關(guān)于尾靜脈注射阿霉素復(fù)制腎病大鼠模型的研究報告

1、.本科畢業(yè)生論文論文題目：關(guān)于尾靜脈注射阿霉素復(fù)制腎病大鼠模型的研究2012年5月10日. v.目 錄摘要1Abstract21.緒論311材料與方法61.1.1 實驗材料與試劑61.1.2 主要實驗儀器71.1.3實驗方法71.1.4 大鼠尿蛋白的收集71.1.4.1測定大鼠24h尿蛋白總量81.1.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法81.1.5 大鼠凝血時間的檢測81.1.5.1血漿凝血酶原時間（PT）測定81.1.5.2凝血酶時間測定（TT）81.1.5.3活化部分凝血活酶時間測定(APTT)91.1.5.4復(fù)鈣時間（RT）的測定91.1.6 大鼠的體重測定91.1.7統(tǒng)計學(xué)處理92 結(jié)果與結(jié)論92.

2、 1 一般情況92. 2 各組大鼠尿蛋白的定量分析92. 3 各組大鼠凝血時間指標(biāo)的檢測102.3.1 凝血酶原時間（prothrombintime ，PT）102.3.2 凝血酶時間（thrombin time，TT）：112.3.3 活化部分凝血活酶時間（activated partialthromboplastin time ，APTT）122.3.4 復(fù)鈣時間（recalcification time ，RT）132. 4各組大鼠的體重變化133 討論14致謝15參考文獻(xiàn)16. v.阿霉素腎病大鼠凝血系統(tǒng)的變化摘要目的：（1）、了解阿霉素腎病大鼠模型的建立近況。（2）、觀察阿霉素腎病大

3、鼠凝血系統(tǒng)的變化情況。方法：采用間隔1周兩次尾靜脈注射阿霉素的方法復(fù)制大鼠阿霉素腎病模型,觀察各組大鼠凝血時間、24h尿蛋白量等指標(biāo)。結(jié)果：模型組表現(xiàn)為嚴(yán)重水腫、大量蛋白尿、外源性凝血系統(tǒng)功能和內(nèi)源性凝血功能亢進，且模型組大鼠有一定的程度的腹瀉，體重增加緩慢。結(jié)論:間隔1周兩次尾靜脈內(nèi)注射阿霉素4 mg/ kg 、3.5mg/kg法所造模型,腹瀉程度減輕, 模型動物死亡率下降, 造模成功率顯著提高，且模型組大鼠的凝血系統(tǒng)有比較明顯的變化，外源性凝血系統(tǒng)和內(nèi)源性凝血系統(tǒng)都比較亢進。關(guān)鍵詞：阿霉素、大鼠、腎病、凝血Adriamycin nephrosis rat coagulation syste

4、m changesAbstract Objective:1、Realiaze therecent developments of adriamycin nephrosis rat modelsbuild .2、Observe the adriamycin nephrosisrat blood coagulation system changes.Methods:The two times interval two weeks the intravenous doxorubicin method copy rats doxorubicin kidney disease model, Observ

5、e the rats blood coagulation time，24 h urine protein quantity index ect.Results: Model group performance for severe swelling, Large proteinuria, exogenous blood coagulation system function and endogenous blood clotting hyperthyroidism,And model rats have certain degree of diarrhea, Weight increased

6、slowly.Conclusion: Interval one weeks the two intravenous doxorubicin 4 mg/kg, 3.5 mg/kg method made model, Diarrhea extent lighter，The animal model Mortality has declined，Significantly improvethesuccessrateofmodeling，And the model of rats blood coagulation system has the obvious change，The extrinsi

7、c coagulationsystem and theendogenouscoagulation systemarerelativelyhyperthyroidism.Keywords：Adriamycin;Nephropathy; rates;Coagulation;1緒論腎病綜合征（nephrotic syndrome ，NS）簡稱腎綜，是以大量蛋白尿目前我國的定義為3.5g/d，國外大部分定義為3.5/(1.73m224h)、低蛋白血癥（血漿蛋白30g/L）,水腫、高脂血癥以及其他代謝紊亂為特征的一組臨床癥候群，其中以大量蛋白尿和低蛋白血癥為主要特征1。早在1932年Christain應(yīng)

