(dòng)蛋白擾亂微絲介導(dǎo)的過(guò)程。與G-肌動(dòng)蛋白單體形成1:1的復(fù)合物（Kd = 200 nM）。溶于DMS

6、O和乙醇。比細(xì)胞松弛素的抑制效果強(qiáng)10-100倍。抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。比Lantraculin B的效果更強(qiáng)。1-4, Invitrogen, Tocris Bioscience, Sigma-Aldrich, Cayman Chemical, Santa Cruz Biotechnology, EMD/MilliporeLantraculin B（C20H29NO5S）肌動(dòng)蛋白體外反應(yīng)中抑制肌動(dòng)蛋白的聚合（Kd = 60 nM）。擾亂微絲的組織和微絲介導(dǎo)的過(guò)程。溶于DMSO、甲醇或乙醇。比細(xì)胞松弛素的抑制效果強(qiáng)10-100倍。在該復(fù)合物持續(xù)存在的情況下被血清緩慢失活并導(dǎo)致短暫的

7、誘導(dǎo)變化。5-7, Invitrogen, Sigma-Aldrich, Cayman Chemical, Santa Cruz Biotechnology, EMD/Millipore, Enzo Life ScienceWiskostatin（C17H18Br2N2O）肌動(dòng)蛋白選擇性地抑制N-WASP（Wiskott-Aldrich綜合癥蛋白（WASp）家族成員）并抑制Arp2/3復(fù)合物的活化。該分子阻斷肌動(dòng)蛋白絲的組裝。在DMSO中溶解度可達(dá)100 mM。同樣抑制PIP2誘導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白聚合反應(yīng)(EC50  4M)。抑制依賴于肌動(dòng)蛋白的細(xì)胞功能（遷移、運(yùn)輸、吞噬、內(nèi)褶）。8-10

8、, Affix Scientific, Enzo Life Science, Sigma-Aldrich, Tocris BioscienceMycalolide B（C52H74N4O17）肌動(dòng)蛋白它選擇性地將F-肌動(dòng)蛋白徹底解聚成G-肌動(dòng)蛋白。 與肌動(dòng)蛋白以1:1的摩爾比進(jìn)行結(jié)合（Kd=13-20 nM）。溶于DMSO、甲醇或異丙醇。抑制肌動(dòng)球蛋白ATP酶。11-13, Santa Cruz Biotechnology, Enzo Life ScienceNocodazole（C14H11N3O3S）微管抑制微管的動(dòng)態(tài)變化并促使微管解聚。與微管蛋白結(jié)合并阻止兩個(gè)鏈間二硫鍵中任意一個(gè)的形成。

9、在DMSO的溶解度達(dá)10 mg/ml。有絲分裂抑制劑。將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。抑制各種癌癥相關(guān)的激酶，包括ABL、c-KIT、BRAF、MEK1、MEK2和MET。14-17, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, Cell Signaling Technology, EMD/Millipore長(zhǎng)春堿（C46H58N4O9 · H2SO4）微管解聚微管。與微管蛋白結(jié)合并誘導(dǎo)其自締形成螺旋形聚合體，抑制微管組裝。溶于水和甲醇。通過(guò)阻斷有絲分裂紡錘體的形成將細(xì)胞周期阻滯于G2/M期。在一些腫瘤細(xì)胞系中誘導(dǎo)凋亡。抑制自噬體的成熟。16, 

10、;18, 19, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD/Millipore, Santa Cruz Biotechnology。秋水仙堿（C22H25NO6）微管與微管蛋白結(jié)合并阻止其聚合在乙醇中溶解度達(dá)50 mg/ml，在水中溶解度可達(dá)100 mM，DMSO中溶解度可達(dá)100 mM。有絲分裂抑制劑。在一些正常的及癌癥細(xì)胞系中誘導(dǎo)凋亡20-22, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD/Millipore長(zhǎng)春新堿（C46H56N4O10 · H2SO4）微管能與微管蛋白結(jié)合并抑制微管形成的吲

11、哚生物堿。解聚微管。溶于甲醇和水。延遲細(xì)胞周期的進(jìn)程。在人類淋巴瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡。23-25, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD/Millipore, Santa Cruz Biotechnology。表1。 常用的細(xì)胞骨架抑制劑。激活劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商Jasplakinolide（C36H45BrN4O6）肌動(dòng)蛋白在體外誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白聚合及穩(wěn)定。在體內(nèi)同樣誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白單體聚合成F-肌動(dòng)蛋白。在DMSO中溶解度>2 mg/ml。一種具有殺菌、殺蟲(chóng)、抗癌特性的環(huán)羧酚酸肽。無(wú)熒光且具有細(xì)胞透性的F-肌動(dòng)蛋白。26-29, S

12、igma-Aldrich, EMD/Millipore, Santa Cruz Biotechnology, Invitrogen, Tocris Bioscience紫杉醇（Taxol）（C47H51NO14）微管結(jié)合于-微管蛋白的N端，促進(jìn)微管組裝并抑制微管蛋白分解溶于DMSO和甲醇。抗腫瘤和抗白血病試劑。將細(xì)胞周期阻止于G2/M期。導(dǎo)致異常的有絲分裂并且有時(shí)會(huì)引起凋亡。30-32, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Cell Signaling Technolgy, Cytoskeleton Inc.鬼筆環(huán)肽（C35H48N8O11S）肌動(dòng)蛋白與聚合的F-肌動(dòng)蛋

