金雀根對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型抗炎作用的研究

1、2009年10月第31卷 第10期中成藥ChineseTraditionalPatentMedicineOctober2009Vo.l31 No.10在氧自由基損傷反應(yīng),而自由基損傷又可能通過多種途徑參與高血壓及靶器官損害的演變進程。本實驗結(jié)果表明白子菜水提物能明顯降低SHR的血壓,其降壓作用可能與升高血清中NO水平,降低血清ET水平,調(diào)整體內(nèi)NO與ET平衡狀態(tài)有關(guān),并具有良好的提高SOD活性而發(fā)揮抗自由基損傷,達到保護內(nèi)皮細胞和心、腦、腎等靶器官損害的作用。白子菜是否還能通過其它途徑達到降壓功效尚需作進一步的研究探討。參考文獻:1 王吉耀.內(nèi)利學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:229.2

2、 汪泓江,梁呈元,卓敏,等.Gynura屬3個野生蔬菜營養(yǎng)成分的比較及評價J.中國野生植物資源,2004,23(5):48249.3 冼寒梅,周 蓉,韋乃球.壯藥神仙草的性狀及民間應(yīng)用J.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2007,3(9):29230.4 馮建章.當(dāng)代心臟病學(xué)M.廣州:廣東教育出版社,2000:69270.5 劉力生.高血壓M.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:2342235.金雀根對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型抗炎作用的研究喬麗君, 汪 悅, 陳華堯, 陸 黎, 周臘梅, 夏衛(wèi)軍, 高 曌, 馬顧全, 顧向浩(1.南京市中醫(yī)院,江蘇南京210001;2.南京市中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京210000)

3、關(guān)鍵詞:金雀根;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎;抗炎免疫作用;實驗研究摘要:目的:探討金雀根藥物在治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的抗炎免疫作用。方法:取健康性SD大鼠50只,用微量注射器于左后足跖皮內(nèi)注射FCA出現(xiàn)繼發(fā)性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎,致炎前及后每隔兩天計算每只大鼠左足=踝體積與右足=踝體積之差計算關(guān)節(jié)炎得分;設(shè)正常組、模型組、金雀根高、中、低劑量組、雷公藤多苷片組,灌胃給藥后處死動物,取其踝關(guān)節(jié)切片染色觀察關(guān)節(jié)組織病理改變輕重程度。結(jié)果:¹金雀根高、中劑量組關(guān)節(jié)炎評分明顯低于模型組;º大鼠造模后6、10d,金雀根高、中劑量組關(guān)節(jié)腫脹度小于模型組;»金雀根高、中劑量組的大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變明

4、顯較輕,與模型組相比差異顯著。結(jié)論:金雀根可降低踝關(guān)節(jié)組織病理改變,降低關(guān)節(jié)炎評分;抑制SD大鼠足爪腫脹,減少關(guān)節(jié)炎發(fā)生率。具有良好的抗炎、免疫調(diào)節(jié)作用。中圖分類號:R285.6 文獻標識碼:A 文章編號:100121528(2009)10215082042*2222類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA),是一種以關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍組織的非感染性炎癥為主的全身性疾病,如累及其他臟器,可引起心包炎、心肌炎、胸膜炎、間質(zhì)性肺炎、腎淀粉樣變以及眼部疾患(如鞏膜炎、虹膜炎),還可并發(fā)血管炎以及末梢神經(jīng)損害等。根據(jù)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床表現(xiàn),以肢體關(guān)節(jié)疼痛為主癥,當(dāng)屬中醫(yī)痹證范疇,歷代醫(yī)學(xué)家稱之為歷節(jié)、鶴膝風(fēng)、頑痹、筋痹、骨

