植物單寧的含量測(cè)定方法

1、.植物單寧的含量測(cè)定方法1 植物單寧單寧（ Tannins ）又稱單寧酸、鞣質(zhì) 、鞣酸 。按Bategnt的定義，指相對(duì)分子質(zhì)量為5003000 的能沉淀蛋白質(zhì)、生物堿的水溶性多酚化合物。主要應(yīng)用于 1醫(yī)藥 、食品 、制革 、日用化學(xué)品 、水處理等領(lǐng)域。單寧在傳統(tǒng)醫(yī)藥上內(nèi)服可治胃腸道出血和止痢，外用于局部止血和創(chuàng)面保護(hù)防止感染發(fā)炎；近年研究發(fā)現(xiàn)單寧還具有抑菌抗病毒、抗過(guò)敏、抗氧化和延緩衰老、預(yù)防心血管疾病、抗腫瘤和促進(jìn)免疫等作用。單寧在食品行業(yè)中可作為功能性成分用于制作保健品，生產(chǎn)食品添加劑、風(fēng)味劑等；在化妝品中主要起收斂、防曬、美白、抗皺、保濕、防腐等作用；在制革工業(yè)中，單寧是栲膠的主要成分

2、。2 單寧的含量測(cè)定經(jīng)典的有皮粉法、干酪素法、氧化滴定法、分光光度法等；現(xiàn)階段涌現(xiàn)出許多新型的測(cè)定方法，如高效液相色譜法、流動(dòng)注射分析法、原子分光光度法等。2.1經(jīng)典測(cè)定方法2.1.1皮粉法皮粉法是國(guó)際上公認(rèn)的單寧含量測(cè)定方法，從20 世紀(jì) 60年代至今，原蘇聯(lián) 、日本 、印度和中國(guó)都采用此法作為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法。皮粉的主要成分是蛋白質(zhì)，單寧是多元酚類，分子中的酚羥基與蛋白質(zhì)的酰胺鍵以氫鍵結(jié)合形成不溶于水的沉淀，以此使單寧沉淀下來(lái)，用重量法測(cè)定其含量 。根據(jù)皮粉與單寧溶液接觸方式不同，可將其分為震蕩法和過(guò)濾法。震蕩法是皮粉與單寧溶液一起震蕩來(lái)脫去溶液中的單寧；過(guò)濾法是將單寧溶液流過(guò)皮粉柱層以脫

3、去單寧。 通常， 過(guò)濾法所測(cè)的單寧含量比震蕩法高5% 7%。皮粉法所測(cè)的是單寧的絕對(duì)含量，并且不需要標(biāo)樣，操作簡(jiǎn)單，可用其測(cè)定中藥水提液中鞣質(zhì)的含量2 。但皮粉法的缺點(diǎn)是，用重量法測(cè)定樣品時(shí)，須經(jīng)過(guò)過(guò)濾、干燥、稱重，樣品耗用量大，測(cè)定時(shí)間較長(zhǎng)，一般樣品分析需 20 h 左右，不適合大批量樣品的快速測(cè)定；沒(méi)有選擇性，對(duì)低相對(duì)分子質(zhì)量的多酚也具有一定的吸附能力，往往使測(cè)定結(jié)果偏高； 適用于單寧含量高的樣品，不適合低含量和微量測(cè)定； 另外皮粉試劑的供應(yīng)和質(zhì)量都較難保證。針對(duì)以上缺點(diǎn)， 現(xiàn)在大多采用皮粉 - 分光光度法 3 、磷鉬鎢酸- 皮粉比色法4等，具有操作簡(jiǎn)單、快速、精密度高的優(yōu)點(diǎn)。2.1.2

4、干酪素法干酪素的主要成分是酪蛋白， 為含磷蛋白。 利用其能選擇性地結(jié)合具有生理活性的鞣質(zhì)，從而測(cè)定具有療效鞣質(zhì)的含量。干酪素法一般與分光光度法結(jié)合，鞣質(zhì)在一定的pH條件下與 Folin 試劑反應(yīng)，并且鞣質(zhì)含量與吸光度成正比。很多人利用干酪素法測(cè)定了金櫻子、側(cè)伯葉、大黃、旋覆花 5- 8等藥材中單寧的含量，此法樣品取量少、簡(jiǎn)單、靈敏、快速、準(zhǔn)確，可作為檢測(cè)植物藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可靠分析手段。2.1.3 膠體滴定法膠體滴定法， 又稱聚電解質(zhì)滴定法，是利用一些電荷密度已知且性能比較穩(wěn)定的陰、陽(yáng)離子.聚電解質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)被測(cè)試樣進(jìn)行電荷測(cè)量的一種滴定方法9。1948年日本學(xué)者寺山宏提出后， 經(jīng)眾多研究

5、者的不斷改進(jìn)，已成為最簡(jiǎn)單的定量分析聚電解質(zhì)的方法10- 11 ，并且在制革、水處理、造紙、食品等行業(yè)得到了廣泛的應(yīng)用12- 13。單寧溶液在一定的條件下呈膠體狀態(tài)，膠粒帶負(fù)電荷14 。膠體滴定的具體做法是15 ，于浸提的栲膠溶液中加入過(guò)量的 PD（聚二甲基二烯丙基氯化銨）標(biāo)準(zhǔn)溶液， 以 TB（甲苯胺蘭指示劑） 為指示劑，用 PVSK （聚乙烯醇硫酸鉀）滴定過(guò)剩的PD。 TB 指示劑帶有正電荷，與PD 不反應(yīng)，最初呈現(xiàn)藍(lán)綠色。隨著滴定的進(jìn)行，過(guò)剩的PD 會(huì)與 PVSK 形成聚離子復(fù)合物，此時(shí)再滴入的 PVSK 與指示劑反應(yīng)， 產(chǎn)生異染現(xiàn)象， 試樣溶液立即變?yōu)榧t紫色，指示滴定到達(dá)終點(diǎn)。 龐燕等