13、白結(jié)合并保持其穩(wěn)定，防止解聚的發(fā)生（F-肌動(dòng)蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)镚-肌動(dòng)蛋白）溶于乙醇和甲醇。從真菌中分離出的有毒雙環(huán)七肽。干擾富含肌動(dòng)蛋白的結(jié)構(gòu)行使功能。鬼筆環(huán)肽的偶聯(lián)物被用作確認(rèn)纖維狀肌動(dòng)蛋白的探針。33-35, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, Enzo Life Science表2。 常用的細(xì)胞骨架激活劑。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）是真核生物中一種會(huì)形成互連的膜囊泡網(wǎng)絡(luò)的細(xì)胞器。它參與了細(xì)胞物質(zhì)的合成、修飾和運(yùn)輸。它從細(xì)胞膜開(kāi)始伸展，經(jīng)過(guò)細(xì)胞質(zhì)，一直與核膜相連。取決于細(xì)胞類型、細(xì)胞功能和

14、細(xì)胞需求，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有多種不同的功能。在結(jié)構(gòu)與功能上，它由兩種區(qū)域組成。· 粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)：它是一系列扁平狀囊泡且胞漿側(cè)由核糖體組成。核糖體是細(xì)胞中的蛋白質(zhì)合成位點(diǎn)。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)加工膜及分泌蛋白，在某些白細(xì)胞中產(chǎn)生抗體，而在胰腺細(xì)胞中產(chǎn)生胰島素。其它功能還包括組裝過(guò)程中的起始N-糖基化和溶酶體酶的加工。· 滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)：它是一個(gè)光滑的微管網(wǎng)絡(luò)并且不包含核糖體。它通常與粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相連，是那些負(fù)責(zé)將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)物運(yùn)輸?shù)讲煌稽c(diǎn)的囊泡的過(guò)渡區(qū)域。它具有多種功能，包括脂質(zhì)合成、碳水化合物代謝、鈣離子濃度調(diào)節(jié)、藥物解毒和受體附著到細(xì)胞膜蛋白。在肌肉中，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輔助肌肉細(xì)胞的收縮，在腦細(xì)胞中則合成

15、雄性和雌性荷爾蒙。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)的蛋白折疊一旦失衡就會(huì)引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的應(yīng)激信號(hào)傳導(dǎo)通路或應(yīng)激響應(yīng)被稱作未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）。最初的UPR只是嘗試通過(guò)停止蛋白翻譯并激活可增加參與蛋白折疊的分子伴侶的信號(hào)通路來(lái)恢復(fù)細(xì)胞的正常運(yùn)作。當(dāng)UPR的這種初始嘗試失敗而擾亂還在持續(xù)的情況下，UPR就會(huì)開(kāi)始誘導(dǎo)凋亡。下面提到的抑制劑是用于抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能或誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的，而提到的激活劑則用于誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能或抵抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的：抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商Eeyarestatin I（C27H25Cl2N7O7）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解（ERAD）靶向p97相關(guān)的去泛素化過(guò)程（P

16、AD）并抑制依賴于ataxin-3（atx3）的去泛素化過(guò)程。抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中Sec61介導(dǎo)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)。在DMSO中溶解度達(dá)100mM，在乙醇中溶解度達(dá)5mM。在淋巴樣細(xì)胞系、BJAB、HBL-2、JEKO-1、Jurkat、KMS-12、MINO以及慢性淋巴細(xì)胞白血病中的原代白血病細(xì)胞中誘發(fā)細(xì)胞毒性。通過(guò)促凋亡蛋白NOXA誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。36-40, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Tocris Bioscience, Santa Cruz BiotechnologyDBeQ（C22H20N4）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解途徑以可逆且ATP競(jìng)爭(zhēng)性的方式（Ki = 3.

17、2 µM）抑制ATP酶p97活性（對(duì)于野生型或C522A p97的IC50 = 1.6 µM）DMSO中溶解度達(dá)100 mM。在RPMI8226、HeLa和HEK29細(xì)胞中抑制細(xì)胞增殖。抑制caspase 3/7活性及凋亡。41, 42, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Tocris Bioscience, BioVision Inc.Xestospongin C（C28H50N2O2）血管舒緩激肽和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣外流可逆地抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫(kù)中的血管舒緩激肽-和氨甲酰膽堿-Ca2+外流。溶于DMSO、乙醇和甲醇。大環(huán)雙-1-oxaqu

18、inolizidine的合成形式。具有膜通透性?？赡娴匾种艻P3受體。43-45, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Cayman Chemicals, Tocris BioscienceKifunensine（C8H12N2O6）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解（ERAD）抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)的甘露糖苷酶活性。水（雙蒸熱水）中溶解度達(dá)50 mM。生物堿化合物。選擇性抑制負(fù)責(zé)加工I類糖蛋白的-甘露糖苷酶。46, 47, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Cayman Chemicals, Tocris Bioscience, Santa Cruz Bi