8、用腎病綜合征這一名詞，來概括因各種腎病病理損害所致的嚴(yán)重蛋白尿的一組臨床綜合征，其中大量蛋白尿是其最基本的特征。大量蛋白尿是腎小球疾病的常見表現(xiàn)，在腎血管或腎小球間質(zhì)疾病中少出現(xiàn)大量的蛋白尿。盡管腎綜的病因各不相同從尿液中丟失大量的蛋白是導(dǎo)致腎病綜合征系列變化的決定性因素，因此臨床診斷的標(biāo)準(zhǔn)以大量的蛋白尿和嚴(yán)重的低蛋白血癥為主要條件。但是臨床診斷腎綜時需要注意的是，在嚴(yán)重的低蛋白血癥時，尿蛋白排泄量常減少而達(dá)不到上述指標(biāo)。微小病變型腎病綜合征（Minimal Change Nephropathy ,MCN）是原發(fā)性腎病綜合征（Nephrotic Syndrome ,NS）最常見的病理類型之一。

9、MCN 病因不甚明確,原因不清楚的致病因素導(dǎo)致腎小球多陰離子的丟失,靜電屏障作用減退,大量分子較小、帶陰電荷的白蛋白從尿中丟失形成高選擇性蛋白尿。光鏡下缺乏特異的和確定的病理學(xué)異常,電鏡下見腎小球上皮細(xì)胞足突融合。臨床表現(xiàn)有四大特點:大量蛋白尿、低白蛋白血癥、高脂血癥和明顯水腫,后三者為繼發(fā)的病理生理改變。MCN 占兒童NS 的80%90% ,成人NS 的20%30% ,因此,MCN 動物模型的建立無疑為探索原發(fā)性腎病的發(fā)病機理及藥物防治的研究提供了良好的實驗基礎(chǔ),在兒童腎病的研究中尤為重要。臨床絕大多數(shù)患者對激素治療反應(yīng)敏感，預(yù)后良好，但少數(shù)患者對激素治療依賴或抵抗，最終可能進展為腎小球硬化

10、近年來, 國內(nèi)外在腎小球硬化動物模型研究方面已取得了許多進展，阿霉素腎病模型是公認(rèn)的能較好地模擬腎小球疾病模型之一。阿霉素腎病模型的發(fā)病機制、分類及制作方法等方面簡述阿霉素腎病模型的研究進展情況, 以利于了解此模型的特點, 在工作中能更好的應(yīng)用之。一、阿霉素誘導(dǎo)腎病模型的藥理機制阿霉素（adriamyicin，ADR）, 是臨床上常用一種的蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素。其腎毒性的發(fā)病機制包括兩個方面：首先, 阿霉素是一種細(xì)胞周期非特異的廣譜化學(xué)治療癌癥藥物, 具有強烈的細(xì)胞毒作用, 可直接損害腎、氧反應(yīng)產(chǎn)生活性氧, 誘發(fā)腎小球上皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng), 破壞濾過膜結(jié)構(gòu)和功能, 產(chǎn)生蛋白尿。二、阿霉素腎病模

11、型的分類根據(jù)其造模方法、時間和臨床表現(xiàn)的不同, 可分為急性腎病模型和慢性腎病模型。急性腎病模型類似于人類微小病變型腎?。╩inimal change nephropathy ，MCN）,而慢性腎病模型類似于人類慢性腎小球腎炎和局灶節(jié)段性腎小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis ：FSGS).兩種不同病理模型常有其固定的建立方法, 急性模型常選用一次或兩次的尾靜脈注射造模方式, 而慢性模型常選用單側(cè)腎切除加重復(fù)尾靜脈注射阿霉素的方法。根據(jù)文獻(xiàn)報道, 單純靜脈注射阿霉素或單側(cè)腎摘除加重復(fù)尾靜脈注射阿霉素均可誘發(fā)大鼠產(chǎn)生類似于人類腎小球疾病的微小病變腎病和局灶