6、16 利用膠體滴定法測(cè)定木麻黃樹(shù)皮中的單寧，得出了在pH 為 7時(shí)木麻黃溶液的膠體滴定值與所含單寧含量的線性關(guān)系，相關(guān)性良好， 可以據(jù)此來(lái)計(jì)算未知濃度的木麻黃提取液中單寧的含量。戴麗君等 17 以膠體滴定法和皮粉法分別測(cè)定了橡碗栲膠中單寧含量，兩者對(duì)比發(fā)現(xiàn)， 膠體滴定法測(cè)得的單寧含量值均小于皮粉法的測(cè)定值，但是差值不大， 究其原因，可能是由于滴定終點(diǎn)的判斷、溫差等原因引起的 。2.1.4 絡(luò)合滴定法絡(luò)合滴定法是以絡(luò)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的容量分析方法， 又稱螯合滴定法。 單寧分子中含有多個(gè)酚羥基可以與一個(gè)中心離子，如銅、鋅、鉍、鐵、汞等進(jìn)行絡(luò)合，形成多核絡(luò)合物，在一定的pH 條件下沉淀，再通過(guò)EDTA

7、反滴定過(guò)量金屬離子來(lái)確定單寧的含量。絡(luò)合法所使用的指示劑一般為金屬指示劑，指示終點(diǎn)到達(dá)時(shí)要求具有較深的顏色，如鉻黑T。利用Zn2+ 只與單寧反應(yīng)的特性來(lái)沉淀分析溶液中的塔拉單寧，以鉻黑T 作指示劑，用EDTA 溶液滴定剩余的Zn2+，結(jié)果顯示塔拉中單寧的質(zhì)量百分含量為57.3%，比皮粉法測(cè)定的結(jié)果要精確18 。劉佳銘 19 用 Pb2+與單寧絡(luò)合，以K2CrO4 為指示劑， PAM（陽(yáng)離子型聚丙烯酰胺）為終點(diǎn)增敏劑，測(cè)定了黑荊樹(shù)栲膠中單寧的含量，較之皮粉法快速、 準(zhǔn)確。還有人研究了綠茶20 、橡子 21 和三葉委陵菜22 中單寧的絡(luò)合滴定，眾多研究表明絡(luò)合滴定法簡(jiǎn)單、快速、誤差小，并且避免了沉

8、淀轉(zhuǎn)移及洗滌的繁瑣程序，還可省略空白對(duì)照，對(duì)酚類物質(zhì)的選擇性比較好，蛋白質(zhì)和抗壞血酸均不影響測(cè)定。但是金屬離子與酚類物質(zhì)的反應(yīng)與酚的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系，并且靈敏度較差，不適宜酚組分復(fù)雜的樣品。2.1.5 氧化滴定法氧化還原滴定法是以氧化劑或還原劑為滴定劑，直接滴定一些具有還原性或氧化性的物質(zhì)；或者間接滴定一些本身沒(méi)有氧化還原性，但能與某些氧化劑或還原劑起反應(yīng)的物質(zhì)。單寧是多酚類的化合物，具有很好的還原性，在常溫酸性溶液中可被高錳酸鉀氧化，由此可得到單寧的含量。用此法測(cè)定二白圓、二梭子兩種青果果實(shí)中的總鞣質(zhì)含量23表明，滴定終點(diǎn)不易觀察，須多次平行試驗(yàn)，取平均值。2.1.6 Stiasny法Stia

9、sny法也稱甲醛縮合法，是利用單寧與甲醛- 鹽酸共沸時(shí)，單寧與甲醛縮聚，基本上全部沉淀下來(lái)。其反應(yīng)方程如圖1。.單寧與甲醛所產(chǎn)生的沉淀物質(zhì)量占樣品總質(zhì)量的百分率，稱為甲醛值 （或稱 Stiasny值）。在規(guī)定的測(cè)定條件下，用甲醛縮合的沉淀物質(zhì)量與試樣的質(zhì)量及不溶物含量之間的數(shù)量關(guān)系計(jì)算得出被測(cè)試樣中單寧的含量。國(guó)內(nèi)有采用甲醛縮合法測(cè)定落葉松樹(shù)皮、黑荊樹(shù)栲膠 24- 26 中的單寧含量，具有簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，是一種值得推廣的縮合單寧含量的測(cè)定方法。2.1.7分光光度法分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，以此對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。分光光度法的應(yīng)用光區(qū)

10、包括紫外光區(qū)、可見(jiàn)光區(qū)、紅外光區(qū)，其中常用的是紫外光區(qū)和可見(jiàn)光區(qū)，兩者的波長(zhǎng)范圍分別為200 400 nm 和 400 760 nm分光光度法的基本原理是朗伯-比爾定律，即當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)含有吸光物質(zhì)的稀溶液時(shí)，溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度、液層厚度乘積成正比。定量分析時(shí)，首先需要測(cè)定溶液對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收情況， 從中確定出最大波長(zhǎng)， 然后以此波長(zhǎng)為光源， 測(cè)定一系列已知濃度 c 溶液的吸光度 A ，做出 A- c 工作曲線。分析未知溶液時(shí)，根據(jù)測(cè)量的吸光度，對(duì)應(yīng)工作曲線即可確定出相應(yīng)的濃度。在眾多單寧含量的測(cè)定方法中，分光光度法的應(yīng)用最為廣泛。常用的顯色劑有鄰二氮菲- 鐵（）、香草醛、正

