三葉人字草對IgA腎病模型大鼠的影響

1、三葉人字草對IgA腎病模型大鼠的影響                   作者：王霞,周玖瑤,孫毅東,余應(yīng)嘉【摘要】  【目的】觀察三葉人字草對IgA腎病模型大鼠的影響?！痉椒ā窟x用KM小鼠隨機(jī)分為空白對照組,云南白藥膠囊對照組(劑量為0411 g·kg-1·d-1),人字草高、中、低劑量組(劑量分別為24660、12330、6165 g·kg-1·d-1),持續(xù)給藥7 d后,

2、采用激光多普勒血流儀記錄小鼠耳廓微循環(huán)的血流速度,觀察微循環(huán)的改善情況。選用SD大鼠隨機(jī)分為空白對照組,云南白藥膠囊對照組(劑量為0206 g·kg-1·d-1),人字草高、中、低劑量組(劑量分別為12340、6170、3085 g·kg-1·d-1),連續(xù)給藥7 d后取血,采用血液流變學(xué)測變儀檢測血液流變學(xué)指標(biāo)。選用SD大鼠隨機(jī)分為空白對照組,模型組,雷公藤多苷組(劑量為00165 g·kg-1·d-1),人字草高、中、低劑量組(劑量分別為160、80、40 g·kg-1·d-1),除空白對照組外,其他組均采用牛

3、血清白蛋白脂多糖CCl4聯(lián)合運(yùn)用8周復(fù)制實驗性IgA腎病模型,于第8周開始給藥至第12周末,各組大鼠均于腹主動脈取血檢測尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)和血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量。【結(jié)果】人字草高、中、低劑量組均可顯著增強(qiáng)小鼠耳廓微動脈的血流速度(P005或P001),且呈一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。人字草高劑量組可顯著降低高切、中切、低切全血黏度(P001),改善大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)。除人字草低劑量組對血清MDA含量無顯著影響外,其他各給藥組均可顯著降低模型大鼠BUN、SCr、MDA含量,升高SOD活力(P005或P001)?！窘Y(jié)論】三葉人字草治療IgA腎病的效應(yīng)可能與其

4、能改善微循環(huán)和血液流變學(xué)指標(biāo),清除自由基,提高抗氧化酶活力有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  三葉人字草/藥理學(xué) IgA腎病/中藥療法 血液流變學(xué) 超氧化物歧化酶/血液 丙二醛/血液疾病模型,動物 大鼠 小鼠Abstract: ObjectiveTo study the therapeutic mechanism of Kummerowia striata (Thunb.) Schindl.(KSC) for IgA nephritis rats. Methods(1) Kunming rats were randomized into blank control group, Yunnan Ba

5、iyao Capsules (YBC) group (in a dose of 0411 g·kg-1·d-1), and high, middle and lowdose KSC groups (in a dose of 24660, 12330 and 6165 g·kg-1·d-1 respectively). The medication lasted 7 continuous days. After treatment, we used laser Doppler flowmetery to detect blood flow rate of

6、microcirculation in rats auricle and monitor the changes of auricular microcirculation. (2) SD rats were randomized into blank control group, YBC group (in a dose of 0206 g·kg-1·d-1), and high, middle and lowdose KSC groups (in a dose of 12340, 6170 and 3085 g·kg-1·d-1 respective

7、ly). Hemorheological indexes were examined after 7day treatment. (3) SD rats were randomized into blank control group, model group, Tripterygium Glycosides Tablets group (in a dose of 00165 g·kg-1·d-1), and high, middle and lowdose KSC groups (in a dose of 160, 80 and 40 g·kg-1·d

8、-1 respectively). Except that the blank control group, the rats in other groups were given bovine serum albumin (BSA), lipopolysaccharide (LPS) and carbon tetrachloride to induce IgA nephritis. Medication started from the 8th week and ended in the end of the 12th week. After treatment, arterial bloo

9、d sampling was carried out to detect the levels of blood urea nitrogen (BUN),serum creatinine (SCr),the whole blood superoxide dismutase (SOD)rate of rat auricular microcirculation (P005 or P001) in a doseeffect manner. Highdose KSC decreased high, middleand lowshear whole blood viscosity (P001), im

10、proved the hemorheological indexes. Except that lowdose KSC had no effect on MDA content, SOD activity was increased,and BUN, SCr and MDA were decreased, in other medication groups (P005 or P001). ConclusionThe therapeutic mechanism of KSC for IgA nephritis is probably related with the improvement o

11、f microcirculation and hemorheology,with the clearance of free radicals, and with the increase of antioxidase activityKey words:KUMMEROWIA STRIATA(THUNB.) SCHINDL./pharmacology;IGA NEPHROPATHY/TCD therapy;BLOOD RHEOLOGY;SUPEROXIDE DISMUTASE/blood;MALONDIALDEHYDE /blood;DISEASE MODELS, ANIMAL;RATS;MI

