香樟樹(shù)葉提取物的抗氧化性能研究

1、香樟樹(shù)葉提取物的抗氧化性能研究*周紅麗 張學(xué)梅（紅河學(xué)院理學(xué)院2003級(jí)化學(xué)教育A 班 蒙自661100）摘要：本文以香樟樹(shù)葉為原料，采用不同的化學(xué)方法提取它的主要成分，并進(jìn)行抗氧化性研究。研究的結(jié)果表明，用無(wú)水乙醇作提取劑提取的香樟樹(shù)葉主要成分具有清除OH 的能力, 且與同樣條件下同濃度的抗壞血酸的清除OH 能力相差不大，即用無(wú)水乙醇作提取劑提取的主要成分具有很好的抗氧化性能。而用70%的乙醇和水作提取劑提取的香樟樹(shù)葉主要成分沒(méi)有清除OH 的能力，反而還具有一定的氧化性。這說(shuō)明，用不同的提取劑提取的香樟樹(shù)葉的主要成分是不同的，從而導(dǎo)致其抗氧化性能也不同。關(guān)鍵詞：香樟樹(shù)葉、羥自由基、抗氧化、分

2、光光度法樟樹(shù)（Cinnamomum camphora）是一種常綠1.1儀器 喬木，生長(zhǎng)在亞洲、大洋洲的暖溫帶和亞熱帶地 索氏提取器、電子天平（上海精科天平）、1區(qū)。別名香樟、油樟、樟木，屬于藥用植物。7200型分光光度計(jì)（上海龍尼科儀器有限公司）本草拾遺記載：味辛、溫、無(wú)毒；廣西中等。2藥志記載：味辛、性溫、有小毒。樟樹(shù)從根1.2材料 到葉均含有樟油和樟腦，種子可榨油，是制肥皂 香樟樹(shù)葉，采自紅河學(xué)院校園。鄰二氮菲、的良好原料。樟樹(shù)的葉、枝、根、莖、花、果都磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、硫酸亞鐵、30%過(guò)氧13富含芳香油，是提煉天然香料的優(yōu)良樹(shù)種。 化氫溶液、抗壞血酸等均為國(guó)產(chǎn)分析純。據(jù)報(bào)道，樟樹(shù)葉

3、的水蒸氣蒸餾提取物的主要2實(shí)驗(yàn)方法 化學(xué)成分有十二烷酸、肉豆蔻酸、十一烷酸、棕2.1試劑的配制 櫚酸、酮、酯、醛、按葉油素、芳樟醇、樟腦、1.000g/L鄰二氮菲溶液的配制：稱取45-松油醇、異橙花叔醇等。但對(duì)樟葉的抗氧0.1000g 鄰二氮菲于小燒杯中，加水并加熱溶解8化性能研究還處于一個(gè)空白。 （或加乙醇溶解），然后加水定容至100mL 。生理情況下，人體有1%5%的分子氧通過(guò)0.0250mol/L KH2PO 4-Na 2HPO 4緩沖溶液的配多種途徑產(chǎn)生氧自由基，生物體內(nèi)產(chǎn)生的自由基制：稱取0.8505g 磷酸二氫鉀和0.8872g 磷酸氫主要是O 2與OH 及其活性衍生物。過(guò)多的氧自

4、由二鈉溶于水，并加水定容至250mL 。 基通過(guò)損傷生物大分子，破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功1.000g/LFeSO4溶液的配制：稱取0.1000g 能，促使疾病的發(fā)生與發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，氧自由硫酸亞鐵溶于水，并加水定容至100mL ，然后加基與衰老、腫瘤、炎癥、動(dòng)脈硬化、肝和肺疾病入幾根鐵釘。 等發(fā)生密切相關(guān)?？寡趸瘎┯捎谀芮宄梭w的這2%過(guò)氧化氫溶液的配制：用量筒量取些自由基而具有預(yù)防癌癥、心血管疾病等疾病以6.7mL30g/L的H 2O 2用水稀釋至100mL 。 及抗衰老的作用。而合成的抗氧化劑如BHA 等可0.0030g/mL抗壞血酸溶液的配制：稱取導(dǎo)致DNA 的損傷及動(dòng)物惡性腫瘤的發(fā)生，其安全