11、丁醇 -鹽酸、 Folin- Denis試劑 、 Folin- Ciocalteu試劑、鐵氰化鉀（普魯士藍(lán)法）、磷鉬酸 -鎢酸鈉、檸檬酸鐵銨等27- 31 。其中 Folin-酚法和普魯士藍(lán)法測(cè)定的是總酚含量；香草醛法選擇性測(cè)定A環(huán)為間苯三酚的黃烷醇，但不能區(qū)別單體和聚合體；正丁醇- 鹽酸測(cè)定的是聚原花色素（縮合單寧） 的含量。 武予清等 32通過(guò) Folin 酚還原法、 正丁醇 - 鹽酸法和香草醛法測(cè)定棉花組織中單寧的含量，比較表明Folin 酚法測(cè)定的單寧含量值顯著高于正丁醇- 鹽酸法，原因可能是此法測(cè)定出的是相對(duì)總酚含量；而香草醛法的測(cè)定結(jié)果與正丁醇-鹽酸法差異不大，可以用于棉花中縮合單

12、寧的含量測(cè)定。2.1.8 比色法比色法是通過(guò)比較或者測(cè)量有色物質(zhì)溶液顏色深度來(lái)確定待測(cè)組分含量的方法。其作為一種定量分析方法，大約開(kāi)始于19 世紀(jì) 30 40年代。常用的比色法有兩種：目視比色法和光電比色法， 都是以朗伯 -比爾定律為基礎(chǔ)的。在20 世紀(jì)30 60年代，是比色分析發(fā)展的繁盛時(shí)期，它廣泛的應(yīng)用于冶金、地質(zhì)、金屬材料中微量的金屬和部分非金屬元素的測(cè)定。但隨著光學(xué)儀器制造技術(shù)的發(fā)展，分光光度法逐漸代替了比色法。2.2現(xiàn)代測(cè)定方法2.1.1高效液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）又稱高壓液相色譜、近代柱色譜，是以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸.液系統(tǒng)， 將具有不同極性的單一溶劑或不同比例混合

13、的溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、 醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。1906 年俄國(guó)植物化學(xué)家茨維特（Tswett ）首次提出“色譜法”和“色譜圖”的概念。1960年中后期，液相色譜開(kāi)始活躍，到60年代末把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出 現(xiàn) 了 HPLC； 1990 年以后，生物工程和生命科學(xué)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，促進(jìn)了它的迅速發(fā)展。高效液相色譜中的固定相可以是液體、吸附劑、離子交換劑、離子交換樹(shù)脂、凝膠

14、，固定相的不同，分離原理也有差異。較常用的是液- 液分配色譜法，即流動(dòng)相和固定相都是液體，并且互不相溶，有一個(gè)明顯的分界面。 其又包括正相液-液分配色譜法即流動(dòng)相的極性小于固定相、反相液 - 液分配色譜法即流動(dòng)相的極性大于固定相。在液 -液分配色譜中盡管流動(dòng)相與固定相的極性要求完全不同，但固定液仍不可避免的在流動(dòng)相中有微量的溶解；并且流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊力，會(huì)造成固定液的流失。20 世紀(jì) 70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相可以克服上述的缺點(diǎn)，現(xiàn)在應(yīng)用很廣泛。 郭佳莉等 33 采用 Hypersil ODS（ 125× 4.0mm，5 m） 色譜柱；檢測(cè)波長(zhǎng) 275 nm；流動(dòng)相為

15、80%甲醇和 20%水；流速為 0.5mL· min- 1測(cè)定余甘子中單寧酸的含量，相關(guān)系數(shù)達(dá)99.996% 以上， 充分顯示了該法快速、方便、精確可靠的優(yōu)點(diǎn)。2.2.2 流動(dòng)注射法流動(dòng)注射分析法（ FIA）是丹麥科學(xué)家于1974年創(chuàng)立的一項(xiàng)溶液自動(dòng)在線處理及測(cè)定的現(xiàn)代分析技術(shù)。 1988 年 Ruzicka 等對(duì)流動(dòng)注射分析作了定義：向流路中注入一個(gè)明確的流體帶， 在連續(xù)非隔離載流中分散而形成濃度梯度，從此濃度梯度中獲得信息的技術(shù)。流動(dòng)注射分析法是利用具有流速的試劑流的容量測(cè)定，即用聚四氟乙烯管代替燒杯和容量瓶，通過(guò)流動(dòng)注射進(jìn)行分析的方法。用恒流量泵使檢測(cè)試劑流過(guò)內(nèi)徑為0.5 1