12、CEIgA腎病(IgA nephropathy,IgAN)是腎小球系膜區(qū)存在以IgA為主的顆粒樣沉積、伴或不伴有其他免疫復(fù)合物沉積,臨床上以血尿或血尿伴蛋白尿為主要表現(xiàn)的腎小球腎炎1 。三葉人字草為豆科植物三葉人字草Kummerowia striata(Thunb.)Schind1.的全草入藥。藥性甘、淡,微寒,功能清熱解毒、活血、利尿、止瀉。前期研究2-3 表明,三葉人字草有顯著的止血作用，對急性炎癥和炎癥后期的結(jié)締組織增生有良好的抑制作用。在治療血尿、腎炎蛋白尿方面有確切的療效4。本研究通過觀察三葉人字草對小鼠耳廓血液微循環(huán)、大鼠血液流變學(xué)以及IgA腎病模型大鼠的影響,探討三葉人字草治療I

13、gA腎病的作用機(jī)理,現(xiàn)報道如下。1材料與方法1.1藥物三葉人字草購自廣州清平藥材市場,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)博物館中藥標(biāo)本中心張秋鎮(zhèn)老師鑒定為豆科屬植物三葉人字草Kummerowia striata(Thunb.)Schind1.的全草干品,經(jīng)加水煎煮、過濾,濃縮至800 g/L藥液,置冰箱備用，雷公藤多苷片由浙江普洛康裕天然藥物有限公司提供,批號：070901，云南白藥膠囊由云南白藥集團(tuán)股份有限公司提供，批號：20080202。1.2主要試劑與儀器尿素氮（BUN）、肌酐（SCr)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供,批號：20080613；牛血清白蛋白(

14、BSA)由Mbchem公司提供,廣州威佳科技有限公司分裝,批號：20070826；脂多糖(LPS)由北京鼎國生物技術(shù)有限公司提供,批號：024K4067；蓖麻油由天津市耀華化學(xué)試劑有限責(zé)任公司提供,批號：20060505；四氯化碳(CCl4)由天津市大茂化學(xué)試劑廠提供,批號：20080205；水合氯醛由天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司提供,批號：20080118；722紫外可見分光光度計(上海第三分析儀器廠)；BS210S電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)；20R低溫高速離心機(jī)(德國Hermle公司)；PF5001激光多普勒血流儀(瑞典百靈威醫(yī)療儀器有限公司)；MS/XWF血流變、微循環(huán)、紅

15、細(xì)胞變形三用儀(成都麥賽科貿(mào)公司)。1.3動物SPF級SD大鼠110只,體質(zhì)量180220 g,雌雄兼用,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供,合格證號：SCXK(粵)200301；KM小鼠60只,雌雄兼用,體質(zhì)量1822 g,購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心,合格證號：SCXK(粵)20080020,粵監(jiān)證字2008A003。1.4各組對小鼠耳廓微循環(huán)的影響取KM小鼠60只,雌雄各半,隨機(jī)分為5組(每組12只)，即空白對照組(灌胃等容積蒸餾水),云南白藥膠囊對照組(劑量為0411 g·kg-1·d-1),人字草高、中、低劑量組(劑量分別為24660、12330、6165 g&#

16、183;kg-1·d-1),持續(xù)給藥7 d,每天1次。于第7天末次給藥后60 min,用50 mg/L水合氯醛麻醉,左耳用膠布貼拔鼠毛并固定,采用激光多普勒血流儀記錄小鼠耳廓微循環(huán)的血流速度,以判斷微循環(huán)的改變情況。1.5各組大鼠血液流變學(xué)試驗取SD大鼠50只,隨機(jī)分為5組(每組10只)，即空白對照組(灌胃給予等容積蒸餾水),云南白藥膠囊對照組(劑量為0206 g·kg-1·d-1),人字草高、中、低劑量組(劑量分別為12340、6170、3085 g·kg-1·d-1),持續(xù)給藥7 d,每天1次。于第7天末次給藥后15 h,眼眶后靜脈叢取血3

17、 mL,置于肝素抗凝管,采用血液流變學(xué)測變儀檢測血液流變學(xué)指標(biāo)。1.6IgA腎病大鼠模型的復(fù)制5及分組與給藥除空白對照組外,各組均采用BSA+LPS+CCl4復(fù)制實驗性IgA腎病模型：口服免疫原BSA(劑量為400 mg·kg-1·d-1,以pH 2530的酸化水配制),隔天灌胃,持續(xù)6周；皮下注射蓖麻油05 mL+CCl4 010 mL,每周1 次,持續(xù)9周,并聯(lián)合運(yùn)用LPS(分別于第6、8周以005 mg LPS尾靜脈注射)。取SD大鼠60只,適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后,隨機(jī)分為空白對照組,模型組,雷公藤多苷組，三葉人字草高、中、低劑量組,每組10只。空白對照組隔日口服酸化水(