5、0.3000g 抗壞血酸溶解于水中，并加水定容至性受到質(zhì)疑，因此高效、安全的天然抗氧化劑的100mL 。67提取及其應(yīng)用無(wú)疑具有重要的意義。 2.2香樟樹(shù)葉提取液的制備我國(guó)南方樟樹(shù)資源豐富，以此為原料研制生用不同的提取劑（無(wú)水乙醇、70%乙醇、蒸產(chǎn)的成本較低，可創(chuàng)造經(jīng)濟(jì)及社會(huì)效益。本文利餾水）來(lái)加熱回流提取和常溫浸泡提取香樟樹(shù)葉用鄰二氮菲分光光度法對(duì)香樟樹(shù)葉的不同溶劑中的抗氧化成分。 提取物進(jìn)行抗氧化性能研究并與抗壞血酸的抗2.2.1用無(wú)水乙醇作提取劑加熱回流提取 氧化性能作對(duì)比，為香樟樹(shù)的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用奠把采集來(lái)的香樟樹(shù)葉用清水洗后，再用蒸餾定基礎(chǔ)。 水洗凈，然后晾干，把它剪為1cm 左右的

6、碎片，* 基金項(xiàng)目：紅河學(xué)院孵化基金稱取10.0g 放入索氏提取器的濾紙中，在圓底燒作者簡(jiǎn)介：周紅麗 紅河學(xué)院化學(xué)教育專(zhuān)業(yè)03級(jí)畢業(yè)生瓶中加入110.0mL 無(wú)水乙醇，在電爐上隔著石棉指導(dǎo)教師：郭亞力 教授網(wǎng)加熱回流提取100min ，倒出提取液，再加入同樣的溶劑，進(jìn)行第二次提取。兩次的提取液合3并為A 液，備用。2.2.2 用70%乙醇作提取劑加熱回流提取方法與用無(wú)水乙醇作提取劑加熱回流提取的方法相同，只是把提取劑無(wú)水乙醇改為70%的乙醇即可。所得提取液為B 液。2.2.3用蒸餾水作提取劑加熱回流提取方法與用無(wú)水乙醇作提取劑加熱回流提取的方法相同，只是把提取劑無(wú)水乙醇改為蒸餾水即可。所得提取

7、液為C 液。2.2.4用70%乙醇作提取劑常溫浸泡提取把采集來(lái)的香樟樹(shù)葉用清水洗后，再用蒸餾水洗凈，然后晾干，把它剪為1cm 左右的碎片，稱取10.0g 放入圓底燒瓶中，加入110.0mL70%乙醇浸泡4天，過(guò)濾后得濾液D ，備用。 2.2.5用蒸餾水作提取劑常溫浸泡提取方法與用70%乙醇作提取劑常溫浸泡提取的方法相同，只是把浸取劑70%乙醇改為蒸餾水即可。所得提取液為E 液。2.3鄰二氮菲分光光度法測(cè)定抗氧化劑的抗羥基自由基性能2+2+采用鄰二氮菲Fe 氧化法測(cè)定H 2O 2/Fe產(chǎn)2+生的OH ，H 2O 2/Fe體系通過(guò)Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥2+自由基，鄰二氮菲Fe 水溶液可被羥自由基

8、氧3+2+化為鄰二氮菲Fe ，從而使鄰二氮菲Fe 呈現(xiàn)的紅色變淺，在510nm 處的最大吸收峰消失，當(dāng)體系中存在OH 清除劑時(shí)，可以使A 510降低，以69A 510變化反映抗氧化劑抗羥基自由基性能。并定義抗氧化劑對(duì)OH 清除率為：10K=1-(Ai -A j /AC ×100%式中：A i 加入2.00mL 1.000g/L鄰二氮菲溶液、3.00mL 0.0250mol/L KH2PO 4-Na 2HPO 4緩沖溶液、不同劑量的抗氧化劑溶液、2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液和3.00mL 2%過(guò)氧化氫溶液反應(yīng)10min 后的吸光度。A j 只加入不同劑量的抗氧化劑溶液和

9、相應(yīng)的提取劑的吸光度。A C 未加入抗氧化劑，只加入 2.00mL 1.000g/L鄰二氮菲溶液、3.00mL 0.0250mol/L KH 2PO 4-Na 2HPO 4緩沖溶液、2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液和3.00mL 2%過(guò)氧化氫溶液反應(yīng)10min 后的吸光度。2.3.1 對(duì)照樣品抗壞血酸抗羥基自由基性能測(cè)定依次加入2.00mL 1.000g/L鄰二氮菲溶液，3.00mL 0.0250mol/L KH2PO 4-Na 2HPO 4緩沖溶液，分別加入1.00mL 、2.00mL 、3.00mL 、4.00mL 、5.00mL 、6.00mL 、7.00mL 、8.00mL