16、mm 的聚四氟乙烯管，在中途有注入部件（旋轉(zhuǎn)閥）注入微升量試樣，使其在混合圈中反應(yīng)。檢測(cè)器通常是采用裝有流通池的分光光度計(jì)、熒光光度計(jì)、原子吸收分光光度計(jì)和離子計(jì)等。李淮芬等34基于在甲醛存在的酸性介質(zhì)中，高錳酸鉀氧化單寧酸產(chǎn)生較強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，結(jié)合流動(dòng)注射技術(shù)， 測(cè)定了幾種啤酒中微量的單寧酸含量。趙川等 35 使用經(jīng)陽(yáng)極化處理的雙鉑電極，通過(guò)偶合單寧在一支電極上的催化氧化和氧化鉑在另一支電極上的還原兩個(gè)不可逆電極過(guò)程，建立了不可逆電對(duì)的流動(dòng)注射雙安培法快速檢測(cè)綠茶、花茶等中的單寧含量的新方法。流動(dòng)注射法還可與化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)法、動(dòng)力學(xué)光度法等方法結(jié)合36- 37 ，對(duì)被測(cè)試樣的單寧含量進(jìn)行測(cè)定

17、，具有較好的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。流動(dòng)注射法的測(cè)量是在動(dòng)態(tài)條件下進(jìn)行，反應(yīng)條件和分析操作能自動(dòng)保持一致，結(jié)果重現(xiàn)性好； 分析速度快， 特別適合于大批量樣品分析；并且易于實(shí)現(xiàn)連續(xù)自動(dòng)分析，使某些難以或無(wú)法實(shí)現(xiàn)的手工操作成為可能，將有良好的發(fā)展前景 。2.2.3 薄層掃描法層掃描法（ TLCS ）是指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中有紫外或可見(jiàn)吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描的圖譜及積分值用于藥品的質(zhì)量檢驗(yàn)方法 。蔡毓瓊等 38 使用島津 CS- 930雙波長(zhǎng)薄層掃描儀， 建立了余甘子喉片中沒(méi)食子酸含量的測(cè)定方法 。該法簡(jiǎn)便 、快速，穩(wěn)定，并且不須任何顯色劑， 加熱即呈現(xiàn)

18、穩(wěn)定的黃褐色斑點(diǎn)，大大提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性 。2.2.4 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法（ AAS ）是基于蒸汽相中待測(cè)元素的基態(tài)原子對(duì)其共振輻射的吸收強(qiáng)度來(lái)測(cè)定試樣中該元素含量的一種儀器分析方法。主要應(yīng)用于測(cè)量痕量和超痕量元素。張穎等.39 建立了火焰原子吸收法測(cè)土茯苓中單寧的含量，單寧與醋酸銨溶液中的銅離子產(chǎn)生沉淀，離心后通過(guò)測(cè)定剩余銅離子和未加入單寧前銅離子的吸光度，兩者之差在一定的范圍內(nèi)與單寧濃度呈線性關(guān)系，由此得出單寧含量。此法靈敏度高 、干擾較少 、選擇性好，可使整個(gè)操作自動(dòng)化，應(yīng)用日益廣泛。2.2.5 其他熒光分析法是利用某些物質(zhì)被紫外光照射后所發(fā)射的能反映該物質(zhì)特性

19、的熒光，可以進(jìn)行定性或定量分析的方法。它作為一種高靈敏的檢測(cè)方法很少用于單寧含量的測(cè)定。馮素玲等40 基于單寧活化 Cu （）催化過(guò)氧化氫氧化吡咯紅Y ，使體系熒光猝滅，將熒光分析法與動(dòng)力學(xué)結(jié)合起來(lái)測(cè)定茶葉中的痕量單寧。Claderaforteza等 41 用熱透鏡光譜法測(cè)定了白葡萄酒中的痕量單寧，檢測(cè)限達(dá)到了5 g/L 。丁亞平等利用KBrO3 和 KBr的氧化還原反應(yīng)與茶單寧的溴代反應(yīng)的速度差異，采用高靈敏示波電位動(dòng)力學(xué)分析法測(cè)定了痕量的茶單寧。MelloLD 等 42 用生物傳感器測(cè)定了蔬菜中的多酚含量。有報(bào)道稱可用濁度光度法測(cè)定液體，特別是飲料（如啤酒、酒和果汁）中的單寧和類單寧化合物

20、。3 展望我國(guó)植物資源豐富，開(kāi)發(fā)利用植物鞣質(zhì)具有廣闊的發(fā)展前景。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)鞣質(zhì)的研究相對(duì)較少，仍然處于初級(jí)階段， 應(yīng)用領(lǐng)域也比較局限。單寧的經(jīng)典測(cè)定方法大多數(shù)比較冗繁、精確度低；而現(xiàn)代測(cè)定方法中儀器價(jià)格昂貴，不適合大范圍推廣應(yīng)用，因此探尋一種經(jīng)濟(jì)、精確的單寧測(cè)定方法是當(dāng)務(wù)之急。參考文獻(xiàn)：1 但衛(wèi)華，程鳳俠 .制革化學(xué)及工藝學(xué) M. 北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社， 2006. 2 董潔，郭立瑋，文紅梅，等 .中藥水提液中鞣質(zhì)含量測(cè)定方法研究 J. 江蘇中醫(yī)藥， 2008 ， 40 （11）： 89-90.3陳紅英，林南英，謝金倫.塔拉粉中單寧含量的測(cè)定J.云南化工， 2006 ，33（ 1）：44-