5、痹、腎痹等。5中醫(yī)病證診斷療效標準6則將本病已定病名為/骨痹0、/尪痹0。并通過臨床和實驗研究進一步發(fā)現(xiàn)腎虛是其發(fā)病的根本原因,治療上要重視補益肝腎以治收稿日期:20082092181其本,同時祛風(fēng)散寒,活血通絡(luò)以治其標。研究建立關(guān)節(jié)炎鼠動物模型,選擇雷公藤多苷片為對照,觀察金雀根抗炎免疫等方面的作用,在公認的中藥藥理學(xué)實驗基礎(chǔ)上進行科學(xué)研究,為開發(fā)治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎確有療效的方藥打下良好的基礎(chǔ)。1 實驗材料1.1 藥品與試劑金雀根浸膏,每10g浸膏相當(dāng)于8g生藥,由南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院實驗中心制備提供,批號:20070401;卡介苗(BCG),上海生物制品研究作者簡介:喬麗君(1972

6、-),女,副主任醫(yī)師,碩士,主要從事風(fēng)濕免疫及重癥監(jiān)護方面的研究。Te:l(025)85104314E2mai:lqq04716291981*通訊作者:汪 悅,教授。Te:l(025)8679800515082009年10月第31卷 第10期中成藥ChineseTraditionalPatentMedicineOctober2009Vo.l31 No.10所,批號:20060402;液體石蠟,南京化學(xué)試劑廠,批號:20040112;甲醛,南京化學(xué)試劑廠,批號:2005045;雷公藤多苷片,三九黃石制藥廠,批號:20040512。1.2 實驗動物SD大鼠,由上海斯萊克實驗動物責(zé)任有限公司提供,生

7、產(chǎn)許可證:SCXK(滬)200320003;南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心,實驗動物使用許可證:SCXK(蘇)200220123。1.3 實驗儀器CTM22型倒置顯微鏡,日本Oympus;YLS27B型大鼠趾體積測量儀,山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站。2 實驗方法2.1 佐劑性關(guān)節(jié)炎模型建立2.1.1 弗氏完全佐劑(FCA)制備 BCG于80e水浴滅活1h,用滅菌液體石蠟制成7.5mg/mL的乳劑,得FCA。2.1.2 佐劑性關(guān)節(jié)炎模型復(fù)制 造模及給藥方法2模型構(gòu)建方法參閱文獻:除空白組外,取健康性SD大鼠50只,用微量注射器于左足跖處注射0.1mL完全Freud佐劑,致炎成佐劑性關(guān)節(jié)炎模型,空白組注射生

8、理鹽水0.1mL。約10d左右,出現(xiàn)繼發(fā)性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎。2.2 佐劑性關(guān)節(jié)評價致炎當(dāng)天為d0,致炎前及后每隔兩天用大鼠足跖體積測量儀測量大鼠左右足跖體積,計算每只大鼠左足=踝體積與右足=踝體積之差,即為關(guān)節(jié)腫脹度。同時稱量大鼠體重,并觀察鼠耳紅斑、尾結(jié)節(jié)出現(xiàn)情況。關(guān)節(jié)炎得分計算:0分為正常;1分為僅限于部分關(guān)節(jié)或腳趾的輕度發(fā)紅或腫脹;2分為趾關(guān)節(jié)和足跖或踝關(guān)節(jié)出現(xiàn)中度腫脹;3分為踝關(guān)節(jié)嚴重腫脹或踝關(guān)節(jié)以下全部腫脹;4分為整個腳爪全部腫脹或關(guān)節(jié)嚴重變形。4個腳爪的評分之和作表1分組正常組模型組金雀根高組金雀根中組金雀根低組雷公藤片組動物數(shù)/只101010101010*為每個小鼠的關(guān)節(jié)炎評分。四肢

9、關(guān)節(jié)炎得分每只合計最高可得16分。2.3 分組及處理動物隨機分為6組,每組10只,即:(1)正常組,給予等容積蒸餾水;(2)模型組,給予等容量蒸餾水;(3)金雀根高劑量組,給予金雀根2.5g生藥/kg;(4)金雀根中劑量組,給予金雀根1.25g生藥/kg;(5)金雀根低劑量組,給予金雀根0.625g生藥/kg;(6)雷公藤多苷片組,給予雷公藤多苷片0.06g/kg。均灌胃給藥,給藥體積為15mL/kg,于造模當(dāng)天開始給藥,連續(xù)給藥28d。2.4 病理組織學(xué)檢查方法處死動物,取其踝關(guān)節(jié)固定于10%福爾馬林內(nèi),脫鈣后常規(guī)石蠟包埋,切片厚45Lm,HE染色,由病理專業(yè)人員閱片,觀察關(guān)節(jié)滑膜被覆上皮有

