EPC10膜片鉗放大器的使用

1、EPC10膜片鉗放大器的使用東樂科技有限公司技術(shù)部主任劉振偉一、概述德國HEKA公司生產(chǎn)的EPC（Extracellularpatchclamp）系列放大器的早期型號為EPC5,這是世界上最早的膜片鉗放大器。 此后陸續(xù)升級為EPC7、EPC8、EPC桿口EPC10,EPC9和EPC10為全電腦控制的膜片鉗放大器。目前EPC放大器的最高版本為EPC10膜片鉗放大器 （截至到2011年7月） ， 有EPC10USB和EPC10Plus兩大類機(jī)型。本文講解EPC10USB的使用。EPC10USB膜片鉗放大器主要有如下應(yīng)用：單通道記錄：可記錄亞pA級的單離子通道電流。低噪聲全細(xì)胞膜片鉗記錄、電壓鉗/電

2、流鉗/低頻電壓鉗（LFVC）記錄：可記錄全細(xì)胞膜各種離子通道電流、細(xì)胞動作電位等。傳統(tǒng)細(xì)胞內(nèi)記錄：可記錄動作電位、細(xì)胞放電等。使用金屬電極的場電位記錄：如整體動物與腦片的誘發(fā)場電位記錄。突觸長時(shí)程增強(qiáng)（LTP）/長時(shí)程抑制（LTD）記錄：整體動物與腦片的LTP/LTD記錄。松散封接記錄、人工脂膜離子通道、納米孔等的記錄：放大器探頭有足夠的大電流測量能力，最大可測量2wA的電流。離子選擇性測量：采用離子選擇性電極檢測溶液中某一離子濃度。電化學(xué)檢測（伏安法/安培測量法）：如采用碳纖電極的細(xì)胞或膜片安培測量法，檢測細(xì)胞某些物質(zhì)的釋放。細(xì)胞胞吞/胞吐或突觸遞質(zhì)釋放的研究：采用膜電容測定法，可測量因細(xì)胞

3、胞吞、胞吐或突觸遞質(zhì)釋放所引起的全細(xì)胞膜電容的微小變化。EPC10英片鉗放大器具有如下顯著特點(diǎn)：儀器面板的各個(gè)功能鈕/鍵均為計(jì)算機(jī)控制， 所有操作均在程序面板中通過鼠標(biāo)與鍵盤進(jìn)行。面板程序可在PC機(jī)（Windows2000XPVista操作系統(tǒng)）和蘋果機(jī)（MacOS10.4及以上版本操作系統(tǒng)）上運(yùn)行。放大器本底噪聲小于90fA。探頭有三種反饋電阻，可測量的最大電流分別為200pA（50GQ）、20nA（500MQ2A（5M，。測量范圍滿足絕大多數(shù)電生理實(shí)驗(yàn)信號的要求。電極電容（快電容）和膜電容（慢電容）補(bǔ)償可自動進(jìn)行。液接電位實(shí)現(xiàn)了自動校正，無需其他常見膜片鉗放大器的手工計(jì)算與校正。具有Loc

4、k-in放大器功能，可對膜電容微小變化進(jìn)行精確檢測,用于與膜面積有關(guān)的細(xì)胞分泌等的研究。通過軟件擴(kuò)展功能，可進(jìn)行離子濃度熒光檢測，實(shí)現(xiàn)光電聯(lián)合檢測。EPC10USB主要具有如下四種機(jī)型：1) EPC10USB:含有一個(gè)探頭，為一臺膜片鉗放大器。2) EPC10USBDouble：含有兩個(gè)探頭，為兩臺組合在一起的EPC10放大器。3) EPC10USBTriple：含有三個(gè)探頭，為三臺組合在一起的EPC10放大器。4) EPC10USBQuadro：含有四個(gè)探頭，為四臺組合在一起的EPC10放大器。上述任何一種機(jī)型在機(jī)箱內(nèi)都包含一個(gè)UH8+8AD/DA轉(zhuǎn)換器，提供4個(gè)DA輸出通路，滿足每個(gè)放大器

5、同時(shí)輸出刺激的需要；同時(shí)提供8個(gè)獨(dú)立的AD通路，滿足獨(dú)立的放大器對電流、電壓信號的輸入。對于含有多個(gè)放大器的EPC10USB機(jī)型， 可通過放大器軟件面板選擇某一放大器，使其激活。被激活的放大器可接受軟件設(shè)置的命令，并在放大器面板上通過DigitalBus綠燈顯示，當(dāng)有軟件命令輸出給放大器時(shí)，DigitalBus燈會閃爍。未被激活的放大器不能接受命令信號，但只要選擇上，仍然可隨時(shí)被激活。以下介紹的是EPC10USB。二、探頭（一）探頭特點(diǎn)（1） EPC10的探頭呈狹窄長條形，體積較小，這樣設(shè)計(jì)的目的是為了在有限的顯微鏡工作距離下，便于記錄電極的操作。（2）探頭表面有探頭的序列號，如果是Doubl

6、e機(jī)及以上機(jī)型，探頭表面還有“Probe名字樣。（3）底部有能固定在微操縱器上的塑料底座適配器，可與絕大多數(shù)類型的微操縱器直接進(jìn)行匹配。在購置某些微操縱器時(shí)，要注意選擇與探頭匹配的適配器。（4）探頭內(nèi)部有一個(gè)電流-電壓轉(zhuǎn)換器（Current-to-voltageconverter）,即攝入電流，輸出電壓。這與一般的微電極放大器探頭不同，后者攝入和輸出的均為電壓。（5）探頭具有5MQ、500MQ和50GQ三種反饋電阻，分別用于記錄雙分子層膜、松散封接模式、大細(xì)胞等的大電流（2pA）,一般的全細(xì)胞電流（20nA）和單通道電流（200pA）。（二）探頭連線（1）信號輸入端口：用聚四氟乙烯（Teflo

7、n,白色）絕緣的BNC插口，與電極夾持器（Holder）直接連接。（2）地線連接口（GND）:為黑色插孔，承載高質(zhì)量接地信號，用于將浴池（參比）電極接地，也可用于將探頭附近的物體（如顯微鏡）、屏蔽設(shè)施等接地。該接地口通過探頭電纜線與放大器前面板上的信號地（SignalGND）相連通。（三）探頭使用注意事項(xiàng)在放大器開啟的情況下，應(yīng)盡量避免用手直接觸碰信號輸入端口，否則可能由于手上帶有靜電而損傷探頭內(nèi)部電路！在更換玻璃電極時(shí)，若一定要觸碰信號輸入端口，請一定先除去手上的靜電（通過觸摸其他金屬物體，如屏蔽網(wǎng)等），再觸碰信號輸入端口。若由于探頭損壞而更換探頭，則需要在連接新探頭后對放大器進(jìn)行校正，方法

