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1、肌酸肌酶測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)掌握血清肌酸激酶(CK)測(cè)定(速率法)的原理,測(cè)定參數(shù)的設(shè)置及酶活性單位的計(jì)算。能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和解決實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)原理CK催化磷酸肌酸與二磷酸腺苷(ADP)反應(yīng)產(chǎn)生三磷酸腺苷(ATP)與肌酸,偶聯(lián)己糖激酶(HK)及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)的催化反應(yīng)。HK催化葡萄糖與ATP反應(yīng),形成葡萄糖-6-磷酸,G6PD催化葡萄糖-6-磷酸氧化,形成6-磷酸葡萄糖內(nèi)酯及NADPH。可在340nm波長(zhǎng)下測(cè)定NADPH生成速率而計(jì)算CK活性濃度。其反應(yīng)式如下實(shí)驗(yàn)原理ATP 肌酸 ADP 磷酸肌酸CKADP 磷酸-6-葡萄糖 葡萄糖 ATPHKH NADPH 磷酸葡萄糖內(nèi)酯-6
2、NADP 磷酸葡萄糖-6G6PDH+實(shí)驗(yàn)方法1、試劑準(zhǔn)備:一定量的R2(參看R1瓶簽)溶解一瓶R1,配制成工作液后方可使用。2、檢測(cè)步驟(波長(zhǎng):340,溫度:37)空白管空白管樣本管樣本管樣本-0.02ml生理鹽水0.02ml工作液1ml1ml分別混勻,在37度保溫2分鐘后,以空白管校零,計(jì)算每分鐘吸光度變化率。半自動(dòng)生化參數(shù)設(shè)置表項(xiàng)目名稱項(xiàng)目名稱CKCK測(cè)定方法速率法波長(zhǎng)340試劑樣本體積比250l:5l溫度37保溫時(shí)間2分鐘測(cè)定時(shí)間1分鐘K因子8095計(jì)算【參考范圍】成年男性參考范圍上限為38U/L174U/L(37),女性為26U/L140U/L(37)6300809520102010min/)/(6KKALUCK【臨床意義】CK主要存在于骨骼肌和心肌細(xì)胞中,正常人血漿中CK活性很低。血清中CK活性增高主要見于:1.心肌梗死 心肌梗死發(fā)病早期,即發(fā)病后24h血清CK活性開始升高,1218h達(dá)最高峰值,可達(dá)正常上限的1012倍,在24d降至正常水平。CK對(duì)診斷心肌梗死較其他的心肌酶譜AST、LDH的陽(yáng)性率高,特異性強(qiáng),是用于心肌梗死早期診斷、估計(jì)病情和判斷預(yù)后的較好指標(biāo)。病毒性心肌炎CK也有明顯升高。2.其他疾病 肌營(yíng)養(yǎng)不良癥、皮肌炎、骨骼肌損傷、腦血管意外、腦膜炎、
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