10、無細胞變性,增生,間質(zhì)有無炎細胞浸潤及肉芽組織形成;關(guān)節(jié)腔有無減小或閉塞,關(guān)節(jié)軟骨有無破壞或纖維化,關(guān)節(jié)周圍皮下組織有無炎細胞浸潤或纖維化,根據(jù)關(guān)節(jié)各部位病變輕重程度,依次定量為/1分(輕度或少量)0,/2分(中度或多量)0,/3分(重度或大量)0,/4分(極重度)0,無病變組織定為/0分0。關(guān)節(jié)周圍皮下組織病變以半量計算。累加所有分數(shù),得出總分,計算出每組每只動物的均分,分值越高提示損傷越嚴重,反之則說明經(jīng)藥物處理后損傷減輕,治療有效。2.5 統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均用x ?s表示,統(tǒng)計采用方差分析,對方差分析有顯著差異者進一步用t檢驗比較組間差異。3 實驗結(jié)果3.1 金雀根對大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎評分

11、的影響 見表1。金雀根對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)評分的影響( x?s)關(guān)節(jié)評分劑量/(g/kg體重)d10-2.51.250.6250.06P<0.01。0.00?0.008.47?1.115.21?0.92*6.08?1.07*7.11?0.88*5.41?0.74*d210.00?0.0013.08?1.56*8.25?1.11*7.18?1.0211.39?1.74*8.25?1.02*d280.00?0.0011.33?1.014.16?0.89*5.36?1.21*7.31?1.33*6.56?0.71*注:與模型組相比*P<0.05,*3.2 金雀根對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)腫

12、脹度的影響 見表2。15092009年10月第31卷 第10期表2動物數(shù)分組模型組 金雀根高劑量組金雀根中劑量組金雀根低劑量組雷公藤多苷片組/只1010101010劑量/(g/kg體重)-2.51.250.6250.06*中成藥ChineseTraditionalPatentMedicine金雀根對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)腫脹度( x?s)d2d6d10d14d18d20d24October2009Vo.l31 No.10d281.20?0.11*1.08?0.121.33?0.10*1.13?0.13*1.37?0.121.19?0.14*1.24?0.14*1.32?0.09*1.21?0.1

13、01.27?0.111.16?0.12*1.27?0.121.22?0.121.17?0.08*1.16?0.12*1.06?0.091.12?0.101.07?0.091.09?0.131.12?0.081.07?0.041.02?0.110.96?0.050.89?0.111.03?0.091.00?0.091.08?0.101.14?0.12*1.14?0.12*1.22?0.081.25?0.12*1.07?0.111.13?0.081.06?0.10*1.22?0.09*1.16?0.091.27?0.10*1.23?0.10*1.10?0.09*1.21?0.09注:與模型組比較,

14、*P<0.05,*P<0.01。3.3 金雀根對大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變到多量炎細胞浸潤,炎細胞以類上皮細胞為主,形成3.3.1 正常組 關(guān)節(jié)表面被覆薄層透明軟骨,細胞排列整齊、關(guān)節(jié)面光滑,軟骨內(nèi)無血管和神經(jīng)。關(guān)節(jié)囊由結(jié)締組織構(gòu)成,囊腔光滑,表面覆有14層滑膜細胞。軟骨下為骨組織,由編織骨組成。關(guān)節(jié)周圍由肌腱橫紋肌結(jié)締組織組成,表面被有復(fù)層鱗狀上皮。1只關(guān)節(jié)滑膜有輕度充血,滑膜細胞有輕度變性,其余只各部位組織結(jié)構(gòu)正常,未查見明顯病理變化。3.3.2 模型組 關(guān)節(jié)滑膜:滑膜細胞有輕度到中度變性、中度增生,呈短絨毛狀或指突狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)?；び猩倭康蕉嗔垦准毎櫋⒉⒂猩倭康蕉嗔咳庋拷M織