8、為： 開啟EPC10,預(yù)熱30min后， 放大器與探頭均處于正常工作的溫度。打開Patchmaste軟件的EPC10_USB菜單，選擇TestandCalibrat磔目，即可對EPC10放大器進(jìn)行全方位校正。 校正的內(nèi)容包括放大器軟件面板上所有的數(shù)碼開關(guān)和控制按鈕，這些結(jié)果僅是針對正在被校正的放大器的，不適用于其他EPC10放大器。校正的結(jié)果可存儲為Scale.epCC件。該校正應(yīng)該每隔半年進(jìn)行一次，如果發(fā)現(xiàn)放大器的頻響不準(zhǔn)確或者偏移比較明顯時(shí)，應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行校正。校正過程耗時(shí)5-10min,依計(jì)算機(jī)的速度而異。放大器校正后，再用Re-InitializeEPC10_US時(shí)能對放大器進(jìn)行初始化。三

9、、電極夾持器為了獲得低噪聲記錄，電極夾持器必須直接插入探頭中。不推薦將電極夾持器屏蔽的做法，因這樣可引入更多的隨機(jī)噪聲（背景噪聲可增加1-2倍），這些隨機(jī)噪聲來自夾持器塑料材質(zhì)（聚碳酸酯）的非理想化絕緣特性和液體水膜上的熱電壓波動。金屬的屏蔽物質(zhì)可使更多的噪聲通過電容耦合方式進(jìn)入放大器探頭，尤其是單通道記錄更不能屏蔽夾持器。聚碳酸酯具有低介電損失性，若自己制作電極夾持器，要考慮采用低介電損失的材料，表面要具有疏水性，以防液膜的形成。聚碳酸酯是目前發(fā)現(xiàn)的符合上述特點(diǎn)的最佳材料。使用電極夾持器時(shí)，將銀絲（長度一般在4.5cm）焊接在銅針上，后者插入探頭BNC插口內(nèi)。 銀絲表面需要鍍上AgCl,可用

10、含Cl離子的溶液 （如100mMKCl溶液或生理鹽溶液）電鍍（與銅針焊接處部位的銀絲不要電鍍）。電極夾持器的噪聲測定：將含有銀絲電極的夾持器插入探頭，探頭用錫箔紙包裹， 采用放大器的NoiseTest功能測量噪聲。 良好的夾持器應(yīng)該只增加噪聲10%左右，例如從95至U105fAo四、模型細(xì)胞一般的膜片鉗放大器均配備模型細(xì)胞，它的用途有如下兩個(gè)：（1）用于模擬真實(shí)細(xì)胞的膜反應(yīng)，幫助初始者演練放大器各項(xiàng)功能的使用；（2）用于檢測放大器的功能是否正常，如果用模型細(xì)胞檢測放大器時(shí)沒有問題，則表明放大器功能是正常的。與EPC10放大器配備的是MC10模型細(xì)胞，它通過BNC適配器與探頭信號輸入接口連接，通

11、過另一根細(xì)線與探頭GND接地口連接。其上有三個(gè)位置，通過扳手來選擇：10M位置：模擬電極入浴液，電極電阻為10MQ?？赡M進(jìn)行施加測試脈沖和補(bǔ)償失調(diào)電位（如液接電位等）。中間的位置：模擬電極與細(xì)胞膜形成高阻封接，電極電容（及其他漂浮電容）為6pF?？赡M進(jìn)行電極電容（C-fast）的補(bǔ)償功能。0.5G位置：模擬形成了全細(xì)胞記錄模式，串聯(lián)電阻為5.1MQ,膜阻抗為500MIQ（0.5GQ），膜電容為22pF?？赡M進(jìn)行膜電容（C-slow）的補(bǔ)償功能和電流鉗模式， 還可用于檢測軟件Patchmaste編輯輸出的刺激脈沖。五、儀器面板（一）前面板1. PowerSwitch電源開關(guān)。 為讓放大器能

12、正確地初始化， 一般是要先開啟放大器電源開關(guān)，再打開采樣軟件（Patchmaster或TIDA）。當(dāng)然，在忘記先開啟放大器時(shí)，也可通過采樣軟件重新對放大器進(jìn)行初始化。注意,在開始實(shí)驗(yàn)前，放大器需要預(yù)熱至少15分鐘。2. Probe用于連接探頭3. ChassisGnd（CHAS）EPC10放大器的機(jī)殼地。與大多數(shù)儀器一樣，該機(jī)殼地與電源地相連通。為避免形成地線環(huán)路，在放大器設(shè)計(jì)上，信號地與機(jī)殼地之間不直接連通，而是中間連接了一個(gè)10Q的電阻。4. ExternalStim.InputCC外部來源的電壓刺激信號從這里輸入，放大器會根據(jù)需要設(shè)定的比例轉(zhuǎn)化為刺激電流，可與放大器內(nèi)部的電流刺激信號疊加

13、，用于電流鉗模式。5. ExternalStim.InputVC外部來源的電壓刺激信號從這里輸入，它們可與放大器內(nèi)部的電壓刺激信號疊加，用于電壓鉗模式。疊加的刺激信號通過2極濾波器濾波，以去除電壓變化初始與結(jié)束時(shí)產(chǎn)生的躍遷，這避免了刺激命令處理電路出現(xiàn)非線性特性，同時(shí)也降低了電極電容快速充電時(shí)產(chǎn)生的電流瞬變值幅度。軟件提供兩個(gè)濾波等級（用10-90%瞬變值幅度上升時(shí)間表示）：2屋是防止放大器內(nèi)部電路出現(xiàn)非線性化所需的最小上升時(shí)間）和20最適合于那些除了最快速測量以外的所有測量，用于降低電容瞬變值幅度）。6. VoltageMonitor將電極上的電壓輸出給監(jiān)視系統(tǒng)（如示波器），該電壓是將輸出給

14、電極的電壓放大了10倍。 該輸出的阻抗為50Qo在Patchmaste的示波窗口中可顯示原始的未被放大的信號。7. CurrentMonitor輸出電極電流，該信號經(jīng)過了在放大器軟件面板中所設(shè)置的濾波器濾波。正電壓與從電極輸出的電流相對應(yīng)。通常，左手邊的輸出（Filter1）是經(jīng)過放大器軟件面板中Filter1濾波后的輸出，可輸出給數(shù)據(jù)記錄裝置（如磁帶記錄儀等），用于記錄寬頻信號，如可記錄單通道活動。右手邊的輸出（Filter2）是經(jīng)過放大器軟件面板中Filter2額外濾波后的輸出，用于輸出給示波器，監(jiān)視整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程（如封接、破膜等）。上述任何一種輸出都可在軟件Patchmaste的示波窗口中

15、顯示。8. SignalGND為香蕉插口， 是高質(zhì)量的信號地， 可用做膜片鉗系統(tǒng)中其他儀器的公共地。9. Clipping這是一個(gè)二極管指示燈，當(dāng)放大器輸入電流飽和時(shí)該指示燈亮。在電壓鉗實(shí)驗(yàn)中，電容充放電偽跡將被電腦去除，而去除過程只有在不出現(xiàn)飽和的情況下完成，該指示燈起到這樣一個(gè)監(jiān)督的作用。特別地，雖然通過濾波后輸出的電壓沒有達(dá)到飽和，但如果濾波前輸出的電壓是飽和的，則該指示燈也會指示飽和！10. DigitalBus該指示燈顯示計(jì)算機(jī)正發(fā)送數(shù)碼信息到EPC1瞅大器。11. A/DInputs放大器內(nèi)設(shè)的轉(zhuǎn)換器（EPC10采用LIH1600,EPC10USB采用LIH8+8）提供8個(gè)模擬/數(shù)