12、節(jié)段性腎小球硬化, 但其發(fā)病早期（3-6周）屬急性模型, 后期（716周）屬慢性模型。如趙洪雯4等給大鼠單側(cè)腎切除加重復(fù)尾靜脈注射阿霉素后, 觀察其超徽結(jié)構(gòu)結(jié)果顯示在注射阿霉素早期, 腎小球上皮細(xì)胞足突廣泛融合, 隨著實驗時間的進展, 腎小球上皮細(xì)胞足突融合, 在第8周時有少部分自行修復(fù), 但仍有大部分足突融合, 在第16周實驗結(jié)束時, 腎小球系膜區(qū)增寬, 細(xì)胞外基質(zhì)中度增生, 腎小球基底膜中度或重度不均勻增厚, 呈慢性化改變, 形成FSGS.許濤5等通過給大鼠兩次靜脈注射阿霉素的方法, 復(fù)制出大鼠腎病綜合征的模型, 并連續(xù)觀察12周, 發(fā)現(xiàn)造模6周后, 大鼠腎病理改變類似于微小病變型腎病,

13、到造模12周時, 己有腎小球硬化的改變出現(xiàn)。試驗人員應(yīng)根據(jù)自己實驗的具體情況來判斷模型建立時間及給予干預(yù)的時間, 以得到更理想的實驗結(jié)果.三、阿霉素腎病模型的建立方法阿霉素誘發(fā)大鼠腎病是一個較經(jīng)典的腎病模型, 由最初的單次給藥, 到以后的各種不同改良方法, 所誘導(dǎo)的阿霉素腎病模型逐漸成熟, 下面講述幾種常見方法。（1）一次性尾靜脈注射用阿霉素制作大鼠腎病模型于1982年由Bertani2等首先報道, 他們采用的方法是大鼠尾靜脈一次性注射7.5mg/kg的ADR, 給藥后6-14d出現(xiàn)嚴(yán)重蛋白尿, 約1月左右達(dá)到高峰, 且出現(xiàn)明顯低白蛋白血癥、高膽固醉血癥等腎病綜合征表現(xiàn).光鏡下病變輕微電鏡下腎

14、小球上皮細(xì)胞足突腫脹融合。由于阿霉素的消化道毒副作用較強, 尾靜脈一次性注射ADR7.5mg/kg一周后引起大鼠嚴(yán)重腹瀉, 以至導(dǎo)致死亡, 影響造模成功率。腹瀉嚴(yán)重還有礙于藥物, 特別是口服藥物的篩選及藥理作用研究。對此, 有些研究者采用了減少給藥劑量, 降低胃腸道刺激的方法, 較常用的劑量為6.5mg/kg, 目前文獻(xiàn)報道一次性尾靜脈注射阿霉素最小劑量為5mg/kg。（2）二次尾靜脈注射法由于上述原因, 魯斌3等參照Tullio Bertani等的方法, 改造了阿霉素急性腎病模型, 采用二次給藥法, 即第一次注射阿霉素4mg/kg, 間隔1周, 第二次注射3.5mg/kg, 取得了較好造模效

15、果。造模第2周, 大鼠尿蛋白大于100mg/24h, 第5周達(dá)高峰, 并有明顯的低蛋白血癥和高膽固醉血癥出現(xiàn)第周末處死大鼠,電鏡觀察腎臟病理組織切片, 可見上皮細(xì)胞空泡變性, 假絨毛明顯變性, 足突廣泛融合, 裂隙消失, 符合微小病變型腎病病理特點。該法所造模型, 尿蛋白持續(xù)時間、病理變化、各項生化指標(biāo)變化均與一次給藥模型相近。而腹瀉率明顯降低,腹瀉程度減輕, 模型動物死亡率下降, 造模成功率顯著提高。（3）單側(cè)腎摘除加重復(fù)尾靜脈注射王泰華3等繼續(xù)對此模型進行改進, 制作成右腎切除加重復(fù)注射阿霉素的腎小球硬化模型該模型的制作方法是先將大鼠右腎摘除, 然后尾靜脈重復(fù)注射阿霉素（首次劑量4-5mg