15、形成。關(guān)節(jié)腔:腔內(nèi)未見炎性滲出物,但8只關(guān)節(jié)軟骨有中度到重度破壞、表面有纖維結(jié)締組織增生,5只纖維結(jié)締組織增生明顯,導(dǎo)致關(guān)節(jié)腔消失。周圍軟組織炎癥反應(yīng):中度到重度炎細胞浸潤,炎細胞以類上皮細胞為主,并形成風(fēng)濕結(jié)節(jié)樣病變,5只尚有中性粒細胞呈灶性集聚,形成局部小膿腫。3.3.3 金雀根高劑量組 關(guān)節(jié)滑膜:細胞輕度變性5只(5只/10只),6只滑膜細胞均有增生,輕度的表現(xiàn)為滑膜細胞層次增多,中度或重度增生時呈絨毛狀或指突狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。此外5只滑膜有少量炎細胞浸潤、其中2只有少量肉芽組織形成。關(guān)節(jié)腔:腔內(nèi)未見炎性滲出物,但3只關(guān)節(jié)軟骨有輕度到極重度破壞,表面有纖維結(jié)締組織增生,其中2只,增生的纖維

16、結(jié)締組織使相鄰兩個關(guān)節(jié)面黏連,導(dǎo)致關(guān)節(jié)腔消失。周圍軟組織炎癥反應(yīng):中度到重度炎細胞浸潤,炎細胞以類上皮細胞為主,并形成風(fēng)濕結(jié)節(jié)樣病變,外周有淋巴細胞浸潤。3.3.4 金雀根中劑量組 關(guān)節(jié)滑膜:細胞輕度變性6只(6只/10只),滑膜細胞輕度增生4只(4只/10只),滑膜有少量炎細胞浸潤3只(3只/10只)、其中2只有少量肉芽組織形成。關(guān)節(jié)腔:腔內(nèi)未見炎性滲出物,但1只關(guān)節(jié)軟骨有中度變性壞死,表面有纖維結(jié)締組織增生。周圍軟組織炎癥反應(yīng):有少量1510風(fēng)濕結(jié)節(jié)樣病變,外周有淋巴細胞浸潤。3.3.5 金雀根低劑量組 關(guān)節(jié)滑膜:細胞輕度到重度變性5只(5只/10只),滑膜細胞均有中度和重度增生,呈長短不

17、一的絨毛狀或指突狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。此外3只滑膜有少量到大量炎細胞浸潤,其中5只有少量肉芽組織形成,外周有淋巴細胞浸潤。關(guān)節(jié)腔:腔內(nèi)未見炎性滲出物,但3只關(guān)節(jié)軟骨有中度到重度破壞,表面有纖維結(jié)締組織增生。周圍軟組織炎癥反應(yīng):10只均有中度到重度炎細胞浸潤,炎細胞以類上皮細胞為主,并形成風(fēng)濕結(jié)節(jié)樣病變,2只尚有中性粒細胞呈灶性集聚,形成局部小膿腫。3.3.6 雷公藤多苷片組 關(guān)節(jié)滑膜:細胞輕度到中度變性5只,7只滑膜細胞均有中度增生,呈較短絨毛狀或指突狀伸入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。此外2只滑膜有少量到大量炎細胞浸潤,其中2只有少量肉芽組織形成。關(guān)節(jié)腔:腔內(nèi)未見炎性滲出物,但1只關(guān)節(jié)局部表面有輕度纖維結(jié)締組織增生。