21、45. 4 王坤，魯靜 .中藥材中鞣質(zhì)含量測(cè)定方 法的研究 J. 中國(guó)藥事， 2004 ，18 （6）：361-364.5 李志猛， 李向日 .干酪素法測(cè)定不同產(chǎn)地金櫻子中鞣質(zhì)類成分的研究J. 中華中醫(yī)藥雜志， 2009 ，24 （2）：230-232.6程立方，田櫻 .干酪素法測(cè)定側(cè)伯葉中鞣質(zhì)含量J. 時(shí)珍國(guó)藥研究， 1995 ，6 （ 3）： 13-14.7 戴萬(wàn)生，趙榮華陳紅波 . 干酪素法測(cè)定大黃鞣質(zhì)類成分的研究J. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2003，14（ 6）：324-325.21 王天元，侯穎，趙全. 橡子中單寧含量相色譜法測(cè)定余甘子中單寧酸的含8 萬(wàn)祺，龍凌云，裴月湖，等 . 旋覆花中

22、鞣 的快速測(cè)定 J. 化學(xué)工程師， 1996 ， 52量 J. 光譜實(shí)驗(yàn)室， 2007， 24（ 5）：911-質(zhì)的含量測(cè)定 J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，（1）： 17-19.913.2007 ，18（ 11）： 2758-2759. 22邊可君，王滿輝，黃開(kāi)勛，等. 絡(luò)合量34 李淮芬，劉傳芳 . 流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光.9 陳玉蕉，何北海. 膠體滴定方法及其研法測(cè)定三葉委陵菜鞣質(zhì)含量J.中國(guó)法測(cè)定啤酒中的單寧酸J.皖西學(xué)院究進(jìn)展 J.造紙化學(xué)品， 2000（ 1）： 13-藥師， 2001， 4（4）： 269-270.學(xué) 報(bào) ，2005， 21（5）： 19-21.16.23 諶立巍，陳思敏，吳小唯，等

23、. 兩種青35 趙川，張君才，宋俊峰. 流動(dòng)注射雙安10 陳夫山，謝來(lái)蘇，魏德津，等. 用膠體果中沒(méi)食子酸和總鞣質(zhì)的含量測(cè)定培法直接測(cè)定茶中單寧J.分析化學(xué)滴定法測(cè)定聚合物的電荷J.中國(guó)造J.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2008， 5： 50-51.研究簡(jiǎn)報(bào)， 2002， 30（2）： 210-213.紙， 2000（ 2）：30-34.24 霍淑賢，卓紅花，黨艷華，等. 甲醛縮36 李世鳳，崔華，孫玉剛，等. 流動(dòng)注射11 李翠珍，胡開(kāi)堂. 聚電解質(zhì)的測(cè)定方合法檢驗(yàn)落葉松樹(shù)皮栲膠單寧含量化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)法測(cè)定單寧酸J.分析法 -膠體滴定法J.湖南造紙，J.林產(chǎn)化工通訊，1999， 33（2）： 34- 化學(xué)研

24、究簡(jiǎn)報(bào)， 2005，29 （ 3）：333 -2001 ，40（ 5）：35-37.35. 335.12 林蕓，陳秉銓 . 膠體滴定法在廢水處25 林云露 . 快速測(cè)定黑荊樹(shù)栲膠單寧含37 曲祥金，周杰，尹鴻宗，等 . 流動(dòng)注射理技術(shù)中的應(yīng)用J.水處理技術(shù)，量方法的研究J.林產(chǎn)化工通訊，動(dòng)力學(xué)光度法測(cè)定啤酒花中的單寧1995 ，21（ 6）：362-365.1996 ，4： 17-19. J.分析化學(xué)研究報(bào)告，2000， 28（ 7）：13 陳浩凡，潘仕榮，胡瑜，等. 膠體滴定26 陳向明，陳河如，李偉彬. 甲醛縮合法 820-824.法測(cè)定羧甲基殼聚糖的取代度J.分快速測(cè)定縮合單寧含量的研究

25、J.廣38蔡毓瓊，王梅 . 薄層掃描測(cè)定余甘子析測(cè)試學(xué)報(bào)，2003， 22（6）： 70-73.東化工， 2006， 7（ 33）： 24-27.喉 片 中沒(méi)食子酸的含量J.藥物分析14 石碧，狄瑩 . 植物多酚 M. 北京：科學(xué) 27 李曉文，嚴(yán)聃，盛燦梅 . 鄰二氮菲 -鐵 雜志， 1997， 17（ 5）： 344-345.出版社， 2000.（）分光光度法測(cè)定茶葉中微量單39 張穎，張立木，楊志孝，等. 原子吸收15 蘇小寶，龐燕，戴麗君，等 . 木麻黃枝 寧 J. 食品與機(jī)械， 2006， 22（2）： 90-光度法間接測(cè)定土茯苓中單寧含量葉中單寧含量的快速測(cè)定J.福建林91. J.

26、中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2006 ，23業(yè)科技， 2007，34（ 1）：79-81.28 李 靜 ， 聶 繼 云 ， 李 海 飛 . 蘋 果 果 實(shí) 單 寧（ 1）：55-57.16 龐燕，劉月蓉，吳宗華，等 . 木麻黃樹(shù) Folin-Denis測(cè)定法 J.中國(guó)果樹(shù)，40 馮素玲，湯俊明，樊靜 . 茶葉中單寧的皮單寧的提取J.福建林業(yè)科技，2006（ 5）：57-59.熒光動(dòng)力學(xué)分析法研究J. 光譜學(xué)與2007 ，34（ 4）：51-54.29 趙曉紅，劉廣平，馬澤芳. 竹子中單寧光 譜 分 析 ，.2003， 23（2）： 322-324.17 戴麗君，蘇小寶，盧玉棟，等.膠體滴含量的測(cè)定及

