顯微鏡高級培訓(xùn)

1、顯微鏡基礎(chǔ)知識光學基礎(chǔ)光學基礎(chǔ):安全安全: (圖標含義圖標含義,自身的保護自身的保護)注意注意 本標識提示某項說明需要特別注意。本標識提示某項說明需要特別注意。警告警告 本標識提示可能對儀器或系統(tǒng)存在某種潛在的危害。本標識提示可能對儀器或系統(tǒng)存在某種潛在的危害。警告警告 本標識提示可能對使用者存在潛在的危害。本標識提示可能對使用者存在潛在的危害。警告警告 注意高溫表面。注意高溫表面。警告警告 注意注意UV輻射。輻射。警告警告 儀器在打開前需斷開電源。儀器在打開前需斷開電源。安全安全: 圖標的含義圖標的含義顯微鏡基礎(chǔ)知識光學基礎(chǔ)光學基礎(chǔ):安全安全: (圖標含義圖標含義,自身的保護自身的保護)自身

2、的保護自身的保護: (UV輻射輻射,燙傷燙傷,用電安全用電安全) UV光源對眼睛有很大的傷害光源對眼睛有很大的傷害,可以導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫落可以導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫落,造成終身失明造成終身失明,因此調(diào)節(jié)的因此調(diào)節(jié)的時候一定要注意保護眼睛時候一定要注意保護眼睛,盡量通過調(diào)節(jié)工具來調(diào)節(jié)中心盡量通過調(diào)節(jié)工具來調(diào)節(jié)中心.另外非常強的可見光另外非常強的可見光源依然會損傷眼睛源依然會損傷眼睛,因此不要用眼睛直視光源部分因此不要用眼睛直視光源部分.盡量通過保護屏來觀察盡量通過保護屏來觀察. HBO光源和光源和HAL 100鹵素燈光源的燈箱外殼和燈泡部分在使用時或剛剛關(guān)閉的鹵素燈光源的燈箱外殼和燈泡部分在使用時或剛剛關(guān)閉的

3、時候不要用手接觸時候不要用手接觸,以免燙傷以免燙傷. HBO燈泡內(nèi)含有汞蒸汽燈泡內(nèi)含有汞蒸汽,因此使用時要小心因此使用時要小心 在拆卸顯微鏡的帶電部分的時候在拆卸顯微鏡的帶電部分的時候,一定要將電源線拔下一定要將電源線拔下,徹底斷電徹底斷電.以保護自身安以保護自身安全全. 顯微鏡基礎(chǔ)知識光學基礎(chǔ)光學基礎(chǔ):顯微鏡光路整體結(jié)構(gòu)圖顯微鏡光路整體結(jié)構(gòu)圖正置顯微鏡正置顯微鏡PrimoStarAxioStar plusAxioSkop 40 Axio Scope A1AxioImager顯微鏡基礎(chǔ)知識光學基礎(chǔ)光學基礎(chǔ):顯微鏡光路整體結(jié)構(gòu)圖顯微鏡光路整體結(jié)構(gòu)圖倒置顯微鏡倒置顯微鏡AxioObserverAx

4、iovert 200Axiovert 40顯微鏡基礎(chǔ)知識光學基礎(chǔ)光學基礎(chǔ):顯微鏡光路整體結(jié)構(gòu)圖顯微鏡光路整體結(jié)構(gòu)圖體視顯微鏡體視顯微鏡(解剖鏡解剖鏡)Stemi DV4Stemi 2000 Discovery V8Discovery V12/20Discovery Lumar體式鏡常用分辨率表體式鏡常用分辨率表示方式是：每示方式是：每mm能能分辨的最多線數(shù)分辨的最多線數(shù) =1000N.A/0.61 =0.55um顯微鏡基礎(chǔ)知識BF 明場明場 采用透射光直接觀察樣本采用透射光直接觀察樣本 (透射透射,反射反射)PH 相差相差 利用被檢物體的光程（折射率利用被檢物體的光程（折射率 x 厚度）差進行