18、pH 2530),持續(xù)6周,于第8周起蒸餾水灌胃至實驗結(jié)束；模型組于第8周起蒸餾水灌胃至實驗結(jié)束；雷公藤多苷組于第8周起灌胃雷公藤多苷00165 g·kg-1·d-1至第12周末；三葉人字草高、中、低劑量組分別于第8周起灌胃人字草煎煮液160、80、40 g·kg-1·d-1,至12周末。試驗進(jìn)行至12周時,各組大鼠禁食不禁水12 h后,腹主動脈取血待測。1.7檢測指標(biāo)觀察大鼠的精神狀態(tài)、體質(zhì)量、體毛、飲食狀況以及活動情況等,每周測體質(zhì)量1次。取血測定生化指標(biāo)BUN、SCr和血清SOD活力、MDA含量。1.8統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 110軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處

19、理。         2結(jié)果2.1各組對小鼠耳廓微循環(huán)的影響表1結(jié)果表明：三葉人字草高、中、低劑量組和云南白藥膠囊組均可顯著增強(qiáng)小鼠耳廓微動脈血流速度,與空白對照組比較差異有顯著性意義P005或P001),且呈劑量依賴關(guān)系,說明三葉人字草具有增強(qiáng)小鼠耳廓微循環(huán)的作用。表1各組對小鼠耳廓微循環(huán)的影響(略)2.2各組對大鼠血液流變學(xué)的影響表2結(jié)果表明,血液流變學(xué)檢測顯示三葉人字草高劑量組的高切、中切、低切全血黏度顯著低于于空白對照組(P001)。說明三葉人字草提取液具有一定改善大鼠血液流變學(xué)的作用。表2各組對大鼠血液流

20、變學(xué)的影響(略)2.3各組對IgA腎病模型大鼠的影響2.3.1一般情況造模后各組大鼠均有不同程度的精神欠佳、體毛干枯、攝食減少等情況。特別是每周皮下注射蓖麻油+CCl4之后以及第6周和第8周尾靜脈注射LPS后情況顯著,經(jīng)23 d后基本恢復(fù)正常。各組動物在試驗開始16周體質(zhì)量增加較快,第6周和第8周尾靜脈注射LPS后,體質(zhì)量增加緩慢,自第8周給藥后情況好轉(zhuǎn)。2.3.2各組對IgA腎病模型大鼠腎功能的影響表3結(jié)果顯示,模型組的BUN和SCr含量顯著高于空白對照組（P001）,各治療組的BUN和Scr含量顯著低于模型組(P005或P001)。表明各治療組對模型大鼠腎功能有明顯改善作用,其中雷公藤多苷

21、組和人字草高劑量組療效最好。表3各組對IgA腎病模型大鼠腎功能的影響（略）2.3.2各組對IgA腎病模型大鼠血清SOD活力、MDA含量的影響表4結(jié)果表明,模型組SOD活力顯著降低,MDA含量顯著升高(均P001)。除人字草低劑量組對血清MDA含量無顯著影響外,其他各給藥組SOD活力均顯著上升,MDA含量均顯著下降(P005或P001)，其中以人字草高劑量組和雷公藤多苷組效果明顯。表4各組對IgA腎病模型大鼠血清SOD活力、MDA含量的影響(略)3討論IgA腎病是臨床最常見的一種腎小球腎炎,約占復(fù)發(fā)性腎小球疾病的2634。臨床典型癥狀為與上呼吸道感染相關(guān)的肉眼血尿,少數(shù)有蛋白尿、高血壓及腎功能衰

22、竭,目前病因尚不清楚,因此無特效治療辦法,探索其發(fā)病機(jī)制并尋求有效的治療辦法是十分必要的。本研究結(jié)果表明,三葉人字草水煎液能增強(qiáng)小鼠耳廓血液微循環(huán)，改善大鼠血液流變學(xué),對于三葉人字草在治療IgA腎病中擴(kuò)張腎小球毛細(xì)血管,增加腎血流量,改善血液流變學(xué)指標(biāo),減輕腎小球損害的機(jī)制方面具有一定意義。本研究結(jié)果還表明,模型組血清中SOD活力降低,MDA含量升高,經(jīng)三葉人字草治療后,SOD活力均顯著上升,MDA含量不同程度下降。SOD是起催化作用的酶質(zhì),是最常用的反映抗氧化能力的指標(biāo)6。IgA腎病在發(fā)病過程中抗原抗體免疫復(fù)合物沉積在腎小球后激活補(bǔ)體系統(tǒng)引起炎癥反應(yīng)。其中,氧自由基起了重要作用,中性粒白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞與免疫復(fù)合物接觸后除釋放裂解基底膜的蛋白酶外,還產(chǎn)生大量氧自由基,激活的粒細(xì)胞比靜止時產(chǎn)生的活性氧要高10倍。而生物膜中不飽和脂肪酸的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物MDA含量可間接反映機(jī)體內(nèi)抗氧化的能力水平7。由此可知,氧自由基、脂質(zhì)過氧化損傷可能參與了IgA腎病的炎癥反應(yīng),提高抗氧化酶活性,減輕或阻斷脂質(zhì)過氧化鏈鎖反應(yīng)是治療IgA