10、 0.0030g/mL抗壞血酸溶液，然后加入2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液，立即混勻，最后加3.00mL 2%過(guò)氧化氫溶液，分別加蒸餾水和70%乙醇定容為50 mL ，10min 后于510nm 處測(cè)定其吸光度A i 。再根據(jù)公式分別測(cè)定吸光度A j 和A C 。2.3.2 A液的抗羥基自由基性能測(cè)定用95%的乙醇作稀釋劑，把A 液配制成0.0030g/mL的溶液。實(shí)驗(yàn)方法步驟同2.3.1，定容劑用95%的乙醇。2.3.3 B液的抗羥基自由基性能測(cè)定用70%的乙醇作稀釋劑，把B 液配制成0.0010g/mL的溶液。實(shí)驗(yàn)方法步驟同2.3.1，定容劑用70%的乙醇。2.3.4 C液的

11、抗羥基自由基性能測(cè)定用蒸餾水作稀釋劑，把提取液C 液配制成0.0010g/mL的溶液。實(shí)驗(yàn)方法步驟同2.3.1，定容劑用蒸餾水。2.3.5 D液的抗羥基自由基性能測(cè)定用70%的乙醇作稀釋劑，把D 液配制成0.0010g/mL的溶液。實(shí)驗(yàn)方法步驟同2.3.1，定容劑用70%的乙醇。2.3.6 E液的抗羥基自由基性能測(cè)定用蒸餾水作稀釋劑，把提取液E 液配制成0.0010g/mL的溶液。實(shí)驗(yàn)方法步驟同2.3.1，定容劑用蒸餾水。 3結(jié)果與討論 3.1結(jié)果把以上抗氧化劑抗羥基自由基性能的測(cè)定所得的數(shù)據(jù)和根據(jù)公式計(jì)算出抗氧化劑對(duì)OH 清除率的結(jié)果列表如下：3.1.1對(duì)照樣品抗壞血酸抗羥基自由基性能（加水

12、定容）測(cè)定結(jié)果如表1表1 對(duì)照樣品抗壞血酸抗羥基自由基性能（加水定容）Table 1 check sample antiscorbutic acid anti- hydroxyl free radical performance(wateing constant volume3.1.2對(duì)照樣品抗壞血酸抗羥基自由基性能（加70%乙醇定容）測(cè)定結(jié)果如表2表2 對(duì)照樣品抗壞血酸抗羥基自由基性能（加70%乙醇定容）3.1.3提取液A 液抗羥基自由基性能測(cè)定結(jié)果如表3表3 A液抗羥基自由基性能（略） 3.1.4提取液B 液抗羥基自由基性能測(cè)定結(jié)果如表4表4 B液抗羥基自由基性能（略） 3.1.5提取液C

13、 液抗羥基自由基性能測(cè)定結(jié)果如表5表5 C液抗羥基自由基性能（略） 3.1.6提取液D 液抗羥基自由基性能測(cè)定結(jié)果如表6表6 D液抗羥基自由基性能（略） 3.1.7提取液E 液抗羥基自由基性能測(cè)定結(jié)果如表7表7 E液抗羥基自由基性能（略） 把前三個(gè)表中的結(jié)果繪制在下面的圖1中為： 清除率%劑量 mL圖1 (Chart 1 把后四個(gè)表中的結(jié)果繪制在下面的圖2中為：清除率%劑量 mL圖2 (Chart 23.2討論從圖1中可以看出，三條抗氧化曲線都呈上升的趨勢(shì)，即它們都有抗氧化性能；對(duì)照樣品抗壞血酸隨著定容劑的不同，其抗羥基自由基的性能也不同，用70%乙醇比用蒸餾水作定容劑的抗氧化性能強(qiáng)；用無(wú)水乙

14、醇作提取劑提取的物質(zhì)具有清除OH 的能力, 清除率最高可達(dá)91%左右，且與同樣條件下同濃度的抗壞血酸的清除OH 能力相差不大。從圖2中可以看出，四條抗氧化曲線都呈下降趨勢(shì)，與對(duì)照樣品抗壞血酸的抗氧化性曲線剛好相反，即它們都不具有抗氧化性，反而還具有一定的氧化性；再?gòu)腂 與D ，C 與E 的抗氧化曲線對(duì)比可以看出，即使它們的提取溫度不同，但它們的氧化性能相差不大。綜上所述，采用不同的提取劑提取的物質(zhì)的抗氧化性能不同，用無(wú)水乙醇作提取劑提取的物質(zhì)具有清除OH 的能力, 清除率最高可達(dá)91%左右，且與同樣條件下同濃度的抗壞血酸的清除OH 能力相差不大。而用70%的乙醇和水作提取劑提取的物質(zhì)沒(méi)有清除O