16、碼（A/D）輸入通道，其中3個(gè)在儀器內(nèi)部與EPC1處接(若使用EPC10DoubledEPC10Triple,則分別有5或7個(gè)與放大器在內(nèi)部連接)。剩余的輸入通道可提供給其他應(yīng)用程序軟件，如Patchmaste可利用這些通道監(jiān)測從溫度傳感器、壓力傳感器或其他傳感器的輸出。12. TriggerIn外部觸發(fā)信號輸入口。當(dāng)在采樣軟件Patchmaste中的PulseGenerator擇TriggerSerie或TriggerSweeps寸， 外部觸發(fā)信號通過該輸入口觸發(fā)放大器進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。13. TriggerOutputTTL觸發(fā)輸出。有3個(gè)輸出，用于使其他設(shè)備與膜片鉗實(shí)驗(yàn)同步化.14. D/A

17、Outputs提供3個(gè)數(shù)碼/模擬(D/A)信號輸出通道(0-2),它們攜帶如下信號：DA-0-Free(C-slowduringCap.Track)DA-1-Free(G-seriesduringCap.Track)DA-2-Free在Patchmaste采樣軟件的Capacitance-Tracking模式，DA-0和DA-1接口可作為特殊用途的輸出口，這可在軟件中設(shè)定。如果在EPC10放大器軟件面板中執(zhí)行CapTrack功能，則DA-0將輸出C-slow數(shù)值，DA-1將輸出G-series(=1/R-series)的數(shù)值。上述數(shù)值是以電壓形式輸出的，G-seriesd勺轉(zhuǎn)換因子為100nS

18、/V,C-slow的分別是0.5、5或50pF/V（對應(yīng)于30、100和1000pFE圍的電容值）。DA-2通常用于觸發(fā)示波器或隔離器。注意：（1）當(dāng)在軟件面板中使用Rese時(shí)， 上述輸出的數(shù)值將都變?yōu)?。（2）當(dāng)需要使用軟件面板CapTrack功能時(shí)，不能將DA-0和DA-1用做觸發(fā)信號的輸出。（3）這3個(gè)接口是輸出口，千萬不要將刺激信號從這里輸入。（二）后面板EPC10USB后面板上有2個(gè)25針的連接口、1個(gè)40#的連接口和4個(gè)通信輸入器口，用于放大器與其他設(shè)備的連接。15.USB接計(jì)算機(jī)USB2.0口，連接放大器軟件與EPC10USB主機(jī)。在連接有多個(gè)EPC10USB放大器時(shí)，為使采集時(shí)

19、鐘同步化，需要將一個(gè)放大器的MASTERSYNC和另一個(gè)放大器的SLAVESYNC用標(biāo)準(zhǔn)CAT5網(wǎng)線連接，而且該線要求越短越好。16.DIGTALIN從外部設(shè)備來的TTL邏輯電路的觸發(fā)信號輸入口，為25針的輸入口。17.DIGTALOUTTTL邏輯電路的數(shù)字信號輸出口，為25針的輸入口。用于輸出觸發(fā)信號給其他設(shè)備，如給藥灌流系統(tǒng)。第21-23針輸出的觸發(fā)信號也可通過前面板的TRIGGERINPUT/OUTPUT中的OUT0至OUT2輸出。18.DigitalIN/OUT只用于和HEKA公司的其他設(shè)備連接，如連接EPC8或TIB14到EPC10USBa大器。為40針的輸入/輸出口。19.TELE

20、GRAPHINPUTS4個(gè)通信輸入器插口，用于將EPC10USB大器的濾波頻率（Frequency）、所測月I電容（Cm）、增益（Gain）大小等信息輸出給軟件。20.AUXDAC輔助數(shù)模通路。21.SOUND聲音輸出口。22.Power電源線插口，輸入電壓有90-210V和220-250V兩個(gè)交流電范圍段，可自動調(diào)節(jié)。保險(xiǎn)絲的規(guī)格是1mA。六、軟件面板（一）主要功能1.單機(jī)與多機(jī)無論單機(jī)還是多機(jī)，都共用一個(gè)UH8+8型AD/DA轉(zhuǎn)換器。該轉(zhuǎn)換器提供4個(gè)DA通道（可允許同時(shí)輸出4個(gè)刺激信號）、8個(gè)AD通道（可同時(shí)攝取不同放大器的8個(gè)電壓或電流信號）。當(dāng)前正在激活的放大器可通過儀器前面板上的Di

21、gitalBus綠燈在閃亮判斷出來。當(dāng) 使 用EPC10DoubleTriple或QuadroM大 器 時(shí) ， 軟 件 面 板 會 顯 示1.Amplifier2.Amplifier,”等。點(diǎn)擊其中任何一個(gè)放大器，則將激活該放大器，顯示為紅色。各放大器的設(shè)置是互不影響、相互獨(dú)立的。2. Gain電流輸出的增益。數(shù)值范圍為0.005-2000mV/pA,分為三檔：0.005-0.002、0.5-20和50-2000mV/pA,分別對應(yīng)于探頭5MQ、500MQ和50GQ的反饋電阻，用于記錄不同范圍大小的電流（見下表）。當(dāng)選擇不同Gain數(shù)值（通過鍵盤上的上下箭頭或拖動鼠標(biāo)來選擇）時(shí)，軟件會自動選擇

22、相對應(yīng)的探頭反饋電阻的大小來通過電流。低范圍的Gain用于雙層膜、松散封接膜片和大細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)，在這類實(shí)驗(yàn)中，記錄的電流比較大（可高達(dá)2w必右），電容補(bǔ)償可達(dá)1nF,可補(bǔ)償小至10Q的串聯(lián)電阻。中范圍的Gain主要用于一般大小的細(xì)胞的全細(xì)胞記錄，記錄的電流范圍可達(dá)20nA,電容補(bǔ)償可達(dá)1000pF,可進(jìn)行串聯(lián)電阻補(bǔ)償和電流鉗記錄模式，背景噪聲比高范圍Gain的噪聲大，但提供100kHz的頻帶寬。高范圍Gain用于單通道記錄，其噪聲極低，但記錄的最大電流大約在200pA以內(nèi)，最大頻帶寬約為60kHz,但是一些在中范圍Gain情況下的功能不能使用（如電容補(bǔ)償最大為100pF、電流鉗模式不能使用等）表