19、otechnology.衣霉素（C39H60N4O16）蛋白折疊誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。抑制N-糖基化并阻斷N-糖苷蛋白-糖類鍵的形成。溶于DMF、DMSO和吡啶。衣霉素A、B、C和D的混合物。引起G1期阻滯。抑制N-乙酰葡糖胺磷酸轉(zhuǎn)移酶（GPT）。劑量依賴性地抑制DNA合成。48-50, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD/Millipore, Santa Cruz Biotechnology。毒胡蘿卜素（C34H50O12）肌漿網(wǎng)Ca2+ ATP酶（SERCA）抑制肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶。抑制自噬過(guò)程并誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。溶于DMSO和乙醇?？蓾B透細(xì)

20、胞。誘導(dǎo)凋亡。被用于誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞自噬。51-53, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Tocris Bioscience.ERO1抑制劑I, Erodoxin（C7H5BrN2O5）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化酶1抑制劑選擇性抑制酵母內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化酶1（ERO1）。對(duì)小鼠ERO1（IC50 = 400 µM）抑制較弱溶于DMSO。體外抑制依賴于ERO1的硫氧還蛋白-1（Trx1）氧化活性。與參與蛋白折疊、糖基化和細(xì)胞壁合成的基因聚類。54, EMD/Millipore兔抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白72（623-638）多克隆抗體識(shí)別小鼠大腦、脾臟、睪丸和大鼠腦、肌肉、脾、睪丸組織中

21、72 kDa的ERp72蛋白。以及人宮頸上皮細(xì)胞（HeLa）、人成纖維細(xì)胞（A431）、人胸腺細(xì)胞（Hs67）和小鼠成纖維細(xì)胞（3T3）的細(xì)胞裂解物。55-57, EMD/Millipore, US Biological, Novus Biologicals.表3。 常用的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)抑制劑激活劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商5,8,11-二十碳三炔酸（C20H28O2）在MDCK細(xì)胞中引發(fā)Ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中釋放。引起Ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和其它濃度達(dá)30 µM的鈣庫(kù)中釋放出來(lái)乙醇中溶解度達(dá)25mg/ml，DMSO中溶解度達(dá)25mg/ml或溶于二甲基甲酰胺。脂肪氧化酶的抑制

22、劑。在較高濃度下抑制環(huán)氧合酶。58, 59, Sigma-Aldrich, Cayman Chemicals, Enzo Life SciencesSalubrinal（C21H17Cl3N4OS）防止內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護(hù)細(xì)胞免受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所誘導(dǎo)的凋亡（EC50  15 M）。溶于DMSO。選擇性抑制使真核翻譯啟動(dòng)因子2亞基（eIF-2）去磷酸化的磷酸酶復(fù)合體60-62, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, EMD/Millipore.?；敲撗跄懰幔═UDCA）（C26H44NaNO6S）抵抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。溶于水。

23、被用作去垢劑來(lái)使脂質(zhì)和膜結(jié)合蛋白增溶。60-62, Sigma Aldrich, Santa Cruz Biotechnology, EMD/Millipore.表4。 常用的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激活劑。高爾基體高爾基體是真核細(xì)胞中的一種細(xì)胞器，是細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)的一部分。高爾基體長(zhǎng)約1 µM，并由兩部分組成：被稱為潴泡的扁平膜囊和膜封閉的小泡。它在各種蛋白分泌前的加工過(guò)程中起著重要的作用。高爾基體的各種功能包括：它從來(lái)自粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、含有蛋白質(zhì)的囊泡處接收蛋白并進(jìn)行進(jìn)一步修飾。細(xì)胞合成的各種大分子在分泌前或被送到各自目的地之前，都由它負(fù)責(zé)修飾、富集、分類及包裝。它通過(guò)加入糖基和磷酸基團(tuán)來(lái)對(duì)蛋白修飾。它

24、在動(dòng)物細(xì)胞胞外基質(zhì)的蛋白聚糖合成中起著重要作用。植物細(xì)胞壁中的多糖合成位點(diǎn)。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商1,3-環(huán)己烷雙甲胺（CBM）（C6H10(CH2NH2)2 ）通過(guò)高爾基體運(yùn)輸?shù)劫|(zhì)膜。在體內(nèi)和體外都可以抑制外被體蛋白與高爾基體膜結(jié)合以及完整細(xì)胞的分泌溶于乙醇和乙醚63-65, Sigma-Aldrich, Fisher Scientific布雷菲德菌素A（BFA）(C16H24O4）膜運(yùn)輸、高爾基體<40 ng/ml時(shí)在許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中引起高爾基體解體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹溶于甲醇。可逆地阻斷蛋白質(zhì)從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）向高爾基體的轉(zhuǎn)運(yùn)。高密度脂蛋白-介導(dǎo)的膽

25、固醇外流的抑制劑。介導(dǎo)人腫瘤細(xì)胞凋亡。66-68, Sigma-Aldrich.Alomone Labs, Tocris Bioscience, Cell Signaling Technology, EMD/Millipore.Golgicide A（C17H14F2N2）組裝和運(yùn)輸通過(guò)結(jié)合在Arf1和GBF1 Sec7功能域間形成的界面裂縫中選擇性地可逆抑制順面高爾基體ArfGEF GBF1。Arf屬于Ras GTP酶家族并介導(dǎo)囊泡運(yùn)輸。溶于DMSO（>10 mg/ml）。導(dǎo)致高爾基體和反面高爾基網(wǎng)的解體與分散。抑制可溶性的和膜結(jié)合的蛋白質(zhì)分泌。69, 70 Sigma-Al