16、/kg, 重復(fù)注射劑量2-3mg/kg, 二者間隔25-30d）。此模型以腎小球臟層細(xì)胞病變?yōu)橹? 逐漸發(fā)展成節(jié)段性腎小球硬化。該模型觀察90-100d, 已有80%腎小球硬化, 已完全可達(dá)到實驗?zāi)康暮鸵蟆＃?）雙腎動脈注射董晨4等經(jīng)大鼠雙腎動脈注射阿霉素45mg/kg(按腎組織計重)后, 立即系扎雙腎動靜脈8min, 所建模型巧15d左右出現(xiàn)大蛋白尿, 電鏡下可見腎小球足突融合, 該模型尿蛋白排泄量與單純藥物性腎病模型相同, 該模型因除雙腎外的其他臟器均不暴露于阿霉素, 使得對腎病綜合征各臨床表現(xiàn)間關(guān)系的研究簡單化, 但其操作較為復(fù)雜。除上述模型制作方法外, 也有單側(cè)腎切除加重復(fù)腹腔注射阿

17、霉素, 多次（多于2次）尾靜脈注射阿霉素等多種方法。總之, 每種造模方法各有其優(yōu)缺點, 應(yīng)根據(jù)自己的實驗特點進行選擇。腎病綜合征( NS )患者初期血黏度明顯增加9 , 加上激素和利尿劑的使用導(dǎo)致高凝狀態(tài)10 , 進而形成血栓, 是難治性腎病的重要原因。本實驗通過間隔一周兩次注射阿霉素來制造腎病大鼠模型以觀察凝血酶原時(prothrombintime，PT) , 部分活化凝血酶時間(activated partialthromboplastin time，APTT ), 凝血酶時間(thrombin time, TT )和復(fù)鈣時間（recalcification time，RT ) 等血參數(shù)，

18、以探討NS患者凝血功能的變化。11材料與方法1.1.1實驗材料與試劑 ：健康清潔級SD（Sprague-Dawley）大鼠30只，重150g-190g，大鼠飼料50kg，SPF級，粗蛋白質(zhì)含量24.9%，經(jīng)河南省農(nóng)科院質(zhì)標(biāo)中心檢驗，墊料30kg（已消毒），以上均購于鄭州大學(xué)動物實驗中心，動物許可證號：SCXK（豫）2005-0001；動物實驗操作在河南省（鄭州大學(xué)）醫(yī)藥科學(xué)研究院實驗動物房SPF級實驗室完成，室溫2226，濕度5070%，光照正常晝夜交替。實驗所需器具均經(jīng)嚴(yán)格滅菌消毒，實驗操作在無菌條件下進行。實驗動物許可證號：SCXK（豫）2011-0010，動物自由飲水、進食，保持電料的干

19、燥，一般情況下3天換一次墊料，大鼠經(jīng)適應(yīng)性標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)1周，待大鼠體重達(dá)到200g220g，準(zhǔn)備開始實驗。將大鼠隨機分為A組正常對照組(15只)和B組阿霉素腎病模型組(15只)。注射用鹽酸多柔比星（阿霉素，ADR）10支,10 mg/ 支, 購于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院一樓門診處，由浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字H33021980 。主要試劑：（1） 磺基水楊酸硫酸鈉（SSS）:用電子天平稱取磺基水楊酸3.0g，無水硫酸鈉7.0g，蒸餾水溶解后稀釋至100ml，然后用三層濾紙過濾之后即可使用；（2） 磷酸緩沖液（PBS）溶液：用電子天平稱取十二水磷酸氫二鈉（Na2HPO412H2O）

20、5.8g，二水磷酸二氫鈉（NaH2PO42H2O）0.4g，氯化鈉（Nacl）18.54g,然后將其溶解到1L的蒸餾水中，備用。（3） 兔腦粉浸出液 取150mg干燥兔腦粉，置于試管中，加生理鹽水2.5ml，放入37水浴，充分?jǐn)嚢?0min，并置其水浴中備用。（4） 兔腦粉浸出液 取150mg干燥兔腦粉，置于試管中，加生理鹽水2.5ml，放入37水浴，充分?jǐn)嚢?0min，并置其水浴中備用。（5） 0.025mol/LCaCl2溶液。（6） 0.1 mol/L草酸鈉溶液 , 稱1.34g草酸鈉加水至100ml。（7） 受檢血漿 以0.109mol/L枸櫞酸鈉溶液1:9抗凝，3000r/min，離