15、H 的能力，反而還具有一定的氧化性。且香樟樹(shù)葉抗氧化成分的提取受溫度的影響不大。已經(jīng)有人研究過(guò)樟樹(shù)葉的乙醇提取物因具11有抗菌作用而成為很好的天然食品防腐劑。本文研究的樟樹(shù)葉的無(wú)水乙醇提取物具有很好的抗氧化性能，因此可進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)應(yīng)用于食品的生產(chǎn)、食品原料的保藏、抗衰老化妝品的生產(chǎn)和藥業(yè)的生產(chǎn)等等。在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，要注意不要使硫酸亞鐵失2+效，因?yàn)榱蛩醽嗚F溶液中的Fe 很容易被氧化成3+Fe ，從而最好是現(xiàn)配現(xiàn)用。配制好的過(guò)氧化氫溶液要保存在棕色試劑瓶中，以防見(jiàn)光分解。在配制香樟樹(shù)葉的提取液時(shí)，首先用量筒量取10.0mL 原提取液于小燒杯中，然后把它放在電爐上蒸干，再冷卻后稱其重減去小燒杯的質(zhì)量

16、除以10就得到1mL 原提取液中含有多少克提取物質(zhì)，再把它配制成所需濃度的溶液即可。在用鄰二氮菲分光光度法測(cè)定香樟樹(shù)葉提取液的抗氧化性能時(shí)，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)和資料知，鄰二2+氮菲Fe 在510nm 處有最大吸收峰值，且顯色2+2+最關(guān)鍵的地方是Fe 的量必須過(guò)量，因?yàn)镕e 在反應(yīng)中，即充當(dāng)催化劑，又充當(dāng)配位劑和還原劑。加入PH 為7.4的磷酸鹽緩沖溶液是為了保證加入抗氧化劑后體系PH 值基本不變，因?yàn)樵诖薖H2+值下，F(xiàn)e 與鄰二氮菲能形成穩(wěn)定的紅色配合物。2+實(shí)驗(yàn)中選擇反應(yīng)時(shí)間為10min ，是因?yàn)镕e 與鄰二氮菲反應(yīng)很快，即使測(cè)定的吸光度還在變化，但我們測(cè)定的時(shí)間相差不大，所以所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是可靠的

17、。在測(cè)定A 液的抗氧化性能時(shí)，因?yàn)橛盟ㄈ?，溶解于乙醇而不溶于水的物質(zhì)會(huì)沉淀出來(lái)，從而影響測(cè)定結(jié)果，所以用95%的乙醇定容。以后的都用相應(yīng)的提取劑作定容劑。在測(cè)定0.0030g/mL B液的抗氧化性能時(shí)，因所測(cè)吸光度大于1，知所配制的提取液濃度過(guò)高。所以把B 液配制成0.0010g/mL的溶液，在測(cè)定。以后的提取液都配制成濃度為0.0010 g/mL的溶液。至于表中出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)誤差，是由于人為因素和儀器存在的誤差造成的，但我們已把誤差降到了最小。當(dāng)然，由于時(shí)間有限，我們只是研究了用乙醇作提取劑提取它的主要成分并進(jìn)行抗羥基自由基性能測(cè)定，而用其他的提取劑提取并測(cè)定它對(duì)其他自由基如氧自由基、芳香

18、基自由基等的清除作用還待進(jìn)一步研究。感謝：在此次實(shí)驗(yàn)和撰寫(xiě)論文的過(guò)程中，我要衷心地感謝系上為我們提供的良好的實(shí)驗(yàn)條件以及系領(lǐng)導(dǎo)和各位老師的幫助，尤其是我們的指導(dǎo)教師郭亞力老師的悉心指導(dǎo)和幫助，同時(shí)還要感謝我的實(shí)驗(yàn)伙伴張學(xué)梅同學(xué)。參考文獻(xiàn)1Zhang SQ(張受謙. Chemical Engineering Handbook(IM. Ji nan:Shandong Science&Technology Press,1987.2江蘇醫(yī)學(xué)院. 中藥大辭典M.上海人民出版社，1979. 3劉詠，張宗賢. 香樟葉出油最佳提取條件的實(shí)驗(yàn)研究J.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2005，17（2）：203-20

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21、00Abstract : This article take the Cinnamomum camphora leaf as a raw material, uses the different chemistry method to withdraw its principal constituent, and conducts the anti- oxidized research. The research result indicated that, does with the absolute ethyl alcohol withdraws the Cinnamomum camphora leaf principal constituent which the medicinal preparation withdraws to have elimination OH the ability,Also is not big with the similar condition similarly hereinafter density antiscorbutic acid elimination OH ability di