27、其對(duì)大熊貓采食量的41CladerafortezaA,TomasmasC,定法測(cè)定橡椀栲膠中的單寧含量J.影響J.東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2001， 29Estelaripoll J M, et al. Determination生物質(zhì)化學(xué)工程，2006，40 （ 5）： 15- （2）： 67-71.of tanninsin white winesby thermal-17.30 房江育，馬雪瀧. 影響黑果枸杞縮合lensspectrometryJ.Microchemical18 楊文云，李志國(guó)，吳昊，等 . 絡(luò)合法測(cè) 單寧測(cè)定的因素分析J. 食品科學(xué)，Journal,1995,52(1):28

28、-32.定塔拉單寧含量的研究J.西南林學(xué)2006， 22（8）： 105-107.42LucileneDomelles Mello,MariaDel院學(xué)報(bào)， 1999，19（ 4）：249-252.31 范 璐 ， 霍 權(quán) 恭 ， 周 展 明 ， 等 . 高 粱 中 單Pilar Taboada Sotomayor , Lauro19 劉佳銘 . 絡(luò)合滴定黑荊樹(shù)栲膠中單寧寧含量測(cè)定方法的研究J.中國(guó)糧油TatsuoKubota.HRP-based含量的新方法J.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，學(xué)報(bào)，2001，16 （2 ） ：13-17.amperometricbiosensorfor the1997 ，17

29、（ 3）：63-66.32 武予清，郭予元. 棉花植株中的單寧polyphenolsdeterminationin20 張濤，張少文 . 綠茶提取物的制備及測(cè)定方法研究J.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，vegetablesextractJ.Sensorsand其鞣質(zhì)的含量測(cè)定J.中醫(yī)藥信息，2000， 11（2）： 243-245.ActuatorsB:Chemical,2003,96(3):2001， 18（ 1）： 41-42.33 郭佳莉，李國(guó)清，蔡英卿，等. 高效液634-645.植物單寧的含量測(cè)定方法摘 要：?jiǎn)螌幨嵌喾又懈叨染酆系幕衔?，廣泛存在于自然界中，主要應(yīng)用于日化、食品、醫(yī)藥、制革等領(lǐng)域。簡(jiǎn)

30、要介紹了植物單寧的性質(zhì)、生理活性及應(yīng)用，綜述了單寧含量的經(jīng)典測(cè)定方法以及現(xiàn)代測(cè)定方法，并對(duì)其發(fā)展前景進(jìn)行了展望。關(guān)鍵詞：植物單寧；生理活性；應(yīng)用；含量測(cè)定1 植物單寧單寧（ Tannins ）又稱單寧酸 、鞣質(zhì) 、鞣酸 。按 Bategnt 的定義，指相對(duì)分子質(zhì)量為 5003000 的能沉淀蛋白質(zhì) 、生物堿的水溶性多酚化合物 。它廣泛存在于植物的葉 、果實(shí) 、根及皮等部位，也是樹(shù)木受昆蟲侵襲而生成的蟲癭的主要成分；主要應(yīng)用于1醫(yī)藥 、食品 、制革 、日用化學(xué)品 、水處理等領(lǐng)域。單寧是多酚中高度聚合的化合物，為黃色或棕黃色無(wú)定形松散粉末， 在空氣中顏色逐漸變深， 有較強(qiáng)的吸濕性； 不溶于乙醚 、

31、苯、氯仿，易溶于水 、乙醇 、丙酮，水溶液有澀味 。單寧的化學(xué)成分比較復(fù)雜， 大致分為兩種： 一種是水解類單寧，.是多元酚酸與糖主要以酯鍵形成的化合物，如沒(méi)食子酸單寧和鞣花酸單寧；一種是縮合類單寧， 重要組成成分為黃烷醇及其衍生物，如堅(jiān)木單寧 、荊樹(shù)皮單寧和落葉松單寧。特定分子結(jié)構(gòu)的單寧具有生理活性，能與生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)、多糖 、核酸等發(fā)生作用。單寧對(duì)人體的作用具有雙重性，食物中的單寧過(guò)量會(huì)產(chǎn)生抗?fàn)I養(yǎng)的作用，如降低蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、影響V A 和 Vb12 的有效利用 。單寧在傳統(tǒng)醫(yī)藥上內(nèi)服可治胃腸道出血和止痢，外用于局部止血和創(chuàng)面保護(hù)防止感染發(fā)炎；近年研究發(fā)現(xiàn)單寧還具有抑菌抗病毒、抗過(guò)敏、抗

32、氧化和延緩衰老、預(yù)防心血管疾病、抗腫瘤和促進(jìn)免疫等作用。單寧在食品行業(yè)中可作為功能性成分用于制作保健品，生產(chǎn)食品添加劑、風(fēng)味劑等；在化妝品中主要起收斂、防曬、美白、抗皺、保濕、防腐等作用；在制革工業(yè)中，單寧是栲膠的主要成分。2 單寧的含量測(cè)定近十多年來(lái)， 植物單寧的性質(zhì)和應(yīng)用引起了國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注。隨著研究的不斷深入，迫切需要對(duì)單寧進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量分析。單寧的定量檢測(cè)方法很多，經(jīng)典的有皮粉法、干酪素法、氧化滴定法、分光光度法等；現(xiàn)階段涌現(xiàn)出許多新型的測(cè)定方法，如高效液相色譜法、流動(dòng)注射分析法、原子分光光度法等。2.1經(jīng)典測(cè)定方法2.1.1皮粉法皮粉法是國(guó)際上公認(rèn)的單寧含量測(cè)定方法，從20