21、心510min，獲貧血小板血漿。（8） 24%白陶土-腦磷脂懸液（同ACT）。（9） 凝血酶溶液 用生理鹽水調(diào)至使正常血漿在16-18s凝固為標(biāo)準(zhǔn)。1.1.2 主要實驗儀器產(chǎn)品名稱 生產(chǎn)公司 產(chǎn)地自動平衡離心機 上海醫(yī)用分析儀器廠 中國臺式高速離心機 EPPENDOF 德國電子分析天平 METTLER TOLEDO 瑞典恒溫水箱 上海躍進醫(yī)療器械廠 中國紫外分光光度計 上海精科實業(yè)有限公司 中國加樣器（100ul） EPPENDOF 德國架式不銹鋼大鼠代謝籠 蘇州馮氏實驗動物設(shè)備有限公司 中國1.1.3實驗方法：當(dāng)大鼠的體重達(dá)到200g220g后開始實驗，;對照組于實去 驗開始后第7天、第14

22、天分別從尾靜脈注射等體積的生理鹽水,放入籠內(nèi)飼養(yǎng),自由攝食、飲水，從第1次注射后連續(xù)觀察至5周末。1.1.4大鼠尿蛋白的收集各組均于第1 次阿霉素注射前1 d、第2 次阿霉素注射后1 周末、2周后、3周后、4周后、5周后用代謝籠收集大鼠24 h 尿液（一般情況下是從第一天上午8:30到第二天上午8:30）,用量筒測尿量,搖勻用1.5ml的EP（Epoxy epoxide）管取1.5mL ,3 000 r/ min ,離心5 min ,去除沉渣,- 20 冰箱保存待測。測定前先把尿液從冰箱中取出放入4的冰箱中解凍，之后用磺基水楊酸比濁法測定尿液的濃度。1.1.4.1測定大鼠24h尿蛋白總量收集的

23、尿液體積為V。取1ml磺基水楊酸-硫酸鈉試劑加入試管中，加100L尿液作為樣品管，取磷酸緩沖液試劑加入另外一個試管中，加100L尿液作為空白管，如樣品管中比較的渾濁，可以加入磷酸緩沖液稀釋，同時空白管中也需要加入相同體積的磷酸緩沖液，記下稀釋的倍數(shù)。混勻后放入37水浴鍋中，反應(yīng)15min。以生理鹽水調(diào)零，用紫外分光光度計在420nm處比色，測得樣品管吸光度為A1。同法測得空白管的吸光度A2，吸光度為二者差值。帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得尿蛋白總量。1.1.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法：用電子分析天平稱取3mg的尿蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,用去離子水溶解到3ml的去離子水中制備成1.0mg/ml的溶液，分別取5個試管用磷酸緩沖

24、液分別稀釋為1.0mg/ml、0.8 mg/ml、0.6 mg/ml、0.4 mg/ml、0.2 mg/ml的溶液之后用紫外分光光度計測定其吸光度A1、A2、A3、A4、A5。然后根據(jù)吸光度和濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.1.5大鼠凝血時間的檢測阿霉素組和正常組大鼠于每周收集完尿液當(dāng)天（注射阿霉素前1 d、第2 次阿霉素注射后1 周末、2周后、3周后、4周后、5周后）通過眼眶取血1.5ml,室溫下2小時內(nèi)離心,3 000 r/ min ,離心10min ,取血清, - 20 冰箱保存待測。1.1.5.1血漿凝血酶原時間（PT）測定(1)在試管中加入109mmol/L枸櫞酸鈉或0.1mol/L草酸鈉溶液0