26、drich, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, EMD/Millipore1-Deoxymannojirimycin（DMM）（C6H13NO4·HCl）糖蛋白加工抑制N-糖基化。抑制甘露糖苷酶I。溶于乙醇和水。用于高爾基體介導(dǎo)的糖蛋白加工過(guò)程的研究。71-73, EMD/Millipore, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology.表5。 常用的高爾基體抑制劑。生物分子的分泌分泌是指細(xì)胞或腺體產(chǎn)生和釋放一種有用的物質(zhì)，包括激素、酶、細(xì)胞因子和細(xì)胞外基

27、質(zhì)蛋白。該過(guò)程中物質(zhì)被包裝進(jìn)囊泡然后以胞吐方式從細(xì)胞中分泌出來(lái)。· 分泌途徑：在真核細(xì)胞中，經(jīng)典的分泌過(guò)程是通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和其它細(xì)胞內(nèi)囊泡來(lái)實(shí)現(xiàn)的，是一個(gè)由細(xì)胞嚴(yán)格調(diào)控的過(guò)程。廣義上來(lái)說(shuō)，要輸送出去的蛋白被核糖體合成后?？吭趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)上進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。然后含有正確折疊的蛋白的囊泡進(jìn)入高爾基體。糖基化修飾后進(jìn)一步進(jìn)行翻譯后修飾。然后蛋白質(zhì)進(jìn)入分泌囊泡，沿著細(xì)胞骨架移至細(xì)胞邊緣。最后一步就是囊泡在一個(gè)被稱為融合孔的結(jié)構(gòu)處與細(xì)胞膜融合并進(jìn)行胞吐，蛋白就被釋放到環(huán)境中。· 非經(jīng)典的蛋白質(zhì)分泌途徑：有許多蛋白不是通過(guò)牽涉到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的經(jīng)典途徑來(lái)分泌的，相反是利用各種不同的非經(jīng)典的蛋

28、白質(zhì)分泌途徑來(lái)分泌的。這些蛋白包括FGF-1（aFGF）、FGF-2（bFGF）和白細(xì)胞介素-1（IL1） 74, 75 。非經(jīng)典的分泌機(jī)制大致可分為兩種。1) 直接使物質(zhì)跨過(guò)胞質(zhì)蛋白的質(zhì)膜進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)，例如FGF2的分泌。2) 胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)中間物，例如?；o酶A結(jié)合蛋白的分泌 76 。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商CP-10447（C16H13BrN2O）載脂蛋白B（apoB）分泌抑制微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白（MTP, MTTP）并刺激apoB的早期內(nèi)質(zhì)網(wǎng)降解溶于DMSO（10 mg/ml）。抑制甘油三酯分泌而不影響其合成。人體肝臟微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)活性的有效抑制劑。77

29、-79, Sigma-Aldrich, PfizerExo 1（C15H12NFO3）胞吐在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中通過(guò)誘導(dǎo)高爾基體膜解體和成管以及重新運(yùn)輸回內(nèi)質(zhì)網(wǎng)來(lái)可逆地抑制從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體間的囊泡運(yùn)輸。溶于DMSO、DMF、甲醇或乙醇。它的影響僅限于高爾基體，不能影響其它的內(nèi)吞細(xì)胞器?；罨郀柣鵄RF 1（ADP核糖基化因子）GTP酶。80, Sigma-Aldrich, EMD MilliporeExo 2（C18H18N4O2S）胞吐類似于BFA但是選擇性更強(qiáng)?？赡艿陌悬c(diǎn)包括TGN（反面高爾基網(wǎng)）、高爾基體和一部分早期內(nèi)涵體溶于DMSO（>20 mg/ml）。抑制志賀毒素運(yùn)送到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。作

30、為胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)囊环N化學(xué)探針。81-83, Sigma-Aldrich, Santa Cruz Biotechnology生長(zhǎng)激素抑制素（C76H104N18O19S2）生長(zhǎng)激素、胰島素和胰高血糖素抑制生長(zhǎng)激素、胰島素和胰高血糖素的內(nèi)源性肽溶于5%乙酸，水中溶解度為0.30 mg/ml。它是一個(gè)環(huán)狀十四肽。同樣抑制電壓門控Ca2+通道。84-86, Tocris Bioscience, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore奧曲肽（C49H66N10O10S2）胃腸胰肽激素和生長(zhǎng)激素它是一個(gè)合成的較長(zhǎng)作用八肽，是生長(zhǎng)激素抑制素的類似物。溶于水87, 88, Sigma-

31、Aldrich, Bachem, Tocris BioscienceSXN101742，一種定向分泌抑制劑（TSI）生長(zhǎng)激素它靶向于GHRH（生長(zhǎng)激素釋放激素）受體并使參與GH（生長(zhǎng)激素）胞吐過(guò)程的SNARE蛋白耗盡。TSI是來(lái)自于肉毒毒素（BoNTs）的重組蛋白。89, 90, Syntaxin Ltd.抗FGF1抗體酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（aFGF）酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體/Beta血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體。產(chǎn)自于兔子或小鼠。與人反應(yīng)。其應(yīng)用包括WB、ELISA、IHC-P及中和。用于各種應(yīng)用的方法及濃度請(qǐng)參考生產(chǎn)商的操作流程91-94, Sigma-aldrich, Abca