23、.EPC10增益Gain的三個(gè)范圍Gain(mV/pA)0.005-0.0020.5-2050-2000對應(yīng)的反饋電阻大小5MQ500MQ50GQ電壓鉗模式能夠測量的最大電流i2pA及0nAi200pA電流鉗模式能夠輸出的最大電流與00nA10nA攝取信號的頻帶寬（kHz）10010060C-slow慢電容補(bǔ)償范圍（pF）30/100/100030/100/100030/100是否具有電流鉗模式是是否能否進(jìn)行串聯(lián)電阻補(bǔ)償能能能適用的記錄模式大電流記錄（雙分子層膜、松散封接或大細(xì)胞）全細(xì)胞記錄單通道記錄3. ClippingIndicator當(dāng)放大器的輸入發(fā)生飽和時(shí)，在Gain的標(biāo)框處出現(xiàn)一個(gè)閃

24、爍的Clip”，警示電流超載。這個(gè)Clip與放大器前面板上的Clipping燈的功能相同，但它給人的感覺好像比后者更敏感，其實(shí)不然，它只是將處于超載的時(shí)間顯示得長些而已。4. V-membrane電壓鉗模式下，用于設(shè)定（雙擊鼠標(biāo)左鍵或單擊右鍵輸入）鉗制電位（范圍為由,000mV）。電流鉗模式下（顯示為I-membrane）,用于設(shè)定（雙擊鼠標(biāo)左鍵或單擊右鍵輸入）鉗制電流（范圍為1,000pA）。如果零電位（該電位下通過電極的電流為零）已經(jīng)被正確設(shè)置，則軟件會將液接電位和其他失調(diào)電位進(jìn)行校正，以保證鉗制電位的準(zhǔn)確性。5. I-mon顯示實(shí)際測量的通過電極的直流電流（基線位置的電流）。在對液接電位

25、等失調(diào)電位進(jìn)行補(bǔ)償后，該電流應(yīng)接近0。6. V-mon顯示對液接電位等失調(diào)電位校正后實(shí)際測量的通過電極的電壓。在施加鉗制電位（V-membrane）后，則顯示鉗制電位。但注意的是，在某些情況下 （如在長刺激脈沖期間） ，V-mon可能會暫時(shí)與所設(shè)定的鉗制電位有些不一致，因?yàn)樗@示的是鉗制電位V-membrane與所設(shè)定的刺激脈沖電壓之和的平均值。7. R-memb在電極進(jìn)入浴液到形成封接前，R-memb（R-membrane）顯示串聯(lián)電阻Rs（主要為電極電阻）的大小，封接形成后顯示封接電阻Rseal的大小，形成全細(xì)胞記錄模式后則顯示細(xì)胞膜電阻Rm的大小。其數(shù)值是通過測量基線與測試脈沖后半部分的

26、電流幅度來獲得的。可通過本軟件面板下部的“Soun效能（見后）對R-memb大小進(jìn)行聲音監(jiān)控。8. InputADC在這里選擇Patchmaste采樣軟件示波窗口中可顯示的輸入信號， 包括如下幾種：F2-EXT:外部刺激命令，從放大器前面板上的aExternalStimInputVC輸入，經(jīng)過濾波器（Filter2）濾波，顯示在示波窗口。Imon-1:電流輸出1Imon-2:電流輸出2Vmon:電壓輸出AD0-4:任何其他的AD通道9. RecordingMode用于選擇記錄模式，包括InOut（內(nèi)面向外記錄模式）、OnCell（細(xì)胞貼附記錄模式）、OutOut（外面向外記錄模式）、Whole

27、Cell（全細(xì)胞記錄模式）和C-Clamp（電流鉗模式）10. TestPulse可產(chǎn)生一定幅度（在Amplitude中設(shè)定）與頻率（在Length中設(shè)定脈沖寬度，間接決定了脈沖頻率）的測試刺激脈沖施加給細(xì)胞，記錄電流反應(yīng)，僅適用于電壓鉗模式，用于監(jiān)測封接過程或其他需要給予刺激脈沖來監(jiān)測一些實(shí)驗(yàn)設(shè)置參數(shù)的情形。要關(guān)閉測試脈沖，可選擇其左側(cè)的off;要選擇單向脈沖，可選擇其左側(cè)的Single?？赏ㄟ^TestPulse右側(cè)的框選擇顯示輸出脈沖電壓還是電流反應(yīng)或都顯示。11. Amplitude/Length設(shè)定測試脈沖的幅度與持續(xù)時(shí)間。測試脈沖幅度的范圍為100mV,持續(xù)時(shí)間范圍為0.1-1000

28、ms當(dāng)脈沖持續(xù)時(shí)間為1ms時(shí)，每個(gè)測試脈沖含有100個(gè)采樣點(diǎn)，即采樣間隔時(shí)間為10pm。12. Noise該功能用于檢測放大器的內(nèi)部噪聲和環(huán)境噪聲，當(dāng)將探頭屏蔽時(shí)，檢測的是放大器的內(nèi)部噪聲，當(dāng)將探頭裸露時(shí)，檢測的是環(huán)境噪聲。執(zhí)行該功能時(shí)，rms噪聲電流被持續(xù)檢測與更新，此時(shí)將沒有測試脈沖輸出。rms噪聲電流通過當(dāng)前激活的AD數(shù)模通道采集，通常經(jīng)過Imon2輸出，頻帶寬由Filter2決定。電流的采樣間隔為100人獲得一個(gè)噪聲數(shù)值需要持時(shí)256ms,噪聲數(shù)彳1顯示在Noise儀表中。噪聲的詳細(xì)測量方法見七、功能檢測”。13. LJ（Liquidjunction）液接電位（mV）,該框內(nèi)需要手工輸

29、入液接電位的數(shù)值，放大器會根據(jù)這個(gè)數(shù)值對液接電位自動進(jìn)行校正。在線校正需要在封接前操作Auto-Vo、 輸入LJ合適的數(shù)值。 如果LJ輸入0mV,則放大器將不執(zhí)行校正功能。雙擊鼠標(biāo)左鍵輸入LJ數(shù)值（范圍及00mV）,可以拖動鼠標(biāo)改變LJ數(shù)值。LJ數(shù)值的計(jì)算方法見文獻(xiàn)（Neher,E.（1992）Correctionforliquidjunctionpotentialsinpatchclampexperiments.In:MethodsinEnzymology207,123-131,AcademicPress,NewYork.,用于計(jì)算LJ的常見離子遷移率見文獻(xiàn)（Barry,P.H.&Lynch

30、,J.W.（1991）Liquidjunctionpotentialsandsmallcelleffectsinpatch-clampanalysis.J.Memb.Biol.121,101-117）。下表列出了常見溶液與生理鹽溶液（140mMNaCl）之間的LJ值SolutionSolutionU U145Klutamate.8NaCl1MgCh.0.5ATP,10NaOH-HEPES10mV145KCIt8NaClp1MgCI2h0.5ATP,10NaOH-HEPES3mV60Cs-citrate.10CsCL8NaCl,1MgCI2,0.5ATP,20CsOH-HEPES12mV32Na