5、鏡檢厚度）差進行鏡檢DIC 微分干涉微分干涉 通過特制的棱鏡將偏振光分解和合成通過特制的棱鏡將偏振光分解和合成,增強光程差使得樣品增強光程差使得樣品 -Plas DIC 呈現(xiàn)出立體圖像呈現(xiàn)出立體圖像 塑料微分干涉塑料微分干涉FL 熒光熒光 通過特定光源的照射通過特定光源的照射,使得樣品發(fā)出特定顏色的光使得樣品發(fā)出特定顏色的光POL 偏光偏光 通過偏鏡和檢偏鏡通過偏鏡和檢偏鏡,使用偏振光來觀察樣品使用偏振光來觀察樣品 DF 暗場暗場 利用丁道爾利用丁道爾(Tyndall)現(xiàn)象，微粒對斜射光反射或衍射，增大現(xiàn)象，微粒對斜射光反射或衍射，增大 了人眼可見性了人眼可見性光學基礎(chǔ)光學基礎(chǔ):常見觀察模式常

6、見觀察模式顯微鏡基礎(chǔ)知識BF 明場明場應(yīng)用領(lǐng)域：應(yīng)用領(lǐng)域：常規(guī)鏡檢、病理、 染色標本優(yōu)點：優(yōu)點：視野亮度高、均勻，應(yīng)用范圍廣，操作簡單，價格低，物鏡適用于熒光觀察缺點：缺點：透明標本對比度低，標本沒有立體感顯微鏡基礎(chǔ)知識PH 相差相差優(yōu)點：優(yōu)點：鑒定活體細胞最實用、最經(jīng)濟的方法鑒定活體細胞最實用、最經(jīng)濟的方法缺點：缺點：需要特殊的相差物鏡需要特殊的相差物鏡(PH)需要光強高需要光強高切片不能太厚切片不能太厚(510um)蓋片、載片需符合標準蓋片、載片需符合標準最好配用單色濾光鏡最好配用單色濾光鏡操作較麻煩操作較麻煩熒光效果不如明場物鏡熒光效果不如明場物鏡顯微鏡基礎(chǔ)知識PH 相差相差相差物鏡聚光

7、鏡內(nèi)帶相差環(huán)PH 1/2/3(阿拉伯數(shù)字)顯微鏡基礎(chǔ)知識DIC 微分干涉微分干涉顯微鏡基礎(chǔ)知識DIC 微分干涉微分干涉DIC物鏡聚光鏡內(nèi)帶DIC棱鏡DICI/II/III (羅馬數(shù)字)檢偏器顯微鏡基礎(chǔ)知識DIC 微分干涉微分干涉檢偏器聚光鏡內(nèi)帶DIC棱鏡DICI/II/III (羅馬數(shù)字)DIC物鏡顯微鏡基礎(chǔ)知識FL 熒光熒光優(yōu)點：優(yōu)點：檢出能力高（放大作用）對細胞的刺激?。梢曰铙w染色）能進行多重染色用途：用途：物體構(gòu)造的觀察熒光素熒光的有無、色調(diào)比較進行物質(zhì)判別抗體熒光等發(fā)熒光量的測定對物質(zhì)定性、定量分析顯微鏡基礎(chǔ)知識FL 熒光熒光熒光模塊熒光光源顯微鏡基礎(chǔ)知識FL 熒光熒光熒光濾色塊參數(shù)