32、m, Origene, Thermo Scientific.表6。 常用的分泌抑制劑激活劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商-蛛毒素誘導(dǎo)胞吐與蛛毒素受體結(jié)合。利用Ca2+依賴性和非依賴性的作用機(jī)制。溶于50%甘油。引起神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。導(dǎo)致Ca2+非依賴性的胰島素胞吐。刺激皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)物中Ca2+非依賴性的GABA和谷氨酸釋放。95-97, Alomone Labs, EMD/Millipore, Enzo Life Sciences那格列奈（C19H27NO3）胰島素通過(guò)增加胞漿中Ca2+濃度來(lái)引起胰腺-細(xì)胞中的胰島素分泌。溶于DMSO（>5 mg/ml）。它是Kir6

33、.2/SUR1通道的抑制劑。刺激ATP敏感性鉀通道依賴性和非依賴性胰島素分泌。降血糖藥。98-101, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, TCI America血管緊張素II（C50H71N13O12）醛固酮導(dǎo)致腎上腺中的醛固酮釋放溶于水或5%乙酸。刺激血管生成并增加微血管密度。有很強(qiáng)的血管收縮效果。在血管平滑肌細(xì)胞中活化p60c-src和ERK1/2、JNK及p38絲裂原活化蛋白激酶。102-104, Sigma-Aldrich, Calbiochem/ EMD/Millipore.甲苯磺丁脲（磺脲類）（C12H18N2O3S）胰島素通過(guò)直接作用于胰腺細(xì)胞中

34、的ATP敏感性鉀通道引起胰島素釋放溶于DMSO或100%乙醇。被CYP2C9（甲苯磺丁脲羥化酶）所代謝105-108, Santa Cruz Biotechnology, Sigma-Aldrich, Abcam.瑞格列奈（C27H36N2O4）胰島素關(guān)閉胰腺細(xì)胞質(zhì)膜上的ATP敏感性鉀（KATP）通道在DMSO中溶解度達(dá)100 mM，在乙醇中溶解度達(dá)100 mM。體內(nèi)具有降血糖效果。109-112, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience油酸鈉（CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COONa）載脂蛋白B100（Apo-B）增加肝臟中的載脂蛋白B100分泌溶于水（1

35、00 mg/ml）、甲醇（50 mg/ml）和乙醇。激活肝細(xì)胞中的蛋白激酶C（PKC）。在較高生理劑量下抑制載脂蛋白B100分泌。113, 114, Santa Cruz Biotechnology, Sigma-Aldrich, TCI America分泌素（C130H220N44O40）胰液刺激富含碳酸鹽的胰液分泌溶于5%的乙酸或水。它是一種強(qiáng)堿性胃腸肽類激素。放松平滑肌。引起胰管線中劑量依賴性的cAMP積累。115-117, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore表7。 常用的分泌激活劑。內(nèi)吞細(xì)胞通過(guò)內(nèi)陷產(chǎn)生的囊泡從膜上脫落來(lái)吸收大分子和溶質(zhì)的過(guò)程被稱為“內(nèi)吞

36、”。內(nèi)吞可大致分為兩類：1）吞噬和2）胞飲。吞噬是特定細(xì)胞攝取大顆粒。胞飲是所有細(xì)胞中都發(fā)生的攝入液體和溶質(zhì)過(guò)程。當(dāng)泛指細(xì)胞內(nèi)化時(shí)，“吞噬”和“胞飲”多數(shù)被用作同義詞。主要有三種內(nèi)吞途徑：1）網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，2）胞膜窖介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和3）巨胞飲。在這三種內(nèi)吞途徑中，內(nèi)化步驟始于質(zhì)膜內(nèi)陷并將該膜轉(zhuǎn)變?yōu)榉Q作內(nèi)涵體的封閉囊泡。每個(gè)途徑都有控制內(nèi)化的一套分子。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商氯丙嗪（C17H19ClN2S · HCl）網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用引起網(wǎng)格蛋白網(wǎng)絡(luò)在內(nèi)涵體膜上的組裝并阻止細(xì)胞表面上的被膜小窩組裝。溶于水和甲醇。抑制鈣調(diào)蛋白依賴性的環(huán)核苷酸磷酸

37、二酯酶和一氧化氮合成酶激活。對(duì)白血病細(xì)胞具有細(xì)胞毒性和抗增殖活性。118, 119, Santa Cruz Biotechnology, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore金雀異黃素（C15H10O5）胞膜窖介導(dǎo)的內(nèi)吞作用可逆性抑制酪氨酸激酶溶于DMSO?？蓾B透細(xì)胞。抑制表皮生長(zhǎng)因子受體激酶?？寡苌蓜?。抑制腫瘤細(xì)胞增殖。抑制腫瘤細(xì)胞分化。體外抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II活性。119-122, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore-環(huán)糊精（C42H70O35）胞膜窖介導(dǎo)的內(nèi)吞作用清除膽固醇水中溶解度達(dá)50 mg/ml。由相同的環(huán)狀1,4-糖苷鍵連接的

38、D-葡萄吡喃糖單元形成的七元環(huán)。形成包合物。常用的絡(luò)合劑。123, 124, Sigma-Aldrich, Fisher Scientific, EMD/Millipore鹽酸阿米洛利（C6H8ClN7O.HCl.H2O）巨胞飲抑制Na+/H+交換。降低膜下pH值。阻止Rac1和Cdc42的信號(hào)傳導(dǎo)。S水中溶解度達(dá)50 mg/ml。T-型鈣通道阻滯劑。抑制尿激酶纖溶酶原激活物（uPA）。抑制血管生成。125-127, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD4Bioscience, Alomone LabsDynasore（C18H14N2O4）網(wǎng)格