31、Cl,108Tris-CI,2.SKCI,2Mg%1CaCI2l10NaOH-HEPES-3mV70Na2SO4,70sorbitol,2.8KCI,2MgClz1CaCI2,10NaOH-HEPES6mVLJ的極性是生理鹽溶液相對于表中溶液的。注意：LJ不受Reset按鈕功能的影響，也不能用宏命令（macros）設(shè)定，這一限定是為了避免LJ的意外變化引起錯誤的LJ校正。如果我們用的電極內(nèi)液和細(xì)胞浴液是同一種溶液（且濃度也相同），則LJ應(yīng)該為0mV。對于標(biāo)準(zhǔn)的液接電位校正，LJ中輸入數(shù)值的正負(fù)極性應(yīng)該是浴液相對于電極內(nèi)液的電位，例如，如果電極內(nèi)液含有谷氨酸或天門冬氨酸，浴液中含有Cl離子，LJ

32、的極性應(yīng)該為正（如+10mV）。點(diǎn)擊Auto-Vo,V-membrane將變?yōu)?10mV （WholeCell和OutOut模式時(shí)） 或+10mV （OnCell和InOut模式時(shí)），此時(shí)LJ得到了準(zhǔn)確校正。在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，需要考慮的偏移電位主要有放大器偏移電位（范圍右0mV）、電極電位（范圍i200mV）,依賴于玻璃電極內(nèi)與參比電極附近的Cl離子濃度）、液接電位以及與要研究的細(xì)胞膜串聯(lián)的其他細(xì)胞膜的電位（如在細(xì)胞貼附式時(shí)）。實(shí)驗(yàn)中一些偏移電位是固定不變的，如放大器偏移電位和電極電位，而液接電位卻是變化的。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，首先要做的就是將那些固定不變的偏移電位去除，使通過玻璃電極的電流為0,這樣放

33、大器的命令電壓V-membrane就是施加給細(xì)胞膜的電壓。液接電位在實(shí)驗(yàn)中是變化的。例如在全細(xì)胞記錄模式，當(dāng)記錄電極進(jìn)入浴液時(shí)，因電極內(nèi)液與浴液的成分不同，液接電位得以產(chǎn)生。而當(dāng)形成全細(xì)胞記錄模式后，因電極內(nèi)液與細(xì)胞內(nèi)液接近，液接電位此時(shí)基本消失了。在電極剛?cè)朐∫簳r(shí)，為了去除液接電位，我們需要將其去掉（這個(gè)過程叫補(bǔ)償），而當(dāng)形成全細(xì)胞記錄模式時(shí)，又需要將已經(jīng)補(bǔ)償?shù)舻囊航与娢换謴?fù)回來（這個(gè)過程叫校正）。14. Vo（Pipetteoffset）Vo顯示總的失調(diào)電位（施加到電極上的實(shí)際電壓是V-membrane與Vo之和），可通過點(diǎn)擊Auto-Vo來自動顯示，也可拖動鼠標(biāo)手工調(diào)節(jié)。當(dāng)改動LJ時(shí)，V

34、o會隨之自動變化。注意：不推薦手工調(diào)節(jié)Vo,因?yàn)檫@會干擾放大器對液接電位的校正。15. Auto-VoAuto-Vo按鈕用于自動消除失調(diào)電位，使電極電流為0。失調(diào)電位的大小顯示在Vo,其范圍為受00mV。.Auto-Vo用于電極入浴液后至開始封接前的時(shí)間段，其與LJ的合用可對液接電位進(jìn)行在線校正。點(diǎn)擊Auto-Vo后，V-membrane將變?yōu)長J的數(shù)值（OnCell和InOut模式時(shí)與LJ的極性相同，WholeCell和OutOut模式時(shí)與LJ的極性相反）。注意：Vo的數(shù)值不受Reset鈕的影響。16. Track它實(shí)質(zhì)上是在鉗制電位為0mV時(shí)，Auto-Vo功能的反復(fù)多次的執(zhí)行，執(zhí)行的頻率

35、取決于EPC10菜單中SearchModeDelay的設(shè)定。17. C-fast用于補(bǔ)償電極電容和其他漂浮電容（范圍為0-15pF）。如果探頭輸入端不接任何東西，放大器仍會有殘存的1-1.5pF的輸入電容，可被C-fast補(bǔ)償。補(bǔ)償功能有兩個(gè)框，上面的框顯示電容值，下面的框顯示電容充放電的時(shí)間常數(shù)T（8Qs。補(bǔ)償可通過拖動鼠標(biāo)手工進(jìn)行，也可輸入電容數(shù)值和團(tuán)直，還可點(diǎn)擊右面的Auto進(jìn)行自動補(bǔ)償。如果將鼠標(biāo)放在“T,則上下拖動鼠標(biāo)可改變補(bǔ)償?shù)碾娙葜?，左右拖動鼠?biāo)可改變時(shí)間常數(shù)日直。Auto自動補(bǔ)償?shù)脑硎牵菏┘咏o電極一些5mV的脈沖，對產(chǎn)生的電容電流進(jìn)行平均，然后用指數(shù)方程擬合出電容補(bǔ)償數(shù)值。如

36、果Auto不能擬合出一個(gè)理想的補(bǔ)償數(shù)值，Auto右側(cè)標(biāo)有E的小框?qū)⒆兓野?。在采用?xì)胞貼附式記錄模式時(shí)，若對玻璃電極涂抹Sylgard樹脂（電極電容變小）并且將C-slow關(guān)閉，止匕時(shí)Auto補(bǔ)償功能的效果最好。放大器軟件提供了兩種補(bǔ)償方法，快速補(bǔ)償方法采用查表法（look-uptable）,即將放大器內(nèi)儲存的數(shù)值表查找一遍直至找到某個(gè)值的過程。該方法首先需要在。中選擇MakeC-fast,在默認(rèn)路徑中創(chuàng)建出文件CFast.epCo如果程序找不到該文件，則在打開Patchmaste時(shí)將出現(xiàn)信息，提示找不到文件，此時(shí)，程序?qū)⒉捎寐a(bǔ)償方法（反復(fù)補(bǔ)償法）。18. C-slow用于膜電容補(bǔ)償。有3個(gè)電

37、容補(bǔ)償范圍，在Range中：30pF（0.12-30pF）、100pF（0.4-100pF）和1000pF（4-1000pF）。該范圍還受到程序的限制，即必須保證時(shí)間常數(shù)T=R-seriesxC-slow大于5p以防止振蕩的出現(xiàn)。C-slow補(bǔ)償可通過拖動鼠標(biāo)手工進(jìn)行，也可輸入電容數(shù)值，還可點(diǎn)擊右面的Auto進(jìn)行自動補(bǔ)償（包括C-slow和R-series）。C-slowRange選擇膜電容補(bǔ)償?shù)姆秶?。Off-關(guān)閉補(bǔ)償功能，30pF用于小細(xì)胞，100pF用于中小尺寸的細(xì)胞，1000pF用于大細(xì)胞。注意：（1）當(dāng)選擇1000pF范圍時(shí)，Gain只能選擇低和中范圍，如果Gain選擇高于20mV/p