25、.2ml，然后加受檢血1.8ml混勻，低速離心，分離血漿。(2)取小試管1支，加入血漿和兔腦粉浸出液各0.1ml，37預(yù)溫，再加入0.1mlCaCl2溶液37預(yù)溫，立即開動秒表，不斷傾斜試管，至液體流動停止所需時間，即為凝血酶原時間。重復(fù)操作23次，取平均值，并作正常對照。1.1.5.2凝血酶時間測定（TT）取抗凝血漿0.1ml于小試管內(nèi)，置37水浴中，加凝血酶溶液0.1ml，同時開動秒表，記錄凝固時間。重復(fù)2-3次，求平均值。1.1.5.3活化部分凝血活酶時間測定(APTT)(1)受檢血漿、白陶土-腦磷脂懸液各0.1ml，混勻，37C水浴3min，其間輕輕振搖數(shù)次。(2)加入0.025mol

26、/L氯化鈣溶液0.1ml，立即啟動秒表，不停振搖并觀察出現(xiàn)纖維蛋白絲的時間。重復(fù)2次，取平均值，同時作正常對照。1.1.5.4復(fù)鈣時間（RT）的測定 取血漿（草酸鈉抗凝，與血液之比為19）0.1ml，加入0.025mol/L CaCl2溶液0.1ml,混合，立即開動秒表。記錄血漿中出現(xiàn)彌漫白色顆粒所用時間。重復(fù)23次，求均值。1.1.6大鼠的體重測定各組均于第1 次阿霉素注射前1 d、第2 次阿霉素注射后1 周末、2周后、3周后、4周后、5周后用電子天平測大鼠的體重，記錄其體重。1.1.7統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS12. 0 統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理,所有數(shù)值以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組間的

27、比較應(yīng)用方差齊性檢驗后,采用t或t檢驗,多組間的比較應(yīng)用單因素方差分析后,采用LSD 檢驗做各組間均數(shù)的兩兩比較。P 0. 05 表示有統(tǒng)計學(xué)意義。2 結(jié)果與結(jié)論2. 1 一般情況模型組15只大鼠于阿霉素注射后第5 天均出現(xiàn)不同程度的腹瀉, 食量下降且活動減少,第2周出現(xiàn)輕度水腫,以足、腹、睪丸較明顯。第4 、5 周水腫加重。期間B組1只大鼠死亡,1 只制備模型失敗被剔除。模型成功率達(dá)90 %。對照組大鼠健康存活。2. 2 各組大鼠尿蛋白的定量分析阿霉素組第2 次注射ADR 1 周末、2周末24 h 尿蛋白定量與同期正常對照組相比有顯著性差異( P 0. 01) ,且隨時間延長24 h 尿蛋白

28、定量逐漸增高,12 周末達(dá)高峰(表1) 表1大鼠不同時期24h尿蛋白總量變化造模前造模2周造模3周造模4周造模5周造模6周A6.460.886.351.287.061.606.821.897.561.858.001.91B7.521.4136.673.15*77.595.88*214.4512.60*266.7717.19*293.5022.63*（單位：mg）B與A組比較：*P0.05、*P0.01；造模前 造模2周 造模3周 造模4周 造模5周 造模6周2. 3 各組大鼠凝血時間指標(biāo)的檢測各組均于第1 次阿霉素注射前1 d、第2 次阿霉素注射后1 周末、2周后、3周后、4周后、5周后通過大

29、鼠的眼眶取血，測定凝血時間。2.3.1凝血酶原時間（prothrombintime ，PT）：造模前，兩組大鼠PT無顯著性差異（P0.05）。模型建立后，模型大鼠PT明顯縮短，與A組相比，差異顯著（P0.01），說明外源性凝血系統(tǒng)功能亢進。表2 大鼠不同時期PT變化造模前造模2周造模3周造模4周造模5周造模6周A14.730.3714.500.8214.930.2615.060.6515.000.7114.670.91B14.630.5110.380.86*7.930.68*7.530.71*7.060.38*7.250.90*（單位：s）B與A組比較：*P0.05、*P0.01；2.3.2凝

30、血酶時間（thrombin time ，TT）：造模前，兩組大鼠TT無顯著性差異（P0.05）。大鼠成模后，TT明顯縮短，且整個實驗期間，B組TT一直處于較低的狀態(tài)，與A組相比，差異顯著（P0.01），說明模型大鼠血液系統(tǒng)處于高凝狀態(tài)。表3大鼠不同時期TT變化造模前造模2周造模3周造模4周造模5周造模6周A15.820.3015.580.5615.470.5015.560.6215.620.6215.520.55B16.020.557.150.44*7.230.66*7.7.0.41*7.350.65*6.930.54*（單位：s）B與A組比較：*P0.05、*P0.01；造模前 造模2周 造