39、蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用中的動(dòng)力蛋白抑制動(dòng)力蛋白1和2的GTP酶活性（IC50 15 µM）。溶于DMSO和乙醇。同樣抑制Drp1（線粒體）。會(huì)引起纖維化并在胸膜間皮細(xì)胞中誘導(dǎo)PAI-1。抑制BSC1細(xì)胞的細(xì)胞鋪展和遷移。128-130, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, EMD4Bioscience, Abcam非律平（C35H58O11）胞膜窖介導(dǎo)的內(nèi)吞作用與膜上的膽固醇結(jié)合并形成超微機(jī)構(gòu)聚集與復(fù)合。非律平由4個(gè)異構(gòu)的多烯大環(huán)內(nèi)酯組成。非律平III是主要成分。抗生素和抗真菌。抑制朊蛋白（Pr

40、P）的內(nèi)吞。123, 131-133, Cayman Chemical, Sigma-Aldrich, Santa Cruz Biotechnology.制霉菌素（C47H75NO17）胞膜窖介導(dǎo)的內(nèi)吞作用膽固醇隔離。溶于DMSO、DMF、乙醇和甲醇?？刮⑸铮ń湍浮⒅гw）。增加Na+- K+泵活性。134-136, Sigma-Aldrich, EMD4Bioscience, Invitrogen莫能菌素（C36H61O11。 Na）內(nèi)涵體成熟阻止內(nèi)涵體酸化溶于氯仿、乙醇和甲醇。聚醚類抗生素。Na+離子載體。阻斷糖蛋白分泌。阻斷神經(jīng)酰胺在高爾基體中的運(yùn)輸137-140, Sigm

41、a-Aldrich, EMD/Millipore, Enzo Life Sciences磷酸氯喹（C18H26ClN3·2H3PO4）內(nèi)涵體成熟它是一種可以裝入內(nèi)涵體和溶酶體這樣的酸性囊泡的弱堿，從而抑制內(nèi)涵體酸化和溶酶體酶活性。水中溶解度達(dá)100 mM。內(nèi)涵體Toll樣受體抑制劑（拮抗劑）。在許多癌癥細(xì)胞系中抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。128, 139, 141, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, Imgenex渥曼青霉素（C23H24O8）巨胞飲抑制磷脂酰肌醇-3激酶（PI3激酶）（IC50 = 5nM）溶于DMSO

42、。具有細(xì)胞通透性。在很高濃度時(shí)抑制肌球蛋白輕鏈激酶和PI4激酶活性。抑制polo樣激酶1（PLK1）（IC50 = 5.8 nM）。142-145, Cell Signaling Technology, Sigma-Aldrich, Tocris Bioscience, EMD/Millipore表8。 常用的內(nèi)吞作用抑制劑。HOE.64和LY294002是另外兩種巨胞飲抑制劑。單丹磺酰尸胺和巴弗洛霉素A1是用于研究網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用的另外兩種抑制劑。激活劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商佛波醇-12-十四酸酯-13-乙酸酯（PMA）（C36H56O8）（佛波酯）巨胞

43、飲在體內(nèi)和體外都激活蛋白激酶C。誘導(dǎo)膜轉(zhuǎn)運(yùn)和酶激活。DMSO中可溶解至100 mM，在乙醇中可溶解至10 mM。具有感光性。強(qiáng)力的腫瘤誘發(fā)物146-148, Sigma-Aldrich, Enzo Life Sciences, Tocris Bioscience, Abcam12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13（TPA）（C36H56O8）（佛波酯）內(nèi)吞作用結(jié)合并激活蛋白激酶C溶于DMSO和乙醇。具有感光性。強(qiáng)力的腫瘤誘發(fā)物。人單核U937細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡。149-152, Sigma-Aldrich, Cell signaling technology表9。 常用的內(nèi)吞作用激活劑。12,13-二

44、丁酸佛波醇是另一種類似于PMA和TPA的佛波酯，被用于刺激內(nèi)吞攝取。核運(yùn)輸核運(yùn)輸主要是通過(guò)核孔復(fù)合物（NPC）進(jìn)行的。離子和小分子是通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散穿越NPC來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)的。較大核蛋白質(zhì)、RNA及核糖核蛋白的輸入由核定位信號(hào)（NLS）介導(dǎo)停靠于核孔。另一方面，核輸出是由核輸出信號(hào)（NES）介導(dǎo)的。核輸入途徑大致由四步組成：1）在輸入物、輸入蛋白和輸入蛋白間形成三聚復(fù)合物，2）將復(fù)合物?？坑贜PC（核孔復(fù)合物），3）通過(guò)中央通道進(jìn)行轉(zhuǎn)位，4）復(fù)合物解離并將輸入物釋放到核質(zhì)中。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商麥胚凝集素（WGA）核輸入通過(guò)直接與核孔相互作用來(lái)抑制核蛋白運(yùn)輸。細(xì)胞生物學(xué)中