38、A的數(shù)值，程序會自動將補(bǔ)償范圍降到100pF。（2）若使用CapTrack功能測量電容的微小變化，應(yīng)該盡可能選擇大范圍的C-slow,這與直覺恰好相反，選擇大范圍的C-slow將使補(bǔ)償更加精確，分辨率更高。R-series顯示串聯(lián)電阻的數(shù)值。 范圍為0.1-10GQO通過該數(shù)值可決定膜充放電反應(yīng)的時(shí)間常數(shù)和對串聯(lián)電阻進(jìn)行補(bǔ)償。該數(shù)值的調(diào)節(jié)受限于膜電容數(shù)值以及補(bǔ)償范圍Range該數(shù)值可通過拖動鼠標(biāo)手工進(jìn)行更改，也可直接輸入數(shù)值，還可點(diǎn)擊右面的Auto自動進(jìn)行測量。如果將鼠標(biāo)放在“T,則上下拖動鼠標(biāo)可改變補(bǔ)償?shù)碾娙葜礐-slow,左右拖動鼠標(biāo)可改變串聯(lián)電阻R-series值。AutoC-slow該

39、功能可自動執(zhí)行C-slow補(bǔ)償功能和測量串聯(lián)電阻R-series數(shù)值。若C-slowRange處于Off狀態(tài)，點(diǎn)擊Auto時(shí)將自動把范圍設(shè)成1000pF（低和中范圍Gain時(shí)）、100pF（高范圍Gain時(shí)）。該功能在C-fast執(zhí)行后進(jìn)行時(shí)效果好，且為了獲得更好的補(bǔ)償效果， 反復(fù)交互執(zhí)行AutoC-fast和AutoC-slow效果更佳。如果Auto功能不能給出一個(gè)理想的補(bǔ)償數(shù)值，Auto右側(cè)標(biāo)有E的小框?qū)⒆兓野?。連續(xù)重復(fù)執(zhí)行Auto可采用CapTrack功能（見下）。注意：在執(zhí)行Auto前，提供合理的C-slow和R-series估計(jì)值是必須的，否則Auto的自動補(bǔ)償功能可能會失敗。Cap

40、Track點(diǎn)擊該按鈕可連續(xù)重復(fù)執(zhí)行AutoC-slow補(bǔ)償功能， 跟蹤補(bǔ)償膜電容可能發(fā)生的微小變化，測量出電容值與串聯(lián)電阻R-series值，再次點(diǎn)擊可關(guān)閉該功能。注意：在Patchmaster采樣軟件EPC10菜單中，選擇OutputCap.Track選項(xiàng)，則可將測量的電容值和串聯(lián)電導(dǎo)G-series（1/R-series）值分別輸出到DA0和DA1。換算系數(shù)G-series是100nS/V,C-slow是0.5、5或50pF/V（分別對應(yīng)于電容范圍30、100和1000pF）。點(diǎn)擊Reset鈕，DA輸出的數(shù)值將被調(diào)為0。如果要激活OutputCap.Track功能，則一定要確保觸發(fā)DA不能

41、是DA0或DA1通道。Delay該功能設(shè)置下一次Cap.Track執(zhí)行前的等待時(shí)間。當(dāng)Delay特別短時(shí)（如1ms）,膜電容測量的更新頻率大于10Hz（還取決于計(jì)算機(jī)類型）。當(dāng)關(guān)閉采樣軟件示波窗口時(shí)，CapTrack的更新速度可增加約2倍。19. RsComp全細(xì)胞記錄電壓鉗模式下，細(xì)胞膜電位由施加在記錄電極上的鉗制電位所決定。但是這種鉗制電位鉗制的效果并不完全，因?yàn)樗€依賴于來自電極至細(xì)胞內(nèi)部的串聯(lián)電阻（Rs）和所記錄電流幅度的大小。Rs因與電極電阻串聯(lián)而得名，一部分Rs來自電極電阻本身，但通常大部分Rs來自殘留的破裂膜電阻，實(shí)驗(yàn)中，通常Rs至多降低到電極電阻的2倍。Rs對電流記錄帶來兩方面

42、的負(fù)面影響：（1）首先，當(dāng)通過電極輸出步階電壓給細(xì)胞時(shí)，Rs延遲了膜電容充電反應(yīng)。膜充電反應(yīng)的時(shí)間常數(shù)個(gè)RsxCm（Cm是膜電容），例如，若Rs=5MQ,Cm=20pF,則時(shí)間常數(shù)T=1004s該時(shí)間常數(shù)對于研究快速的電壓門控性離子通道電流（如Na通道電流）來說是太長了。（2）其次，當(dāng)膜上有大電流通過時(shí)，Rs產(chǎn)生的膜電位誤差增大。例如，若Rs=5MQ,則2nA的通道電流將產(chǎn)生10mV的膜電位誤差，這對于研究電壓門控性離子通道電流來說已經(jīng)相當(dāng)大了（一般要保持在2mV以下的誤差）。執(zhí)行Rs補(bǔ)償功能時(shí)需要選擇補(bǔ)償速度與設(shè)定補(bǔ)償?shù)某潭龋ò俜直龋Ｑa(bǔ)償速度有如下選擇:Off-關(guān)閉補(bǔ)償功能100WS慢補(bǔ)償

43、10s快速補(bǔ)彳嘗 2s極快速補(bǔ)償如何選擇補(bǔ)償速度取決于時(shí)間常數(shù)描的大小。如果描小于500M應(yīng)選擇2%s提供補(bǔ)償必需的速度。極快速補(bǔ)償可加快電壓鉗制速度，但需要苛刻的調(diào)節(jié)， 以防止產(chǎn)生高頻振蕩。 極快速補(bǔ)償時(shí)，F(xiàn)ilter1將自動切換為HQ-30kHz設(shè)置。電流鉗模式下，Rs-Comp將成為橋補(bǔ)償。理論上講，Rs補(bǔ)償?shù)陌俜直仍酱笤胶?，但?shí)際上補(bǔ)償超過90%將產(chǎn)生電極振蕩。如何設(shè)定補(bǔ)償?shù)某潭纫踩Q于時(shí)間常數(shù)曲的大小。如果日直大于100w,s可以最大補(bǔ)償?shù)?0%而不產(chǎn)生嚴(yán)重的振蕩。 對于較小的譴，補(bǔ)償?shù)某潭葢?yīng)該為僅低于產(chǎn)生振蕩的百分比數(shù)值。Auto按鈕可以自動調(diào)節(jié)補(bǔ)償?shù)脑O(shè)置，使膜電位的躍遷速度達(dá)到最

44、大，并使超射最小，防止振蕩產(chǎn)生。20. Filter1和Filter2Filter1:設(shè)置放大器3極濾波器的濾波頻率，有如下4個(gè)選項(xiàng)：Bessel100kHz、Bessel30kHz、Bessel10kH濟(jì)口HQ30kHz。一般情況下選擇10kHz就已經(jīng)足夠了，可有效地降低高頻噪聲的干擾。當(dāng)進(jìn)行快速RsComp時(shí)（如選擇2此處會自動選擇HQ30kHz,其他場合基本不用HQ30kHz。Filter2:設(shè)置放大器4極濾波器的濾波頻率，只用于I-mon2電流信號。Filter2與Filter1是串聯(lián)的。濾波頻率可通過拖動鼠標(biāo)手工進(jìn)行，也可輸入數(shù)值，范圍為0.1-16kHz,步階為0.1kHz,保證精