8、熒光濾色塊參數(shù)例如例如: Filter set 02 shift free EX G 365, BS FT 395, EM LP 420 488002-9901-000其中其中 EX 365 (BP 帶通帶通) BS 390 EM LP 420 /BP 450/20顯微鏡基礎(chǔ)知識高級熒光高級熒光使用使用CCD成像成像 (單張單張,多通道多通道)2 使用共聚焦成像使用共聚焦成像 (單張單張,多通道多通道,光譜光譜) 光譜意味著可以拆分成不同的顏色通道光譜意味著可以拆分成不同的顏色通道,可以分析更多的成分可以分析更多的成分顯微鏡基礎(chǔ)知識顯微鏡基礎(chǔ)知識POL 偏光偏光應(yīng)用：應(yīng)用：礦物質(zhì)、化學物品鑒別

9、礦物質(zhì)、化學物品鑒別鑒別纖維、染色體、淀鑒別纖維、染色體、淀粉粒、細胞中晶體粉粒、細胞中晶體植物病理檢驗植物病理檢驗鑒別骨骼、牙齒、膽固鑒別骨骼、牙齒、膽固醇、神經(jīng)纖維、腫醇、神經(jīng)纖維、腫瘤細胞、橫紋肌和瘤細胞、橫紋肌和毛發(fā)等毛發(fā)等冰尿晶顯微鏡基礎(chǔ)知識POL 偏光偏光檢偏器起偏器石膏片/石英片顯微鏡基礎(chǔ)知識DF 暗場暗場優(yōu)點：優(yōu)點：觀察到極其微小物體，分辨率可達0.02 0.004 um (明場0.4um)”超顯微“。缺點：缺點：只能觀察到物體存在、運動和外部形態(tài)不方便調(diào)節(jié)標本要求高（灰塵、蓋片、載片）顯微鏡基礎(chǔ)知識DF 暗場暗場暗場聚光鏡暗場聚光鏡顯微鏡基礎(chǔ)知識硬件基礎(chǔ)硬件基礎(chǔ): (硬件拆解

10、硬件拆解,安裝安裝,調(diào)節(jié)調(diào)節(jié).各部件介紹各部件介紹)主機及附件的安裝主機及附件的安裝科勒照明的調(diào)節(jié)科勒照明的調(diào)節(jié)燈箱的拆解與燈泡的安裝燈箱的拆解與燈泡的安裝聚光鏡內(nèi)模塊的安裝聚光鏡內(nèi)模塊的安裝熒光模塊濾片的安裝熒光模塊濾片的安裝顯微鏡基礎(chǔ)知識顯微鏡基礎(chǔ)知識顯微鏡基礎(chǔ)知識顯微鏡基礎(chǔ)知識顯微鏡基礎(chǔ)知識顯微鏡基礎(chǔ)知識顯微鏡基礎(chǔ)知識顯微鏡基礎(chǔ)知識燈箱的拆解與燈泡的安裝燈箱的拆解與燈泡的安裝顯微鏡基礎(chǔ)知識HBO燈泡調(diào)節(jié)中心燈泡調(diào)節(jié)中心將調(diào)節(jié)工具4拔出,調(diào)節(jié)1,2,3,使得工具中顯示如圖5顯微鏡基礎(chǔ)知識聚光鏡內(nèi)模塊的安裝聚光鏡內(nèi)模塊的安裝顯微鏡基礎(chǔ)知識熒光模塊的拆解安裝熒光模塊的拆解安裝顯微鏡基礎(chǔ)知識物鏡

11、類型物鏡類型放大倍率放大倍率數(shù)值孔徑數(shù)值孔徑無限遠光學系統(tǒng)無限遠光學系統(tǒng)蓋玻片厚度蓋玻片厚度機械校正環(huán)機械校正環(huán)觀察方式標簽觀察方式標簽放大倍率標簽放大倍率標簽介質(zhì)標簽介質(zhì)標簽顯微鏡基礎(chǔ)知識F.N20F.N23F.N25顯微鏡基礎(chǔ)知識科勒照明的調(diào)節(jié)科勒照明的調(diào)節(jié)放一張你即將觀察的樣本放一張你即將觀察的樣本(最好是染色的切片類樣品最好是染色的切片類樣品)，使用，使用10X物鏡物鏡,明明場照明狀態(tài)（聚光鏡轉(zhuǎn)輪選擇場照明狀態(tài)（聚光鏡轉(zhuǎn)輪選擇 H或或 BF，熒光濾鏡輪選擇空位，熒光濾鏡輪選擇空位，DIC 附附件全部拉出光路，照相光路轉(zhuǎn)換到觀察狀態(tài)件全部拉出光路，照相光路轉(zhuǎn)換到觀察狀態(tài),通過粗調(diào)和微調(diào)將

