實驗四福醫(yī)大白細胞計數、網織紅細胞計數、血沉概論

1、實驗四福醫(yī)大白細胞計數、網織紅細胞計數、血沉概論1一、顯微鏡白細胞計數（臨檢指導一、顯微鏡白細胞計數（臨檢指導P32） 1. 概述概述 人外周血白細胞人外周血白細胞 單核細胞單核細胞 白細胞白細胞 淋巴細胞淋巴細胞 中性分葉核粒細胞中性分葉核粒細胞 粒細胞粒細胞 中性桿狀核粒細胞中性桿狀核粒細胞 嗜酸性粒細胞嗜酸性粒細胞 嗜堿性粒細胞嗜堿性粒細胞1一、顯微鏡白細胞計數一、顯微鏡白細胞計數2原理原理 用白細胞計數稀釋液（用白細胞計數稀釋液（2%冰醋酸加入冰醋酸加入1%美美藍或結晶紫數滴）藍或結晶紫數滴）0.38ml，將血液（，將血液（20l）稀釋）稀釋20倍，在破壞成熟紅細胞的同時固定白細胞，后

2、充入倍，在破壞成熟紅細胞的同時固定白細胞，后充入改良牛鮑計數板，在低倍鏡下計數四角改良牛鮑計數板，在低倍鏡下計數四角4個大方格個大方格內的白細胞數，經換算求得每升血液中白細胞數。內的白細胞數，經換算求得每升血液中白細胞數。1一、顯微鏡白細胞計數一、顯微鏡白細胞計數 3.操作步驟操作步驟 （1）加稀釋液）加稀釋液 ：白細胞稀釋液：白細胞稀釋液0.38ml（2）稀釋血液：末梢采血）稀釋血液：末梢采血20l，加入稀釋液中混勻，加入稀釋液中混勻（3）溶血）溶血 ：混勻后靜置，待液體變?yōu)樽睾稚夯靹蚝箪o置，待液體變?yōu)樽睾稚?）充池：同紅細胞計數）充池：同紅細胞計數 （5）計數：低倍鏡下計數四角）計數：

3、低倍鏡下計數四角4個大方格內白細胞總數。個大方格內白細胞總數。 11一、顯微鏡白細胞計數一、顯微鏡白細胞計數4.計算計算WBC=N/41020106=N/20109/L5.參考值參考值 成人：成人： （410）109/L 初生兒：初生兒： （1520）109/L 6月月2歲：歲： （1112）109/L1 6.注意事項注意事項 （1）器材：微量吸管及牛鮑計數板的校正）器材：微量吸管及牛鮑計數板的校正（2）標本采集和稀釋應準確）標本采集和稀釋應準確（3）加蓋玻片方式：）加蓋玻片方式： WHO推薦推薦“推式推式”法法 （4）充液的影響：同紅細胞計數）充液的影響：同紅細胞計數 （5）計數原則）計數原

4、則 一、顯微鏡白細胞計數一、顯微鏡白細胞計數1（6）計數室內的細胞分布要均勻：各大方格間細胞）計數室內的細胞分布要均勻：各大方格間細胞 數相差不超過數相差不超過10%，否則應重新重池。，否則應重新重池。（7）調整計數白細胞的數量或稀釋倍數）調整計數白細胞的數量或稀釋倍數:細胞數量過細胞數量過 少，可擴大計數域少，可擴大計數域(計計8或或9個大方格個大方格)或加大取或加大取 血量；細胞數量過多，可增加稀釋液至血量；細胞數量過多，可增加稀釋液至0.79ml 或僅加血或僅加血10l。（8）去除有核紅細胞的影響）去除有核紅細胞的影響 ： 實際白細胞數實際白細胞數/L=100校正前白細胞數校正前白細胞數