45、確在0.5-15kHz范圍。有兩種濾波器類型供選擇， 一是Bessel,這是我們最常采用的濾波器， 另一個(gè)是Butterworth,具有大的衰減斜率，主要用于功率譜分析。注意：(1)當(dāng)Filter1和Filter2聯(lián)合使用說,實(shí)際上Filter2的濾波頻率是起真正濾波作用的，即為I-mon2信號的濾波頻率。(2)如果不適用Filter2濾波，而是采用外部濾波器濾波，則可將I-mon1輸出到外部濾波器的輸入端，將濾波器的輸出返回給放大器的AD通道(AD0AD5),將選擇的AD通道作為信號輸入通道。(3)當(dāng)放大器的輸出選擇I-mon1時(shí)，所用的濾波器為Filter1,此時(shí)Filter2失效。如要使

46、用Filter2,則必須先將放大器輸出更改為I-mon2。21. LeakComp漏電流補(bǔ)償功能。補(bǔ)償程度用電導(dǎo)表示，該電導(dǎo)稱為漏電導(dǎo)(Leakconductance,補(bǔ)償范圍為2nS、200nSfl20.S,分別對應(yīng)于高、中、低范圍的增益Gain。漏電流補(bǔ)償可通過拖動鼠標(biāo)手工進(jìn)行，也可輸入數(shù)值，還可點(diǎn)擊右面的Auto進(jìn)行自動補(bǔ)償。通過Track鈕可連續(xù)對漏電流補(bǔ)償進(jìn)行更新，跟蹤漏電流的變化。22. Stim當(dāng)對電位變化的速度要求不高時(shí)，外部輸入放大器的刺激信號可被一個(gè)2極Besse濾波，以降低快速的電容瞬變值幅度。放大器提供了兩個(gè)濾波等級(用10-90%瞬變值幅度上升時(shí)間表示)：2ws(是防

47、止放大器內(nèi)部電路出現(xiàn)非線性化所需的最小上升時(shí)間)和20猿6最適合于那些除了最快速測量以外的所有測量，用于降低電容瞬變值幅度）。通常選擇20w就足夠了，除非要研究諸如Na1道電流這種激活非?？斓碾娏鳌xterna處可輸入外部電壓刺激輸入的轉(zhuǎn)換系數(shù)，范圍是處10 x,便于使用不同的外部刺激器。注意：（1）如果沒有外部刺激器輸入到放大器前面板EXTSTIM.INPUTVC,強(qiáng)烈推薦將External設(shè)為Off（即為0）,這么做可有效地防止外部噪聲的攝入。（2）放大器內(nèi)部的鉗制電位V-membranei杯受該轉(zhuǎn)換系數(shù)變化的影響，但是，如果鉗制電位是通過外部的刺激器或另外的計(jì)算機(jī)設(shè)置的，則該轉(zhuǎn)換系數(shù)將

48、對鉗制電位V-membrane生影響。23. Zap用于打破細(xì)胞膜形成全細(xì)胞記錄模式。點(diǎn)擊Zap,放大器將通過電極給予細(xì)胞膜一個(gè)高電壓脈沖（幅度范圍為與V,持續(xù)時(shí)間為0.005-1000ms）o在采樣軟件Patchmaste申，打開Windows下拉菜單，開啟Configuration窗口，如果在Hardware中選擇ZapOnCellonly,貝UZap功能只用于形成封接后，而不能用于形成全細(xì)胞記錄模式后。24. Sound選擇此項(xiàng)后，R-membran嗷值的變化將有聲音的伴隨。 該功能需要計(jì)算機(jī)具有聲卡。25. Reset該功能可使EPC1儆件面板上的一些設(shè)定恢復(fù)到最初的默認(rèn)值。它將使DA

49、通道變?yōu)?,取消使用CapTracktC-slow和R-serie4勺輸出。另外，當(dāng)記錄宏命令時(shí)，也需要使用Rese助能使EPC10恢復(fù)到初始狀態(tài)。（二）一些較少使用的隱藏功能一些較為少用的功能隱藏在EPC10US瞰件面板的右側(cè)，通過點(diǎn)擊EPC10US瞰件最上端的“ShowAll,”可以顯示出來。1. LFVCV-memb用于設(shè)置低頻電壓鉗（Lowfrequencyvoltageclamp,LFVC）模式的鉗制電位。點(diǎn)擊右側(cè)的-V-memb”或R-pip點(diǎn)擊該鈕可將R-memb的數(shù)值拷貝過來到R-pip,用于在封接前將電極電阻值儲存在所采集的數(shù)據(jù)文件中。4. CC-Gain該功能可選擇電流鉗的

50、轉(zhuǎn)換系數(shù)（0.1pA/mV、1pA/mV和10pA/mV）,分別對應(yīng) 于 最 大 命 令 電 流1nA、10nA和100nA。 當(dāng) 通 過 放 大 器 前 面 板ExternalStim.InputCC輸入外部刺激命令時(shí)， 需要在此選擇轉(zhuǎn)換系數(shù)。 當(dāng)CC-Gain選擇1pA/mV,ExternalStim.InputCC輸入1mV的命令時(shí)， 將產(chǎn)生1pA的命令電流。注意：gain的選擇受該轉(zhuǎn)換系數(shù)的限制，如CC-Gain選擇1pA/mV,電流鉗模式下gain的范圍只能是0.5-20mV/pA。5. GentleCC-Switch該功能用在電壓鉗與電流鉗之間進(jìn)行反復(fù)切換時(shí)。GentleCC-Sw

51、itch選擇On：為維持膜電位穩(wěn)定，在切換為電流鉗時(shí)，I-hold不為0pA,而為某一數(shù)值，需要向細(xì)胞注入電流。為此，電壓鉗下V-mon應(yīng)該與初始的V-membran丁致。同樣，在返回到電壓鉗時(shí)，V-membran瑞會在電流鉗時(shí)的膜電位附近。GentleCC-Switch選擇Off:在切換為電流鉗時(shí)，I-hold將設(shè)為0pA。6.V-monGain所測量的V-mon可以在輸出到模數(shù)轉(zhuǎn)換器前， 被放大10或100倍。 放大*100倍時(shí)，電壓范圍為100mV,分辨率為1.5特別適用于電壓幅度較小的場電位記錄。7. LastV-membrane電流鉗模式下，膜電位非常容易改變，當(dāng)切換到電壓鉗時(shí)，V-

52、membran啼常不同于切換為電流車t模式之前的數(shù)值。LastV-membran而于儲存并恢復(fù)初始的V-membrane。8. Bell點(diǎn)擊該鈕啟動系統(tǒng)聲音，用于在實(shí)施宏命令時(shí)提供反饋信息。9. Relativevalue點(diǎn)擊該鈕， 則在記錄宏命令時(shí)， 任何值的變化都以相對變化值被記錄下來，例如，如果使鉗制電位從-60mV超極化到-70mV,則宏命令中將記錄-10mV。10. Overlay點(diǎn)擊該鈕，測試脈沖波形線將以疊加的方式顯示在采樣軟件示波窗口中。11. ListState點(diǎn)擊該鈕，將放大器設(shè)置狀態(tài)的一些信息發(fā)送到Notebook窗口中，包括放大器類型(Amplifier)記錄模式(Re