12、樣品調(diào)節(jié)通過粗調(diào)和微調(diào)將樣品調(diào)節(jié)到樣本能觀察到的最清楚的狀態(tài)。然后不要再動調(diào)焦螺旋。到樣本能觀察到的最清楚的狀態(tài)。然后不要再動調(diào)焦螺旋。 2，將視場光欄調(diào)到最小的狀態(tài)，如果顯微鏡的調(diào)節(jié)狀態(tài)正確的話，此，將視場光欄調(diào)到最小的狀態(tài)，如果顯微鏡的調(diào)節(jié)狀態(tài)正確的話，此時在視野中應(yīng)該可以看到一個邊緣清楚的多邊形時在視野中應(yīng)該可以看到一個邊緣清楚的多邊形(如下圖如下圖)。 顯微鏡基礎(chǔ)知識 如果看到的不是一個邊緣清楚的多邊形，則說明光路中的聚光鏡上下位置不準如果看到的不是一個邊緣清楚的多邊形，則說明光路中的聚光鏡上下位置不準確，此時通過調(diào)節(jié)聚光鏡左手側(cè)的上下調(diào)節(jié)旋鈕使得視場中形成一個邊緣清確，此時通過調(diào)節(jié)聚

13、光鏡左手側(cè)的上下調(diào)節(jié)旋鈕使得視場中形成一個邊緣清晰的多邊形，此時的聚光鏡位置就是晰的多邊形，此時的聚光鏡位置就是Z軸上最佳位置，以后的調(diào)節(jié)或觀察的時軸上最佳位置，以后的調(diào)節(jié)或觀察的時候都不要再移動其位置了。候都不要再移動其位置了。 3，視野中的多邊形的正確位置應(yīng)該是在視野的正中心，如果不在說明聚光鏡在水，視野中的多邊形的正確位置應(yīng)該是在視野的正中心，如果不在說明聚光鏡在水平面上有偏移，需要調(diào)節(jié)柯勒照明光路調(diào)節(jié)旋鈕（聚光器對中螺釘）平面上有偏移，需要調(diào)節(jié)柯勒照明光路調(diào)節(jié)旋鈕（聚光器對中螺釘）,通過調(diào)通過調(diào)節(jié)聚光鏡上的柯勒照明光路調(diào)節(jié)旋鈕（兩個銀色的旋鈕）使多邊形在視野的節(jié)聚光鏡上的柯勒照明光路調(diào)

14、節(jié)旋鈕（兩個銀色的旋鈕）使多邊形在視野的中心。中心。 4，將視場光欄慢慢放大，當多邊形正好外切于視場的時候就是視場光欄的最佳工，將視場光欄慢慢放大，當多邊形正好外切于視場的時候就是視場光欄的最佳工作位置。在此過程中其他位置的調(diào)節(jié)不可以再動。作位置。在此過程中其他位置的調(diào)節(jié)不可以再動。 顯微鏡基礎(chǔ)知識軟件基礎(chǔ)軟件基礎(chǔ): (版本說明版本說明,安裝安裝,配置配置,使用介紹使用介紹)AxioVision版本從版本從 3.04.8 .當前主要是的用當前主要是的用4.5以上版本以上版本.版本是不可以無限升級的版本是不可以無限升級的.原因是有的特殊硬件只支持到某個版本原因是有的特殊硬件只支持到某個版本.如果