5、/ （100+有核紅細胞）有核紅細胞）1 7.方法學評價方法學評價 顯微鏡計數法是傳統(tǒng)的白細胞計數法，并可用顯微鏡計數法是傳統(tǒng)的白細胞計數法，并可用 于校準血細胞分析儀，但其精密度和重復性欠佳。于校準血細胞分析儀，但其精密度和重復性欠佳。 用于校準血液分析儀時應在嚴格規(guī)范的條件下進行。用于校準血液分析儀時應在嚴格規(guī)范的條件下進行。 而校準的血液分析儀在嚴格規(guī)范的條件下，精密度和而校準的血液分析儀在嚴格規(guī)范的條件下，精密度和 準確性較高。準確性較高。一一、顯微鏡白細胞計數顯微鏡白細胞計數1 血液分析儀檢測速度快，適合大規(guī)模健康人群普查，但需特殊儀器，當某些人為或病理情血液分析儀檢測速度快，適合大

6、規(guī)模健康人群普查，但需特殊儀器，當某些人為或病理情況（如外周血有核紅細胞、巨大血小板和血小板凝集等）可干擾白細胞計數。況（如外周血有核紅細胞、巨大血小板和血小板凝集等）可干擾白細胞計數。18.臨床意義臨床意義 白細胞在生理或病理情況下均可有差異。多數白細胞在生理或病理情況下均可有差異。多數與中性粒細胞數量變化一致。與中性粒細胞數量變化一致。11.原理原理 網織紅細胞（網織紅細胞（Ret）是晚幼紅細胞脫核后到完全成熟的）是晚幼紅細胞脫核后到完全成熟的紅細胞間的過渡細胞。其胞質中殘存核糖核酸等嗜堿性物紅細胞間的過渡細胞。其胞質中殘存核糖核酸等嗜堿性物質，故經煌焦油藍質，故經煌焦油藍/新亞甲藍染液活

7、體染色后，可見有藍綠新亞甲藍染液活體染色后，可見有藍綠色點狀、線狀、顆粒狀或網狀結構，故名網織紅細胞。色點狀、線狀、顆粒狀或網狀結構，故名網織紅細胞。 1二二、網織紅細胞計數網織紅細胞計數 2. 2.操作步驟（玻片法）操作步驟（玻片法）（1）加染液：于載玻片的中央滴加煌焦油藍乙醇溶液，自）加染液：于載玻片的中央滴加煌焦油藍乙醇溶液，自 然干燥后備用。然干燥后備用。（2）加血液：取血）加血液：取血1滴，滴在染料上，用推片角輕輕將血滴，滴在染料上，用推片角輕輕將血 滴與染料混勻，然后用另一載玻片垂直蓋在此玻片上滴與染料混勻，然后用另一載玻片垂直蓋在此玻片上 （盡量不留氣泡），室溫下靜置（盡量不留氣

8、泡），室溫下靜置1520min。（3）制備涂片。）制備涂片。（4）油鏡下計數）油鏡下計數1000個紅細胞中的網織紅細胞數（一般個紅細胞中的網織紅細胞數（一般 連續(xù)計數連續(xù)計數3個視野即可）。個視野即可）。1（5 5）也可用米勒氏窺盤（）也可用米勒氏窺盤（Miller oculordisc）置入接目鏡內）置入接目鏡內 進行計數（如下圖）。進行計數（如下圖）。 具體方法是以窺盤的具體方法是以窺盤的A A區(qū)計數紅細胞，區(qū)計數紅細胞，B B區(qū)計數網織區(qū)計數網織 紅細胞，由于紅細胞，由于B B區(qū)的面積為區(qū)的面積為A A區(qū)的區(qū)的9 9倍，故計算如下：倍，故計算如下： 網織紅細胞（網織紅細胞（% %）=B=

9、B區(qū)網織紅細胞數區(qū)網織紅細胞數/ A/ A區(qū)紅細胞數區(qū)紅細胞數 9 9 100%100%11二二、網織紅細胞計數網織紅細胞計數 3.計算計算 網織紅細胞分數數網織紅細胞分數數=計數的網織紅細胞數計數的網織紅細胞數/1000 網織紅細胞絕對數網織紅細胞絕對數=紅細胞數紅細胞數/L網織紅細胞分數數網織紅細胞分數數 4.參考值參考值 正常成人：正常成人： 0.5%1.5% 新生兒：新生兒： 2%6% 成人網織紅細胞絕對值：成人網織紅細胞絕對值： （2484）109/L15.注意事項注意事項（1）只有活體染色后才能看到網織紅細胞，故必須將新鮮）只有活體染色后才能看到網織紅細胞，故必須將新鮮 血滴與染液