18、周圍軟組織炎癥反應(yīng):病變不明顯。3.4 各組佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變輕重程度的比較 見表3。表3金雀根對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)病變輕重程度評分結(jié)果( x?s)組別動物數(shù)/只劑量/(g/kg)病變評分正常組 10-0.00?0.00模型組 10-13.56?1.04金雀根高劑量組102.56.41?1.32*金雀根中劑量組101.255.25?1.45*金雀根低劑量組100.62511.23?2.24雷公藤多苷片組100.067.56?1.09*注:與模型組比較,*P<0.01。3.5 結(jié)果對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的影響的實驗結(jié)果顯示:¹各給藥組動物關(guān)節(jié)炎評分均低于模型組。金雀

19、根高、中劑量組關(guān)節(jié)炎評分明顯低于模型組,金雀根三個劑量組和雷公藤多苷片組關(guān)節(jié)炎評分與模型組相比較,有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。表2009年10月第31卷 第10期中成藥ChineseTraditionalPatentMedicineOctober2009Vo.l31 No.10明金雀根對關(guān)節(jié)炎癥有抑制作用,且能減少繼發(fā)足的關(guān)節(jié)炎發(fā)生率。º同日內(nèi)測定大鼠左足(造模足)足=踝體積,結(jié)果表明,金雀根高、中、低劑量組,雷公藤多苷片左足體積均小于模型組左足體積,與模型組相比,有顯著性差異。金雀根高、中、低劑量組足跖體積均小于模型組,兩者相比差異顯著,表明金雀根有抑制

20、大鼠關(guān)節(jié)腫脹的作用。»大鼠造模后第6、10天,金雀根高、中劑量組關(guān)節(jié)腫脹度均小于模型組,與模型組相比,有顯著性差異,表明金雀根對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)腫脹有一定的抑制作床上因諸邪所偏重,治療也有所偏重。另外,/久病入絡(luò)0/痹久必瘀0,須注意活血化瘀通絡(luò)。金雀根Caraganasinica(Bucchoz)Rehd.3屬植物錦雞兒根皮,生于山坡上,岸邊草地、沙丘地與干燥坡地,廣泛分布于東北、內(nèi)蒙古、山西、陜西等地。味甘微辛,性平,歸肺、脾、腎經(jīng),功能具有4健脾補肝益腎、祛風(fēng)活血、止痛通脈、清肺補氣的功效。在5本草綱目拾遺6:/治跌打損傷,咳嗽,暖筋骨,和血去風(fēng),兼通血脈,消結(jié)毒0,主治風(fēng)

21、濕久痹,筋骨酸痛及半身不遂,虛損勞熱等,配合五加皮、木瓜、桑葉用。¼金雀根高、中劑量組和雷公藤多苷片組的大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變均有明顯減輕,與模型組相比有顯著差異(P<0.05或P<0.01),金雀根高、中劑量組的大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理改變明顯較輕,與模型組相比差異顯著,與正常組相比,模型組病變最重。由此可見,金雀根可明顯減輕佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹程度、踝關(guān)節(jié)組織病理改變,降低關(guān)節(jié)炎評分。4 討論類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎主要病變在關(guān)節(jié)、筋骨,病因病機多為肝腎虧虛、正氣不足,風(fēng)寒濕熱之邪侵襲,阻滯經(jīng)絡(luò),氣血運行不暢,久而為痹。5內(nèi)經(jīng)6中記載:/風(fēng)寒濕三氣雜至合而為痹0。多病程纏綿,久成頑痹,常出現(xiàn)以下變化:¹風(fēng)寒濕痹或熱痹日久不愈,氣血運行不暢日甚,瘀血痰濁阻痹經(jīng)絡(luò)。º病久使氣血耗傷,亦可出現(xiàn)不同程度的氣血虧虛和肝腎不足的證候;»痹癥日久不愈,復(fù)感于邪,病邪由經(jīng)絡(luò)而累及臟腑。臨床主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)、肌膚、筋骨麻木、腫脹、疼痛、重著、屈伸不利,甚至僵直、畸形、活動障礙。在治療RA時要注意以下兩個方面:¹強調(diào)內(nèi)因,扶正固本是根本,RA日久纏綿成為久痹、頑痹表現(xiàn)為遍身關(guān)節(jié)隱隱作痛,四肢麻