細(xì)菌的培養(yǎng)與分離技術(shù)

1、細(xì)菌的培養(yǎng)與分離技術(shù)細(xì)菌的培養(yǎng)與分離技術(shù)培養(yǎng)基培養(yǎng)基常用玻璃器材的準(zhǔn)備常用玻璃器材的準(zhǔn)備培養(yǎng)基的成分和作用培養(yǎng)基的成分和作用培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備常用玻璃器材的準(zhǔn)備常用玻璃器材的準(zhǔn)備玻璃器材的種類及用途玻璃器材的種類及用途玻璃器材的清洗玻璃器材的清洗新購置的玻璃器材：新購置的玻璃器材：12鹽酸浸泡鹽酸浸泡清清水清洗水清洗用過的無污染器皿：洗滌劑洗刷用過的無污染器皿：洗滌劑洗刷清水清洗清水清洗細(xì)菌污染的器材：消毒滅菌后再洗刷細(xì)菌污染的器材：消毒滅菌后再洗刷盛培養(yǎng)基試管和平皿：高壓滅菌盛培養(yǎng)基試管和平皿：高壓滅菌趁熱倒出趁熱倒出洗滌劑洗刷洗滌劑洗刷清水沖洗清水沖洗吸管：吸

2、管：3來蘇浸泡來蘇浸泡清水沖洗清水沖洗玻片和蓋玻片：玻片和蓋玻片：3來蘇和清潔液浸泡來蘇和清潔液浸泡清水清水沖洗；染色后的玻片，應(yīng)肥皂水煮沸沖洗；染色后的玻片，應(yīng)肥皂水煮沸10min再洗再洗滌滌含油脂的器皿：單獨(dú)滅菌含油脂的器皿：單獨(dú)滅菌玻璃器皿滅菌前的準(zhǔn)備玻璃器皿滅菌前的準(zhǔn)備玻璃器皿在清洗、干燥后必須經(jīng)正確的玻璃器皿在清洗、干燥后必須經(jīng)正確的包裹和加塞后才能進(jìn)行滅菌處理。包裹和加塞后才能進(jìn)行滅菌處理。培養(yǎng)基的成分和作用培養(yǎng)基的成分和作用培養(yǎng)基：是指人工配制的適合細(xì)菌生長繁殖的培養(yǎng)基：是指人工配制的適合細(xì)菌生長繁殖的綜合營養(yǎng)基質(zhì)。綜合營養(yǎng)基質(zhì)。營養(yǎng)物質(zhì)：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇類、營養(yǎng)物質(zhì)

3、：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇類、血液、雞蛋和動(dòng)物血清、生長因子、無機(jī)鹽類血液、雞蛋和動(dòng)物血清、生長因子、無機(jī)鹽類水水凝固劑：瓊脂、明膠凝固劑：瓊脂、明膠抑制劑抑制劑指示劑指示劑培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類（按用途分類按用途分類）基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基：培養(yǎng)營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌，如普通：培養(yǎng)營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌，如普通平板平板營養(yǎng)培養(yǎng)基營養(yǎng)培養(yǎng)基：能滿足營養(yǎng)需求較高細(xì)菌的生長，：能滿足營養(yǎng)需求較高細(xì)菌的生長，如血平板如血平板鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：含有某些特定的底物，用于鑒別細(xì)：含有某些特定的底物，用于鑒別細(xì)菌，如克氏雙糖培養(yǎng)基（菌，如克氏雙糖培養(yǎng)基（KIA）選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：具有選擇性抑制作用，用于

4、選擇性：具有選擇性抑制作用，用于選擇性的培養(yǎng)目的菌，如的培養(yǎng)目的菌，如SS平板平板增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基：促進(jìn)目的菌的生長，適用于含菌量：促進(jìn)目的菌的生長，適用于含菌量較少的標(biāo)本，如葡萄糖肉湯。較少的標(biāo)本，如葡萄糖肉湯。厭氧培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)厭氧菌：用于培養(yǎng)厭氧菌培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類（按物理性狀分類按物理性狀分類）液體培養(yǎng)基：不含凝固劑，用于增菌和液體培養(yǎng)基：不含凝固劑，用于增菌和接種純種細(xì)菌。接種純種細(xì)菌。半固體培養(yǎng)基：含半固體培養(yǎng)基：含0.30.5瓊脂，用瓊脂，用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力。于觀察細(xì)菌的動(dòng)力。固體培養(yǎng)基：含固體培養(yǎng)基：含22.5瓊脂，多用于瓊脂，多用于細(xì)菌的分離培養(yǎng)。細(xì)菌的