33、世紀(jì) 60 年代至今，原蘇聯(lián)、日本 、印度和中國(guó)都采用此法作為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法。皮粉的主要成分是蛋白質(zhì)，單寧是多元酚類，分子中的酚羥基與蛋白質(zhì)的酰胺鍵以氫鍵結(jié)合形成不溶于水的沉淀，以此使單寧沉淀下來(lái)，用重量法測(cè)定其含量 。根據(jù)皮粉與單寧溶液接觸方式不同，可將其分為震蕩法和過(guò)濾法。 震蕩法是皮粉與單寧溶液一起震蕩來(lái)脫去溶液中的單寧；過(guò)濾法是將單寧溶液流過(guò)皮粉柱層以脫去單寧。通常，過(guò)濾法所測(cè)的單寧含量比震蕩法高5%7%。皮粉法所測(cè)的是單寧的絕對(duì)含量，并且不需要標(biāo)樣，操作簡(jiǎn)單，可用其測(cè)定中藥水提液中鞣質(zhì)的含量2 。但皮粉法的缺點(diǎn)是，用重量法測(cè)定樣品時(shí)，須經(jīng)過(guò)過(guò)濾、干燥、稱重，樣品耗用量大，測(cè)定時(shí)間較

34、長(zhǎng)，一般樣品分析需20 h 左右，不適合大批量樣品的快速測(cè)定；沒(méi)有選擇性， 對(duì)低相對(duì)分子質(zhì)量的多酚也具有一定的吸附能力，往往使測(cè)定結(jié)果偏高；適用于單寧含量高的樣品，不適合低含量和微量測(cè)定；另外皮粉試劑的供應(yīng)和質(zhì)量都較難保證。針對(duì)以上缺點(diǎn)，現(xiàn)在大多采用皮粉- 分光光度法3 、磷鉬鎢酸 - 皮粉比色法 4 等，具有操作簡(jiǎn)單、快速、精密度高的優(yōu)點(diǎn)。2.1.2 干酪素法干酪素的主要成分是酪蛋白，為含磷蛋白。 利用其能選擇性地結(jié)合具有生理活性的鞣質(zhì)，從而測(cè)定具有療效鞣質(zhì)的含量。干酪素法一般與分光光度法結(jié)合，鞣質(zhì)在一定的pH 條件下與 Folin 試劑反應(yīng)，并且鞣質(zhì)含量與吸光度成正比。很多人利用干酪素法測(cè)

35、定了金櫻子、側(cè)伯葉、大黃、旋覆花 5- 8等藥材中單寧的含量，此法樣品取量少、簡(jiǎn)單、靈敏、快速、準(zhǔn)確，可作為檢測(cè)植物藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可靠分析手段。2.1.3 膠體滴定法膠體滴定法， 又稱聚電解質(zhì)滴定法，是利用一些電荷密度已知且性能比較穩(wěn)定的陰、陽(yáng)離子聚電解質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)被測(cè)試樣進(jìn)行電荷測(cè)量的一種滴定方法9。1948 年日本學(xué)者寺.山宏提出后， 經(jīng)眾多研究者的不斷改進(jìn)，已成為最簡(jiǎn)單的定量分析聚電解質(zhì)的方法10- 11 ，并且在制革、水處理、造紙、食品等行業(yè)得到了廣泛的應(yīng)用12- 13。單寧溶液在一定的條件下呈膠體狀態(tài)，膠粒帶負(fù)電荷14 。膠體滴定的具體做法是15 ，于浸提的栲膠溶液中加入過(guò)量的

36、 PD（聚二甲基二烯丙基氯化銨）標(biāo)準(zhǔn)溶液， 以 TB（甲苯胺蘭指示劑） 為指示劑，用 PVSK （聚乙烯醇硫酸鉀）滴定過(guò)剩的PD。 TB 指示劑帶有正電荷，與PD 不反應(yīng)，最初呈現(xiàn)藍(lán)綠色。隨著滴定的進(jìn)行，過(guò)剩的PD 會(huì)與 PVSK 形成聚離子復(fù)合物，此時(shí)再滴入的 PVSK 與指示劑反應(yīng)， 產(chǎn)生異染現(xiàn)象， 試樣溶液立即變?yōu)榧t紫色，指示滴定到達(dá)終點(diǎn)。 龐燕等 16 利用膠體滴定法測(cè)定木麻黃樹(shù)皮中的單寧，得出了在pH 為 7時(shí)木麻黃溶液的膠體滴定值與所含單寧含量的線性關(guān)系，相關(guān)性良好， 可以據(jù)此來(lái)計(jì)算未知濃度的木麻黃提取液中單寧的含量。戴麗君等 17 以膠體滴定法和皮粉法分別測(cè)定了橡碗栲膠中單寧含量

37、，兩者對(duì)比發(fā)現(xiàn)， 膠體滴定法測(cè)得的單寧含量值均小于皮粉法的測(cè)定值，但是差值不大， 究其原因，可能是由于滴定終點(diǎn)的判斷、溫差等原因引起的 。2.1.4 絡(luò)合滴定法絡(luò)合滴定法是以絡(luò)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的容量分析方法， 又稱螯合滴定法。 單寧分子中含有多個(gè)酚羥基可以與一個(gè)中心離子，如銅、鋅、鉍、鐵、汞等進(jìn)行絡(luò)合，形成多核絡(luò)合物，在一定的pH 條件下沉淀，再通過(guò)EDTA 反滴定過(guò)量金屬離子來(lái)確定單寧的含量。絡(luò)合法所使用的指示劑一般為金屬指示劑，指示終點(diǎn)到達(dá)時(shí)要求具有較深的顏色，如鉻黑T。利用Zn2+ 只與單寧反應(yīng)的特性來(lái)沉淀分析溶液中的塔拉單寧，以鉻黑T 作指示劑，用EDTA 溶液滴定剩余的Zn2+，結(jié)果顯示