45、廣泛使用的一種外源凝集素。對(duì)N-乙酰-D-葡糖胺基和N-乙酰-D-葡糖胺寡聚物有親和性。用于細(xì)胞粘附研究。也用于影響淋巴細(xì)胞活化及研究基于糖類的治療方法。153-155, Sigma-Aldrich, Polysciences Inc., Invitrogen來(lái)普霉素A（C32H46O6）核輸出直接與CRM1（輸出蛋白-1）這一主要的核輸出蛋白結(jié)合。溶于甲醇和乙醇。來(lái)普霉素A和B的性質(zhì)是很相似的。具有細(xì)胞通透性，抗真菌及抗生素?？梢哉T導(dǎo)野生型ERK5在核內(nèi)積聚。156, 157, Sigma-Aldrich, Santa Cruz Biotechnology, EMD/Millipo

46、re來(lái)普霉素B（C33H48O6）核輸出抑制核運(yùn)輸受體Crm1，該蛋白用于識(shí)別底物蛋白中被稱為核輸出序列（NES）的短肽溶于乙醇?？拐婢⒖股??？鼓[瘤細(xì)胞毒素。比來(lái)普霉素A效力強(qiáng)兩倍。受來(lái)普霉素B影響的含NES的蛋白包括HIV-1 REV、肌動(dòng)蛋白、c-Abl、細(xì)胞周期蛋白B1、MDM2/p53、MPF、PKA和MEK。158-160, LC labs, Sigma-Aldrich, Cell signaling technology, EMD/MilliporeRatjadone A（C28H40O5）核輸出通過(guò)與CRM1共價(jià)結(jié)合來(lái)抑制含有LR-NES（富含亮氨酸的核輸出信號(hào)）的蛋白溶于含

47、水緩沖液和甲醇?？赏ㄍ讣?xì)胞的聚酮?？股亍Ｅc來(lái)普霉素B一樣有效。抑制擴(kuò)增。導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞在G1期發(fā)生細(xì)胞周期阻滯。161-163, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Cell signaling technology, Santa Cruz Biotech.依維菌素（C48H74O14（22,23-dihydroavermectin B1a）+ C47H72O14（22,23dihydroavermectin B1b）核輸入最近被發(fā)現(xiàn)對(duì)于輸入蛋白/介導(dǎo)的核輸入具有廣譜作用抗病毒。對(duì)于研究蛋白質(zhì)核輸入十分有用。調(diào)節(jié)谷氨酸-GABA活化的氯通道。164-166, MP Bi

48、omedicals, Sigma-Aldrich, Fisher Scientific表10。 核運(yùn)輸?shù)某Ｓ靡种苿?。一般為了誘導(dǎo)核輸入會(huì)將設(shè)計(jì)成NLS的肽段結(jié)合在輸入底物上。另一方面，針對(duì)諸如輸入蛋白和運(yùn)蛋白等可以識(shí)別NLS的核運(yùn)輸受體而設(shè)計(jì)的細(xì)胞通透性肽被用于抑制核運(yùn)輸 167 。細(xì)胞收縮在特定胞內(nèi)Ca2+濃度下，磷脂酶C（PLC）、蛋白激酶C（PKC）、Rho GTP酶、Rho激酶（RhoA的下游效應(yīng)蛋白）、肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）和肌球蛋白輕鏈磷酸酶（MLCPh）都會(huì)參與細(xì)胞收縮過(guò)程。放大圖 2. 細(xì)胞收縮。MLCK和MLCPh的作用：細(xì)胞收縮主要由肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白介導(dǎo)。

49、肌球蛋白輕鏈的磷酸化會(huì)誘發(fā)肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白分子之間的相互作用。肌球蛋白輕鏈的磷酸化是由肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）活化與肌球蛋白輕鏈磷酸酶（MLCPh）之間的平衡所決定的。Rho GTP酶和Rho激酶的作用：細(xì)胞通過(guò)粘附位點(diǎn)與微環(huán)境間的相互作用會(huì)活化Rho GTP酶?；罨腞ho GTP酶會(huì)與絲氨酸/蘇氨酸激酶、Rho激酶、ROK及相關(guān)的p160ROCK等激酶結(jié)合并提高它們的活性?；罨腞ho-激酶會(huì)抑制肌球蛋白磷酸酶的活性，從而促使肌球蛋白輕鏈（MLC）磷酸化。PLC、 Ca2+和PKC的作用 168 ：收縮過(guò)程始于磷脂酶C（PLC）活化，從而產(chǎn)生兩種第二信使，甘油二酯（DG）和肌醇1,4

50、,5-三磷酸（IP3）。IP3會(huì)導(dǎo)致Ca2+從肌質(zhì)網(wǎng)中釋放出來(lái)。Ca2+會(huì)以兩種方式來(lái)誘導(dǎo)收縮：1）Ca2+與DG一起激活蛋白激酶C。PKC則通過(guò)使L型Ca2+通道和其它調(diào)控橫橋周期的蛋白發(fā)生磷酸化來(lái)進(jìn)一步促進(jìn)收縮，2）Ca2+與鈣調(diào)蛋白結(jié)合并活化肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）。現(xiàn)在用于研究細(xì)胞收縮途徑的各種抑制劑和激活劑包括：抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商星孢菌素（C28H26N4O3）肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）、蛋白激酶C（PKC）抑制肌球蛋白輕鏈激酶（IC50 = 1.3 nM）、蛋白激酶C（IC50 = 700 pM）溶于DMSO和甲醇。也抑制蛋