15、只是顯微鏡和如果只是顯微鏡和CCD的話的話,是可以升級的是可以升級的.計算機要求計算機要求:至少至少1GM內(nèi)存內(nèi)存,獨立的獨立的128M以上顯卡以上顯卡,一塊一塊1394卡卡(貝爾金貝爾金,或或dell原裝卡原裝卡, 這這 類卡的特點是綠色的類卡的特點是綠色的),操作系統(tǒng)操作系統(tǒng)win2000 SP4/xp SP2/vista home Premium SP1以上版本以上版本,屏幕分辨率在屏幕分辨率在Y方向必須大于方向必須大于1024. Vista home basic 版本不支持版本不支持Axiovision軟件軟件軟件安裝時軟件安裝時,加密狗加密狗(Dongle)必須拔下必須拔下顯微鏡基礎(chǔ)

16、知識軟件安裝路徑默認軟件安裝路徑默認.驅(qū)動的安裝驅(qū)動的安裝漢化版的安裝漢化版的安裝系統(tǒng)備份系統(tǒng)備份/軟件界面的備份軟件界面的備份MTB的配置的配置軟件的默認參數(shù)軟件的默認參數(shù)比例尺的設(shè)置比例尺的設(shè)置齊焦至目鏡齊焦至目鏡顯微鏡基礎(chǔ)知識Axiovision 軟件默認參數(shù)軟件默認參數(shù)顯微鏡基礎(chǔ)知識圖像調(diào)節(jié)圖像調(diào)節(jié)亮度亮度/對比度對比度/伽嗎值的調(diào)節(jié)伽嗎值的調(diào)節(jié)(以及參數(shù)和曲線的含義以及參數(shù)和曲線的含義)參數(shù)的測量以及輸出參數(shù)的測量以及輸出顯微鏡基礎(chǔ)知識CCD的成象原理的成象原理ElectricalConnectionPolysilicon GateSilicon DioxideSiliconeeee

17、eCCD 結(jié)構(gòu)示意圖顯微鏡基礎(chǔ)知識CCD 基本原理基本原理顯微鏡基礎(chǔ)知識CCD 基本原理基本原理顯微鏡基礎(chǔ)知識CCD 基本原理基本原理顯微鏡基礎(chǔ)知識彩色彩色CCD的成象模式的成象模式Color Pixel Separation顯微鏡基礎(chǔ)知識HRC原理原理顯微鏡基礎(chǔ)知識CCD 分辨率 2. 靈敏度(QE 值)3. 暗電流4. 彩色成像方式5. 拍攝速度6. Binning 模式選購相機需要注意的參數(shù)顯微鏡基礎(chǔ)知識ZEISS的的CCD家族家族 相機型號相機型號 最高分辨率最高分辨率 適用范圍適用范圍Axiocam HRc 4164X3120 高分辨率的彩色照片高分辨率的彩色照片Axiocam HR

18、m 4164x3120 高分辨率的黑白照片高分辨率的黑白照片Axiocam MRc5 2584x1936 常規(guī)彩色常規(guī)彩色Axiocam MRm 1388x1040 熒熒 光光Axiocam MRC 1388x1040 快速彩色快速彩色Axiocam ICC1 1392x1038 低端彩色低端彩色Axiocam ICC3 2080 x1540 低端彩色低端彩色Axiocam HSm 660 x494 (60fps) 超高速黑白超高速黑白顯微鏡基礎(chǔ)知識光學系統(tǒng)的清潔光學系統(tǒng)的清潔 清潔用品及工具清潔用品及工具a).a).無水乙醚乙醇混合液無水乙醚乙醇混合液(7:3(7:3混合混合) ) 用于一般

