益母草總黃酮的提取及其對羥自由基的清除作用

1、益母草總黃酮的提取及其對羥自由基的清除作用 08-11-28 10:15:00 作者：羅建華，黃鎖義 編輯：studa20【摘要】 目的 為充分利用益母草植物資源，避免浪費(fèi)，探討益母草總黃酮的提取、鑒別及對羥(OH)自由基的清除作用。方法 采用超聲波乙醇浸提法從益母草中提取黃酮類物質(zhì)，對所提取的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并用分光光度法測定含量，用益母草總黃酮對羥自由基清除作用進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果 測得樣品中總黃酮的含量X=0.4099mg/ml，回收率為101.6%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論 該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取益母草黃酮類物質(zhì)的有效途徑。益母草總黃酮提取液對Fenton體系產(chǎn)生的OH

2、自由基有很好的清除作用。 【關(guān)鍵詞】 超聲波提?。灰婺覆?；植物提取物；黃酮類；鑒別；羥自由基；清除Abstract: Objective In order to make full use of the resources of Leonurus and avoid wasting，identifying the process of extracting total flavone from Leonurus and its differentiating and the effect on scavenging of hydroxyl radicals. Methods The flavo

3、nes were extracted by using ethanol as the solvent from Leonurus with ultrasonic wave and extraction method.A spectrophotometry was used to extract and check the flavones of Leonurus.The effect of Leonurus on scavenging of hydroxyl radicals was studied. Results The density of the total flavone of Le

4、onurus was X=0.4099mg/ml and the rate of recovery was 101.6%，which had a highly purity and yield rate. Conclusion This test provides the extraction and purifying methods to obtain high quantity and purity of extracts from Leonurus.This method is a purely physical process and has not any pollution.It

5、 is an ideal way to extract the flavones of Leonurus.Total flavone from leonurus has effects on scavenging of hydroxyl radicals. Key words: ultrasonic extraction；Leonurus L.；plant extracts；flavones；differentiation；hydroxyl radical；scavenging益母草為唇形科植物益母草(Leonurus Japonicus Houtt)的新鮮或干燥地上部分，原名茺蔚。全草含生物

6、堿、黃酮、酚類、氨基酸、有機(jī)酸、糖類；具有調(diào)經(jīng)止血，保護(hù)心肌缺血再灌注損傷，抗血小板聚集，降低血液粘度等作用。在臨床上可用來治療痛經(jīng)、流產(chǎn)后出血、冠心病、心肌缺血、高粘血癥、腎炎水腫、風(fēng)濕關(guān)節(jié)疼痛等疾病，具有廣泛的藥理活性1。我們曾采用乙醇提取法對益母草總黃酮進(jìn)行提取2，但該方法提取的效率仍然較低。近年來，隨著超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動(dòng)物組織漿的毒質(zhì)等的研究3，4，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點(diǎn)。也可利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時(shí)間，并且還可避

7、免高溫對提取成分的影響4。為此，現(xiàn)將我們采用超聲波乙醇浸提法提取益母草總黃酮、鑒別及提取物總黃酮對羥(OH)自由基的清除作用的結(jié)果報(bào)告如下。1 儀器與試劑1.1 儀器 KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（超聲工作頻率40kHz)昆山市超聲儀器有限公司）；UV-755B紫外可見分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。1.2 試劑 95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；乙酸乙酯AR；乙酸鎂AR；甲醇AR；鎂粉AR；正丁醇AR；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品

8、（中國藥品生物制品檢定所）；雙氧水AR；硫酸亞鐵AR；水楊酸AR；新鮮益母草（采自廣西百色市）。2 方法與結(jié)果2.1 總黃酮成分提取 取新鮮益母草，烘干，粉碎。稱取益母草粉末約6g，加80ml 95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾。濾渣再加80ml 95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩25ml左右為止，放置250ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。2.2 測定方法依據(jù) 以蘆丁為對照品測定益母草中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2.3 定量實(shí)驗(yàn)總黃酮的含量測定2.3

9、.1 波長的選擇 取樣品液適量，在0.30ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420700nm波長范圍測定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510nm波長處有最大吸收，故測定時(shí)選用此波長。2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取蘆丁對照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白，于510nm處測吸光度。吸光度測定結(jié)果見表1。表1 紫外可見分光光度計(jì)測定吸光度（略）根據(jù)上表得回歸方程：=-0.0311+13.5184X，r=0.99992.3.3 提取物含量的測定 精密吸取樣品液0.50ml，置10ml容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線