51、白激酶A（IC50 = 7 nM）和蛋白激酶G（IC50 = 8.5 nM）。將正常細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯于G1期檢查點(diǎn)。169-171, Cell signaling Technology Inc., Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Tocris Bioscience, Enzo Life SciencesY-27632（C14H21N3O · 2HCl）ROCKRho關(guān)聯(lián)蛋白激酶的可逆選擇性抑制劑（p160ROCK的Ki = 140 nM)。同樣抑制ROCK-II。這種抑制對(duì)于ATP是競(jìng)爭(zhēng)性的。在水中可溶達(dá)14 mg/ml。抑

52、制激動(dòng)劑誘導(dǎo)的肌球蛋白磷酸化和平滑肌收縮的Ca2+致敏。同樣抑制蛋白激酶C相關(guān)激酶（IC50= 600 nM）。已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)會(huì)阻止凋亡并增加解離的人胚胎干細(xì)胞的存活率及克隆效率而不影響其多能性172-175, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Tocris Bioscience, Stemgent.H-1152（C16H21N3O2S.2HCl）ROCK選擇性的ATP競(jìng)爭(zhēng)性rho激酶（ROCK）抑制劑在水中溶達(dá)100 mM，在DMSO中溶達(dá)50 mM in DMSO。比Y-27632的效力及選擇性更強(qiáng)。對(duì)于其它絲氨酸/蘇氨酸激酶的親和性較弱（PKA的Ki=630nM，P

53、KC的為9.27m而MLCK的為10.1mM）。176-179, Tocris Bioscience, Enzo Life Sciences, Sigma-Aldrich, Santa Cruz Biotechnology,ML-9（C15H17N2O2SCl · HCl）肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）、蛋白激酶C（PKC）肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）（Ki = 4 M）和PKC（Ki = 54 M）的選擇性抑制劑在DMSO中溶達(dá)25 mM。抑制PKA（Ki = 32 M）。 濃度為10-100 µM時(shí)抑制血管平滑肌張力并降低胞內(nèi)Ca2+濃度。1

54、80-182, Tocris Bioscience, Cayman Chemical, Sigma-Aldrich, EMD/MilliporeML-7（C15H17IN2O2S · HCl）肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）肌球蛋白輕鏈激酶的ATP競(jìng)爭(zhēng)性選擇抑制劑（Ki = 300 nM）溶于DMSO或50%乙醇。在較高濃度時(shí)抑制蛋白激酶A（Ki = 21 µM）和蛋白激酶C（Ki = 42 µM）。ML-9的衍生物。與ML-9相比是更加強(qiáng)勁的抑制劑。180, 183, 184, Sigma-Aldrich, Tocr

55、is Bioscience, Santa Cruz Biotechnology, EMD/MilliporeK-252a（C27H21N3O5）MLCK、PKC抑制PKC（IC50 = 32.9 nM）和MLCK（Ki = 20 nM）。作為ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑同樣抑制PKA、PKG、CaMK、磷酸化酶激酶、MAP激酶和受體酪氨酸激酶的trk家族。溶于DMF或DMSO。星孢菌素類似物。阻止下游效應(yīng)蛋白（MAPK、Akt）的自磷酸化與活化。通過(guò)抑制Cdc2和Cdc25來(lái)引起凋亡和細(xì)胞周期阻滯。185-188, LC Laboratories, Tocris Bioscience

56、, EMD/Millipore/Millipore, Invitrogen, Sigma-Aldrich三氟拉嗪鈣調(diào)蛋白鈣調(diào)蛋白拮抗劑。抑制Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性的磷酸二酯酶。吩噻嗪類抗精神病D2多巴胺受體拮抗劑，抑制門控陽(yáng)離子通道（IC50 = 13 µM）并抑制肝鳥(niǎo)氨酸脫羧酶活性。189 Sigma-Aldrich, EMD/MilliporeW-7（C16H21ClN2O2S · HCl）鈣調(diào)蛋白抑制Ca2+/鈣調(diào)蛋白活化的磷酸二酯酶（IC50= 28 µM）和肌球蛋白輕鏈激酶（IC50 = 51 µM）。抑制倉(cāng)鼠卵巢K1細(xì)胞

57、增殖190-192, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, Santa Cruz Biotechnology表11。 常用的細(xì)胞收縮抑制劑。激活劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商內(nèi)皮素I（C109H159N25O32S5）MLC磷酸化有效的血管收縮劑。 內(nèi)皮素I通過(guò)激活Rho激酶途徑以及之后的MLC磷酸化來(lái)調(diào)節(jié)收縮在1%乙酸和水中溶解度 >1mg/ml。誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子1及VEGF的產(chǎn)生。在表達(dá)ETA受體的成纖維細(xì)胞中激活PLC。193-196, Sigma-Aldrich, EMD/Millipore, FisherCalpeptin（C20H30N2O4）Rho GTP酶激活RhoA、B和C。RhoA的激活可能是由于抑制了肌球蛋白輕鏈磷酸化。溶于DMSO和DMF。它是鈣蛋白酶這種Ca2+依賴性的蛋白酶的抑制劑，組織蛋白酶L的有效抑制劑并且優(yōu)先抑制膜相關(guān)酪氨酸磷酸酶活性。197, 198, Cytoskeleton Inc., Santa Cruz Biotechnology, Toc