定性酶免疫測定的數(shù)據(jù)處理及結果報告

1、定性酶免疫測定的數(shù)據(jù)處理及結果報告衛(wèi)生部臨床檢驗中心 李金明定性？定量？ 定性測定常以“有”或“無”也即“陽性”或“陰性”來表達測定結果；半定量測定雖介于定性和定量之間，但從嚴格意義上來說，其仍屬于定性測定，只不過其對定性測定中的“陽性”作了進一步的分級，即所謂的強陽性陽性弱陽性的區(qū)別； 定量測定的結果則以濃度（如IU/L、ug/L等的方式表達。定性測定結果確定的依據(jù)定性測定結果確定的依據(jù) 定性測定結果確定的依據(jù)在于陽性陰性判定值（Cut-off）的建立， Cut-off 值的確立應盡可能地避免假陽性或假陰性結果的出現(xiàn)。除了 Cut-off 值以外，還有許多其它的設值方法以判斷陰性和陽性結果，

2、如S/N（常稱為P/N）比值（Ratio）等。 與酶免疫測定數(shù)據(jù)處理和結果報告有關的概念 標準差 適用于正態(tài)分布的標準差（SD），不能泛泛地用于酶免疫測定結果的判定。這是因為陰性參考血清的酶免疫測定值的分布常為非正態(tài)分布，呈一正向偏斜。概念 變異系數(shù) 重復性（Reproducibility）：一般通過重復兩次測定樣本來觀察。 測定下限（Detectability）：是指超過零劑量精密度的最低抗原濃度，可通過 t 分布（一邊拖尾，因為此時曲線只有上升趨勢）計算在測定下限時的吸光度值的均值差。 測定敏感性（Sensitivity): 是指一實驗的測定反應對待測物質濃度變化的改變，即dR/dC。 概

3、念 陽性測定能力指數(shù)（DI（）可定義為一實驗對陽性標本測定后給出陽性結果的能力（通常稱為“敏感性”）； DI（）=真陽性/（真陽性+假陰性）100% 陰性測定能力指數(shù)（DI（）則為對陰性樣本測定給出陰性結果的能力（通常稱為“特異性”）； DI（）= 真陰性/（真陰性+假陽性）100% 概念 陽性結果的可靠性（預示值）即測定為陽性的標本實際上為陽性的可能性。 =真陽性/（真陽性+假陽性）100% 陰性結果的可靠性則為一份給出陰性結果的樣本實際上為陰性的可靠性。 = 真陰性/（真陰性+假陰性）100%測定結果的報告和數(shù)據(jù)處理 酶免疫測定數(shù)據(jù)處理報告在理想情況下應達到下述要求:(1)易于讓不熟悉該試

4、驗的人所理解;(2)定性測定必須結果明確,即陽性或陰性、反應或不反應、在正常范圍內或不正常等；（3）定量測定的線性；（4）數(shù)據(jù)的可重復性；（5）試驗的評價不應建立在假定的正態(tài)分布上；（6）結果用于進一步分析處理（如流行病學分析）的充分性。 定性酶免疫測定的CUT-OFF值確定CUT-OFF值的方法一 使用陰性血清測定結果均值的2或3倍作為陽性判斷值：取一定數(shù)量（通常較少）的陰性血清樣本，使用已建立的酶免疫測定方法或試劑盒測定，如果上述陰性血清樣本的吸光度均值為0.05，則該次測定的陽性判斷值為0.10或0.15。例如現(xiàn)有的試劑盒結果的判定以P/N或S/N2.1為陽性，其依據(jù)即是以陰性參考血清的

5、2倍作為陽性判定值。這種Cut-off值設定方法，可以較為避免假陽性結果的出現(xiàn)，但假陰性可能比例較高。總的來說，這是一種非常粗糙的Cut-off值設定方法。 確定CUT-OFF值的方法二 首先測定大量（數(shù)千）正常人血清樣本，然后將所得到的吸光度均值2或3個SD作為陽性判斷值：當正常人血清樣本數(shù)量足夠大時，使用特定的酶免疫測定方法測得的吸光度值將呈正態(tài)分布，在具有95.3(單側)的可信度的情況下，可以將從正常人血清測得的吸光度均值2SD作為陽性判斷值；如要求99(單側)的可信度，則以吸光度均值3SD作為陽性判斷值。與第一種方法相比，這種Cut-off值設定方法更為科學一些，建立在統(tǒng)計學的精確計算