19、光學系統(tǒng)表面污漬的清除。用于一般光學系統(tǒng)表面污漬的清除。b)b)吹風球吹風球用于清除灰塵及異物。用于清除灰塵及異物。c)c)軟毛刷軟毛刷用于清除灰塵及異物。用于清除灰塵及異物。d)d)鏡頭紙鏡頭紙. .木棒或棉簽?zāi)景艋蛎藓? .長纖維脫脂棉長纖維脫脂棉光學系統(tǒng)清潔的原則光學系統(tǒng)清潔的原則 總原則是能不擦的就不要擦總原則是能不擦的就不要擦. .原因是現(xiàn)在的光學系統(tǒng)表面一般情況下都會有原因是現(xiàn)在的光學系統(tǒng)表面一般情況下都會有鍍膜鍍膜, ,經(jīng)常用力擦拭會破壞膜結(jié)構(gòu)經(jīng)常用力擦拭會破壞膜結(jié)構(gòu), ,造成系統(tǒng)光學性能下降造成系統(tǒng)光學性能下降. . 清潔順序應(yīng)該是先用吹風球吹清潔順序應(yīng)該是先用吹風球吹, ,再

20、使用軟毛刷清潔再使用軟毛刷清潔, ,如果還是不行如果還是不行, ,再使用清再使用清潔液擦拭潔液擦拭顯微鏡基礎(chǔ)知識 木棒或棉簽的使用方法木棒或棉簽的使用方法: : 在其一端卷繞上脫脂棉在其一端卷繞上脫脂棉 用于擦拭鏡片。用于擦拭鏡片。顯微鏡基礎(chǔ)知識需清除塵埃的部位需清除塵埃的部位 注意：注意： 應(yīng)該經(jīng)常對如圖應(yīng)該經(jīng)常對如圖所示的所示的4 4個部位進個部位進清潔。清潔。顯微鏡基礎(chǔ)知識清潔保養(yǎng)的順序及部位清潔保養(yǎng)的順序及部位 先用吹風球或軟毛刷由上而下地清除附著在顯微鏡先用吹風球或軟毛刷由上而下地清除附著在顯微鏡片表面，載物臺表面和機架表面的灰塵及其它異物。片表面，載物臺表面和機架表面的灰塵及其它異

21、物。 對一般用戶來說只需且只能經(jīng)常清潔擦拭目鏡，對一般用戶來說只需且只能經(jīng)常清潔擦拭目鏡，物鏡，聚光器，集光鏡等表面鏡片。對于其他鏡片或儀物鏡，聚光器，集光鏡等表面鏡片。對于其他鏡片或儀器內(nèi)部的污染物的清潔器內(nèi)部的污染物的清潔 請聯(lián)系請聯(lián)系zeisszeiss工程師來解決。工程師來解決。( (并非所有的光學部件都能使用有機溶劑擦拭并非所有的光學部件都能使用有機溶劑擦拭) )顯微鏡基礎(chǔ)知識各類鏡片的擦拭各類鏡片的擦拭a) 附著于光學鏡片上的灰塵和污臟物部位的識別：附著于光學鏡片上的灰塵和污臟物部位的識別： 邊觀察邊轉(zhuǎn)動相關(guān)的透鏡，如果污漬隨鏡片的轉(zhuǎn)動而轉(zhuǎn)動，就可以判斷其所邊觀察邊轉(zhuǎn)動相關(guān)的透鏡，如果污漬隨鏡片的轉(zhuǎn)動而轉(zhuǎn)動，就可以判斷其所處在的位置是在鏡片上。否則就是光路的其他鏡片上處在的位置是在鏡片上。否則就是光路的其他鏡片上擦拭鏡頭的基擦拭鏡頭的基本操作是從中央部位開始本操作是從中央部位開始擦起，采用螺旋漸進的方擦起，采用螺旋漸進的方式逐步地擦到邊緣。第一式逐步地擦到邊緣。第一次一定不要用力次一定不要用力,以后每次以后每次逐漸的加力逐漸的加力,要不斷地重復(fù)要不斷地重復(fù)擦拭，直到鏡片完全清潔擦拭，直到鏡片完全清潔為止。且方向必須