5、分離培養(yǎng)。培養(yǎng)基制備的一般程序培養(yǎng)基制備的一般程序調(diào)配調(diào)配溶化溶化矯正矯正pH過濾澄清過濾澄清分裝分裝滅菌滅菌檢定檢定培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基滅菌 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：121高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌15分鐘分鐘 含糖培養(yǎng)基：含糖培養(yǎng)基：113 滅菌滅菌15分鐘分鐘 雞蛋、血清培養(yǎng)基：間歇滅菌雞蛋、血清培養(yǎng)基：間歇滅菌3天天3次次 不耐高溫的液體成分：濾過除菌不耐高溫的液體成分：濾過除菌保存培養(yǎng)基培養(yǎng)基pH測定及矯正測定及矯正 材料：材料：待測培養(yǎng)基、待測培養(yǎng)基、pH7.4標(biāo)準(zhǔn)比色管、標(biāo)準(zhǔn)比色管、4孔比色架、孔比色架、0.02酚紅、酚紅、氫氧化鈉氫氧化鈉0.1mol/L、1mol/L） 鹽酸（鹽酸（

6、0.1mol/L、1mol/L）蒸餾水蒸餾水試管（與比色管口徑一致）、試管（與比色管口徑一致）、刻度吸管（刻度吸管（5ml、1ml、0.5ml、0.25ml）、）、pH矯正矯正水水培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基比色管比色管 酚紅酚紅指示劑指示劑目目 視視 培養(yǎng)基蒸餾水pH矯正矯正過酸相同過堿標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管 培養(yǎng)基蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管 培養(yǎng)基蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管計(jì)計(jì) 算算假設(shè)假設(shè)2ml培養(yǎng)基矯正培養(yǎng)基矯正pH至至7.4時(shí)需時(shí)需0.1mol/L NaOH 0.12ml，現(xiàn)有培養(yǎng)基，現(xiàn)有培養(yǎng)基1000ml，求需加，求需加NaOH的量。的量。2：10000.12：X設(shè)需加需加NaOH的量為的量為Xml

7、。X=0.1210002 60ml 0.1mol/L NaOH 60106ml 1mol/L NaOH細(xì)菌的接種與培養(yǎng)細(xì)菌的接種與培養(yǎng)無菌技術(shù)無菌技術(shù)細(xì)菌檢驗(yàn)的操作需在無菌室或超凈工作細(xì)菌檢驗(yàn)的操作需在無菌室或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。無菌室、超凈工作臺(tái)使用前后需進(jìn)行消無菌室、超凈工作臺(tái)使用前后需進(jìn)行消毒。毒。細(xì)菌檢驗(yàn)使用的物品使用前后需嚴(yán)格滅細(xì)菌檢驗(yàn)使用的物品使用前后需嚴(yán)格滅菌菌標(biāo)本的采集標(biāo)本的采集無菌試管、燒瓶的使用無菌試管、燒瓶的使用細(xì)菌接種的基本程序細(xì)菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本沾取標(biāo)本接種接種滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌

8、，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境細(xì)菌接種法細(xì)菌接種法平板劃線接種法平板劃線接種法： 目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長，目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長，形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌。形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌。 方法：方法：分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法穿刺接種法穿刺接種法 :用于觀察細(xì)菌動(dòng)力用于觀察細(xì)菌動(dòng)力斜面接種法斜面接種法 傾注培養(yǎng)法傾注培養(yǎng)法:用于細(xì)菌計(jì)數(shù)用于細(xì)菌計(jì)數(shù)分區(qū)劃線法分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線第一區(qū)

9、劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法細(xì)菌培養(yǎng)法細(xì)菌培養(yǎng)法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：培養(yǎng)溫度：培養(yǎng)溫度：35（采用恒溫培養(yǎng)箱）（采用恒溫培養(yǎng)箱）培養(yǎng)時(shí)間：培養(yǎng)時(shí)間：1824h二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等細(xì)菌在細(xì)菌在固體固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象菌落菌落定義：指單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形定義：指

10、單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。成單一肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性明度、濕潤度、黏度、溶血性菌落類型：光滑型（菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（）、粗糙型（R）、黏液型）、黏液型（M）菌苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。菌苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。細(xì)菌在細(xì)菌在液體液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象混濁混濁沉淀：多見于鏈狀排列的細(xì)菌沉淀：多見于鏈狀排列的細(xì)菌菌膜：多見于厭氧菌菌膜：多見于厭氧菌細(xì)菌在細(xì)菌在半固體半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長，穿