6、的基礎上，但由于這種方法僅考慮陰性人群，故而難以確定“灰區(qū)”，從圖32可見，有可能會出現(xiàn)較多的假陰性，因其將整個“灰區(qū)”幾乎都歸為陰性。確定CUT-OFF值的方法三 在測定大量正常人血清樣本的同時，測定大量陽性血清樣本，如測定值為正態(tài)分布，則根據(jù)u檢驗的特點，以單側99.5%的可信限先分別確定陰性和陽性的Cut-off值；如為非正態(tài)分布，則百分位數(shù)法單側 95或99來確定Cut-off值。陰性和陽性人群的Cut-off值確定后，根據(jù)“灰區(qū)”的大小，綜合平衡考慮假陽性和假陰性率的情況下確定Cut-off值。這種Cut-off值確定方法，較之單純從陰性人群考慮要較為全面一些，并且對測定的“灰區(qū)”有

7、一個估計，不會出現(xiàn)將“灰區(qū)”全部納入陰性的情況。確定CUT-OFF值的方法四 在測定大量正常人和大量陽性血清樣本的同時，測定轉化型血清（從陰性轉變?yōu)殛栃赃^程中的系列血清）樣本，取假陽性和假陰性發(fā)生率最低，且能區(qū)別抗原轉化至抗體出現(xiàn)點的吸光度值作為陽性判斷值：該方法與上述（3）的區(qū)別是增加了轉化型血清樣本的測定，使得陽性判斷值的確定，能最佳地將陽性與陰性樣本區(qū)別開來。這種Cut-off值確定方法應該說是目前最佳的模式，但由于轉化型血清樣本非常昂貴且難以得到，因此應用起來有一定難度。ROC曲線在曲線在Cut-off值設定中的應用值設定中的應用 ROC是英文Receiver Operating ch

8、aracteristic的縮寫，可直譯為接收機工作特性，其最初主要是用于通訊學領域。在臨床醫(yī)學檢驗領域內，ROC不僅可用于不同檢驗方法之間的比較，而且可用于對檢驗項目臨床準確性的評價以及決定正常和異常的分界點。 ROC曲線描述的是特定的檢驗方法的靈敏度(真陽性率)(TPR)=真陽性數(shù)/(真陽性+假陰性) 與假陽性率(FPR)=假陽性數(shù)/(假陽性+真陰性)之間的關系，即以FPR為橫坐標、TPR為縱坐標所作出來的一條曲線 根據(jù)這種關系，可確定區(qū)分正常與異常的分界點究竟在何處最為合適，也就是說此時的假陽性和假陰性率最低或比例最為適當或最為符合使用目的。因此，當然就可以用于ELISA測定Cut-off

9、值的確定。ROC曲線的含義 怎樣利用ROC曲線來確定Cut-off值怎樣利用ROC曲線來確定Cut-off值怎樣利用ROC曲線來確定Cut-off值Cut-off值批間差異的控制 ELISA測定每次的Cut-off值都會有所差異。但只要這種差異是在允許的范圍內，就不會影響Cut-off值的應用。 通常有這樣幾種方法來控制Cut-off值的批間變異，即（1）測定多份（如50份）正常人血清，確定其吸光度均值3SD為試劑盒內陽性參考血清測定吸光度的40。因此，在使用該試劑盒的臨床檢測中，可將這種參考血清作為測定控制的一個內標準，以校準試驗系統(tǒng)的Cut-off值。（2）在測定中包括標準化的陽性混合血清和陰性混合血清。（3）還有一個簡單的非參數(shù)方法是測定許多陰性血清，于是將Cut-off值設于95的陰性血清的吸光度值低于此值處，然后將確定