10、相混合，染液與血液之比一般約為血滴與染液相混合，染液與血液之比一般約為1：1， 但若貧血嚴重也可按但若貧血嚴重也可按1：2關系處理。注意混勻，否則關系處理。注意混勻，否則 有時凝固。有時凝固。（2）染色時間不得短于）染色時間不得短于10min，否則可能著色不佳。計數，否則可能著色不佳。計數 前注意多部位觀察，可與涂片的體尾交界處選染色前注意多部位觀察，可與涂片的體尾交界處選染色 好，紅細胞分布既不分散又不重疊的區(qū)域進行計數。好，紅細胞分布既不分散又不重疊的區(qū)域進行計數。 經此種染色后紅細胞呈清晰的藍綠色，凡胞質中含有經此種染色后紅細胞呈清晰的藍綠色，凡胞質中含有 藍綠色點狀、短線狀結構者為網織

11、紅細胞。藍綠色點狀、短線狀結構者為網織紅細胞。二、網織紅細胞計數二、網織紅細胞計數11（3）計數時需注意與異物或假象相區(qū)別。如有異物殘渣，計數時需注意與異物或假象相區(qū)別。如有異物殘渣， 多呈黑色，轉動微螺旋時可見其折光性。接目鏡中粉尖多呈黑色，轉動微螺旋時可見其折光性。接目鏡中粉尖 重疊于紅細胞上所致的假象，則隨接目鏡轉動而移位。重疊于紅細胞上所致的假象，則隨接目鏡轉動而移位。 勿將皺縮紅細胞較深染的皺縮點勿認為網織結構，皺縮勿將皺縮紅細胞較深染的皺縮點勿認為網織結構，皺縮 紅細胞其邊緣處均勻的鋸齒狀可供作鑒別。紅細胞其邊緣處均勻的鋸齒狀可供作鑒別。（4）染色后的涂片應盡快觀察計數，否則其網織

12、結構可因染色后的涂片應盡快觀察計數，否則其網織結構可因 久置而溶解消失（尤其在夏天濕度大的季節(jié)）。久置而溶解消失（尤其在夏天濕度大的季節(jié)）。 1 6.方法學評價方法學評價 玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸發(fā)，造玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸發(fā)，造 成染色結果偏低，但攜帶方便，適宜床邊采血檢查。成染色結果偏低，但攜帶方便，適宜床邊采血檢查。二二、網織紅細胞計數網織紅細胞計數17.質量控制質量控制1.1.顯微鏡法顯微鏡法 網織紅細胞目視計數誤差較大，影響因素主要有：網織紅細胞目視計數誤差較大，影響因素主要有：操作人員對網織紅細胞認識不同；血涂片質量好壞，操作人員對網織紅細胞認

13、識不同；血涂片質量好壞，計數紅細胞數量的多少和計數方法等。計數紅細胞數量的多少和計數方法等。12.儀器法儀器法 雖可計數紅細胞雖可計數紅細胞10 00050 000個，但受到個，但受到H-J小體、有核紅細胞、巨血小板等影響，可小體、有核紅細胞、巨血小板等影響，可出現假陽性。出現假陽性。1三三、血沉測定（示教）（臨檢指導、血沉測定（示教）（臨檢指導P29）1原理原理( (魏氏法魏氏法) ) 將一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂直立將一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂直立 于血沉架上于血沉架上1h后讀取紅細胞下沉后所暴露出的血漿段高后讀取紅細胞下沉后所暴露出的血漿段高 度度（mm/h）。）。12方法方法 （1 1）取靜脈血）取靜脈血1.6ml，加入含，加入含109mmol/L枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉0.4ml 的抗凝管中混勻。的抗凝管中混勻。（2 2）吸血入血沉管中至刻度）吸血入血沉管中至刻度“0”處，將血沉管直立于血處，將血沉管直立于血 沉架上。沉架上。1h后觀察結果。后觀察結果。 13.參考值參考值 50歲：男性歲：男性015mm/h 女性女性020mm/h14注意事項