31、模3周 造模4周 造模5周 造模6周2.3.3活化部分凝血活酶時間（activated partialthromboplastin time ，APTT）：造模前，兩組大鼠APTT無顯著性差異（P0.05）。造模成功后，模型大鼠APPT明顯縮短。整個實驗期間一直呈縮短狀態(tài)，與A組相比，差異顯著（P0.01），說明內(nèi)源性凝血功能亢進。表4大鼠不同時期APTT變化造模前造模2周造模3周造模4周造模5周造模6周A30.950.7230.960.8931.000.8731.031.5930.930.8831.300.82B30.970.9021.780.98*18.450.75*17.600.59*1

32、5.671.30*14.780.65*（單位：s）B與A組比較：*P0.05、*P0.01；2.3.4復(fù)鈣時間（recalcification time ，RT）：造模前，兩組大鼠RT無顯著性差異（P0.05）。造模成功后，模型大鼠RT明顯縮短。整個實驗期間一直保持較低狀態(tài)，與A組相比，差異顯著（P0.01），說明內(nèi)源性凝血功能發(fā)生異常。表5 大鼠不同時期RT變化造模前造模2周造模3周造模4周造模5周造模6周A35.410.5335.700.6235.050.6135.300.8935.570.6035.231.01B35.400.6222.680.68*22.371.08*20.931.37

33、*20.621.35*20.951.30*（單位：s）B與A組比較：*P0.05、*P0.01；造模前 造模2周 造模3周 造模4周 造模5周 造模6周2. 4各組大鼠的體重變化實驗期間，B組共有1只大鼠死亡。B組造模2周后，與A組相比，表現(xiàn)出明顯的阿霉素腎病模型特征，如食量下降、尿量減少、體毛干枯、精神不振、后肢和陰囊出現(xiàn)水腫、剖檢可發(fā)現(xiàn)明顯腹水現(xiàn)象等。造模前兩組大鼠體重?zé)o顯著性差異，造模后每周，模型大鼠體重均明顯低于正常組（P0.01）。兩組大鼠體重均有增長的趨勢，但A組最明顯。表6大鼠不同時期體重變化造模前造模2周造模3周造模4周造模5周造模6周A187.167.35265.8310.2

34、4285.0010.37312.839.79337.674.46374.677.45B188.338.26239.838.11*247.6618.13*265.338.36*273.178.86* 278.679.48*（單位：g）B與A組比較：*P0.05、*P0.01；造模前 造模2周 造模3周 造模4周 造模5周 造模6周3 討論3.1 我們應(yīng)用阿霉素靜脈注射大鼠成功復(fù)制了腎病綜合征模型，其24小時尿蛋白以及凝血時間的變化均與外國的文獻(xiàn)相近；但是我們的注射阿霉素劑量小于外國文獻(xiàn)，國外文獻(xiàn)報道一般為7.5mg/kg,主要是阿霉素心臟毒性很大，大劑量注射一般在57d后引起大鼠死亡，所以根據(jù)預(yù)

35、實驗結(jié)果選擇此劑量，效果較滿意。3.2 小兒原發(fā)性腎病以微小病變型為主。阿霉素腎病模型是目前較好的類似人類微小病變型腎病的模型。有關(guān)研究已證實,阿霉素系含醌的蒽環(huán)抗生素,由于在腎臟內(nèi)被代謝還原為半醌型自由基,后者與氧反應(yīng)產(chǎn)生活性氧,誘發(fā)腎小球上皮細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng),改變腎小球上皮細(xì)胞糖蛋白代謝,破壞腎小球濾過膜的結(jié)構(gòu)和功能,最終導(dǎo)致膜濾過屏障的選擇性變化而引起蛋白尿11.3.3 對氨基核苷酸腎病的發(fā)病機制目前還不完全清楚，一般認(rèn)為是自由基產(chǎn)生、脂質(zhì)過氧化物形成，對腎小球和腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生毒性，造成腎小球濾過膜電荷屏障缺損和對分子大小控制上缺陷，使腎小球濾過膜通透性改變和腎小管重吸收障礙12、