53、cordingMode)、鉗制電位(V-membrane)、增益(Gain)、濾波頻率(Filter2)、快電容補(bǔ)償(C-fast)和慢電容補(bǔ)償(C-slow)。12. OnePulse點(diǎn)擊該鈕一次，就輸出一個(gè)測試脈沖。當(dāng)TestPuls凝擇off時(shí)，若僅僅需要一次測試脈沖，可選此功能。13. I-ScaleandV-Scale用于設(shè)定測試脈沖TestPulsed采樣軟件示波窗口中的顯示比例（左側(cè)框）和偏移（右側(cè)框）。數(shù)值1將使Y軸達(dá)到AD/DA轉(zhuǎn)換器的最大量程（由0.24V）,此時(shí)，如果輸入信號飽和了模數(shù)轉(zhuǎn)換器，便很容易發(fā)現(xiàn)。但是，如果要對信號進(jìn)行放大，則需要在采樣軟件Patchmaste的

54、Configuration窗口Misc.中選上ScaleTestPulse14. Sound編碼R-membrane勺聲音靈敏度（Hz/MQ）和音量（）在這里設(shè)定。點(diǎn)擊Sounds可執(zhí)行該功能。15. Wait用于設(shè)定在記錄宏命令時(shí)暫停的時(shí)間。 點(diǎn)擊該輸入框， 可將Record!為Stop,此時(shí)宏命令的記錄暫停， 直到經(jīng)過所設(shè)定的時(shí)間或點(diǎn)擊Stop,才可繼續(xù)記錄宏命令。七、功能檢測（一）施加測試脈沖1 .將模型細(xì)胞與探頭連接好：將模型細(xì)胞與探頭的BNC口連接,將探頭后端的接地口與模型細(xì)胞接地線口連接。2 .將模型細(xì)胞電路設(shè)置為10MQ位置，此時(shí)模擬電極入浴液（電極電阻10MD）。3.打開Pat

55、chmaster點(diǎn)擊放大器軟件面板的Rese（圖中所示），設(shè)置記錄模式為OnCell模式（圖中所示），將TestPulse的幅度（圖中所示）設(shè)為5mV,時(shí)間長度 （圖中所示） 設(shè)為5ms,此時(shí)在波形顯示窗口將出現(xiàn)電流方波。如果增益Gain大小合適（即為5mV/pA）（圖中所示），則窗口中將顯示一個(gè)幅度約為500pA的電流方波（根據(jù)歐姆定律，I=U/R=5mV/10MQ=500A）（圖中所示）。4 .PULSE或Patchmaster會自動計(jì)算出且隨時(shí)更新電極電阻的大小，并顯示在R-memb上（圖中所示，10MQ左右）。5 .可能存在的失調(diào)電位可通過點(diǎn)擊Vo右邊的Auto（圖中所示）來自動完成

56、（也可通過雙擊Vo,然后通過上下拖動鼠標(biāo)使電流方波的基線為0和使I-mon顯示為0）,止匕時(shí)，命令電壓V-membrane（圖中所示）應(yīng)該顯示為0mV,同時(shí)Vo（圖中所示）顯示出失調(diào)電位的大小。止匕外，電流方波的基線（圖中所示）、電壓監(jiān)視器V-mon（圖中（11）所示）和電流監(jiān)視器I-mon（圖中（12）所示）都應(yīng)該為0或接近0。6.在Patchmaste中，上述3-5步驟可通過點(diǎn)擊面板左上的黃色SETUP鈕自動實(shí)現(xiàn)，或通過點(diǎn)擊鍵盤數(shù)字1”自動實(shí)現(xiàn)，執(zhí)行下列內(nèi)設(shè)的宏命令:1.SET-UPEReset:;（重設(shè)放大器）EMode：1;（選擇OnCell記錄模式）EGain：10;（設(shè)定Gain為

57、5.0mV/pA）EPulseAmp：5.0mV;（設(shè)定測試脈沖幅度為5.0mV）EPulseDur：5.0ms;（設(shè)定測試脈沖時(shí)間寬度為5.0ms）EPulseOn：TRUE;（施加測試脈沖）且 PUIGB* *PulPul由FKFKPulseTreeMorksDisplayNoiebockEPCWHelpEAutoZero:;（補(bǔ)償失調(diào)電壓）注：PULSE軟件有一個(gè)內(nèi)置的宏命令注釋文件，一些預(yù)設(shè)的宏命令以純文本格式存儲在“Epc10.ma故件中， 可用任何文本編輯器編輯。 例如： 命令EGain：10，是將放大器增益Gain設(shè)定為Gain下拉選項(xiàng)中的第10個(gè)值（即5mV/pA）。至于如何對

58、這些宏命令注釋進(jìn)行編輯與修改，可參考PULSE軟件使用說明手冊。（二）高阻封接電壓鉗記錄1 .切換模型細(xì)胞到中間位置，此時(shí)顯示的電容為電極電容（約身EPCIEPCI。ArupArupIifiHiH-a|x|-a|x|Str-UPStr-UPIONCtLLONCtLLIWHULtCtLLWHULtCtLL5 5mV/pAmV/pAImonZImonZUTNinUTNinVdrviNVdrviNVrnurrtMdiiHVrnurrtMdiiHU UJ JU Um.Vm.VOnCellOnCellLJLJ| |o.omvUUUplUUUplU.5U.5 | |Lrubi-JKJ AutoZlAuto

59、Zl| |itancfcitancfcliftlift| |( (CupTrfldkCupTrfldkCSlow1Q0pF1Q0pF| |DftiayDftiayjOffjOff| |RScnosRScnosb.DMIOb.DMIO| | AutoTAutoTR&ConipR&ConipOffOff 3fi3fiLeakComLeakComP PIonIIonI(Aulo|jiatA|(Aulo|jiatA|RIIMRIIM1 1Otssrl1CtHzOtssrl1CtHzFiberZFiberZBEGS已1|1| |2.9kHz|2.9kHz|UgglUgglArAr件pIlLudJpIlL

60、udJ例皿nqlHnqlHI IISaundISaundj-ealkCSlj-ealkCSl) )C)(C)(SctlVJetLockSctlVJetLockj jR-iripiiiR-iripiiivlivliOMTStiiStii為6pF） ,該位置模擬電極與細(xì)胞膜形成高阻封接， 可模擬進(jìn)行C-fast補(bǔ)償功能。為從模型細(xì)胞的高電阻電路中能分辨出比較小的電流，將Gain（圖中所示）設(shè)為50mV/pA。2 .在圖形顯示窗口中將看到兩個(gè)快速的電容瞬變值（圖窗口中藍(lán)線顯示）。調(diào)節(jié)C-fast補(bǔ)償功能的數(shù)值幅度（圖中所示），此時(shí)電容瞬變值變小了；同樣對時(shí)間常數(shù)（音ast）（圖中所示）進(jìn)行調(diào)節(jié)，使瞬