36、13。3.4 高凝狀態(tài)（HCS）是指血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、血液凝血、抗凝及纖溶系統(tǒng)等有關(guān)因子發(fā)生變化或血液流變學(xué)發(fā)生了改變所引起的病理狀態(tài), 這種病理狀態(tài)有利于血栓形成14。APT T 、P T 是分別反映內(nèi)、外源凝血系統(tǒng)的指標(biāo), 其值縮短說明NS內(nèi)外源凝血系統(tǒng)處于活躍狀態(tài)。N S病人由于免疫復(fù)合物沉積在腎小球, 造成腎小球內(nèi)皮損傷, 損傷的內(nèi)皮細(xì)胞釋放組織因子,激活了外源凝血系統(tǒng), 同時內(nèi)皮損傷暴露了其下層的膠原和微纖維, 又激活了內(nèi)凝系統(tǒng), 內(nèi)外源凝血系統(tǒng)激活使血液處于HCS , 易形成血栓15致謝感謝河南中醫(yī)學(xué)院，大學(xué)四年中他讓我學(xué)會了很多新的知識，讓我結(jié)識了很多志同道合的朋友，還有那么

37、多的優(yōu)秀老師給我們指導(dǎo)，讓我在醫(yī)學(xué)的殿堂中茁壯的成長，更重要的是讓我學(xué)會了怎樣去學(xué)習(xí)的方法并且開闊的自己眼界。歷時將近兩個月的時間終于將這篇論文寫完，在論文的寫作過程中遇到了無數(shù)的困難和障礙，都在同學(xué)和老師的幫助下度過了。尤其要強烈感謝我的論文指導(dǎo)老師何美霞老師以及一直指導(dǎo)我們做實驗的張勇師兄，他對我進行了無私的指導(dǎo)和幫助，不厭其煩的幫助進行論文的修改和改進。另外，在校圖書館查找資料的時候，圖書館的老師也給我提供了很多方面的支持與幫助。在此向幫助和指導(dǎo)過我的各位老師表示最中心的感謝！感謝這篇論文所涉及到的各位學(xué)者。本文引用了數(shù)位學(xué)者的研究文獻(xiàn)，如果沒有各位學(xué)者的研究成果的幫助和啟發(fā)，我將很難完

38、成本篇論文的寫作。感謝我的同學(xué)和朋友，在我寫論文的過程中給予我了很多你問素材，還在論文的撰寫和排版燈過程中提供熱情的幫助。由于我的學(xué)術(shù)水平有限，所寫論文難免有不足之處，懇請各位老師和學(xué)友批評和指正！參考文獻(xiàn)：1葉志斌，崔若蘭.腎病綜合征.見：林善琰，主編.當(dāng)代腎臟病學(xué).：上?？萍冀逃霭嫔?，2001.9.2 Bertani T，Rocebi G，Biolsci D，et a1Molecular cloning Adrmycininduced glomenderosis in the ratAm J Kid Dis，1986，7：12193.魯斌,李新民,馬融;對改造的阿霉素腎病模型的評價J;實

39、驗動物科學(xué)與管理;1999年03期4.王泰華,錢家麒,張介玉,姚莒華;阿霉素腎病腎硬化動物模型的實驗改進J;腎臟病與透析腎移植雜志;1997年02期.5董晨,盧思廣,夏志強,焦玉清,方先勇；雙腎動脈給阿霉素制備大量蛋白尿大鼠模型；徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1999年第5期.6.姜新猷,胡明昌. 柔紅霉素腎病:活性氧誘發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)引起的腎組織損傷. 中華腎臟病雜志,1991 ,7 :74.7.Zoja C Perico N,Remuzzi G,et al.Abnomalities in arachidonic acid metabolites in nephrotoxic glomerular injury .Toxicol lett .1989;46:65.8Washizawa K,Ishii K,Itoh N,et al.Morphometric changes in glomerular anionic sites during aminonucleoside n