38、塔拉中單寧的質(zhì)量百分含量為57.3%，比皮粉法測(cè)定的結(jié)果要精確18 。劉佳銘 19 用 Pb2+與單寧絡(luò)合，以K2CrO4 為指示劑， PAM（陽(yáng)離子型聚丙烯酰胺）為終點(diǎn)增敏劑，測(cè)定了黑荊樹(shù)栲膠中單寧的含量，較之皮粉法快速、 準(zhǔn)確。還有人研究了綠茶20 、橡子 21 和三葉委陵菜22 中單寧的絡(luò)合滴定，眾多研究表明絡(luò)合滴定法簡(jiǎn)單、快速、誤差小，并且避免了沉淀轉(zhuǎn)移及洗滌的繁瑣程序，還可省略空白對(duì)照，對(duì)酚類物質(zhì)的選擇性比較好，蛋白質(zhì)和抗壞血酸均不影響測(cè)定。但是金屬離子與酚類物質(zhì)的反應(yīng)與酚的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系，并且靈敏度較差，不適宜酚組分復(fù)雜的樣品。2.1.5 氧化滴定法氧化還原滴定法是以氧化劑或還原劑

39、為滴定劑，直接滴定一些具有還原性或氧化性的物質(zhì)；或者間接滴定一些本身沒(méi)有氧化還原性，但能與某些氧化劑或還原劑起反應(yīng)的物質(zhì)。單寧是多酚類的化合物，具有很好的還原性，在常溫酸性溶液中可被高錳酸鉀氧化，由此可得到單寧的含量。用此法測(cè)定二白圓、二梭子兩種青果果實(shí)中的總鞣質(zhì)含量23表明，滴定終點(diǎn)不易觀察，須多次平行試驗(yàn)，取平均值。2.1.6 Stiasny法Stiasny法也稱甲醛縮合法，是利用單寧與甲醛- 鹽酸共沸時(shí)，單寧與甲醛縮聚，基本上全部沉淀下來(lái)。其反應(yīng)方程如圖1。.單寧與甲醛所產(chǎn)生的沉淀物質(zhì)量占樣品總質(zhì)量的百分率，稱為甲醛值 （或稱 Stiasny值）。在規(guī)定的測(cè)定條件下，用甲醛縮合的沉淀物質(zhì)

40、量與試樣的質(zhì)量及不溶物含量之間的數(shù)量關(guān)系計(jì)算得出被測(cè)試樣中單寧的含量。國(guó)內(nèi)有采用甲醛縮合法測(cè)定落葉松樹(shù)皮、黑荊樹(shù)栲膠 24- 26 中的單寧含量，具有簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，是一種值得推廣的縮合單寧含量的測(cè)定方法。2.1.7分光光度法分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，以此對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。分光光度法的應(yīng)用光區(qū)包括紫外光區(qū)、可見(jiàn)光區(qū)、紅外光區(qū)，其中常用的是紫外光區(qū)和可見(jiàn)光區(qū)，兩者的波長(zhǎng)范圍分別為200 400 nm 和 400 760 nm分光光度法的基本原理是朗伯- 比爾定律，即當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)含有吸光物質(zhì)的稀溶液時(shí)，溶液的吸光度與吸光物質(zhì)

41、濃度、液層厚度乘積成正比。定量分析時(shí)，首先需要測(cè)定溶液對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收情況，從中確定出最大波長(zhǎng)，然后以此波長(zhǎng)為光源，測(cè)定一系列已知濃度 c 溶液的吸光度A ，做出 A- c工作曲線。分析未知溶液時(shí)，根據(jù)測(cè)量的吸光度，對(duì)應(yīng)工作曲線即可確定出相應(yīng)的濃度。在眾多單寧含量的測(cè)定方法中， 分光光度法的應(yīng)用最為廣泛。常用的顯色劑有鄰二氮菲- 鐵（）、香草醛、正丁醇 -鹽酸、 Folin- Denis試劑 、 Folin- Ciocalteu試劑、鐵氰化鉀（普魯士藍(lán)法）、磷鉬酸 -鎢酸鈉、檸檬酸鐵銨等27- 31 。其中 Folin-酚法和普魯士藍(lán)法測(cè)定的是總酚含量；香草醛法選擇性測(cè)定A環(huán)為間苯三酚的黃烷

42、醇，但不能區(qū)別單體和聚合體；正丁醇- 鹽酸測(cè)定的是聚原花色素（縮合單寧） 的含量。 武予清等 32通過(guò) Folin 酚還原法、 正丁醇 - 鹽酸法和香草醛法測(cè)定棉花組織中單寧的含量，比較表明Folin酚法測(cè)定的單寧含量值顯著高于正丁醇- 鹽酸法，原因可能是此法測(cè)定出的是相對(duì)總酚含量；而香草醛法的測(cè)定結(jié)果與正丁醇-鹽酸法差異不大，可以用于棉花中縮合單寧的含量測(cè)定。2.1.8 比色法比色法是通過(guò)比較或者測(cè)量有色物質(zhì)溶液顏色深度來(lái)確定待測(cè)組分含量的方法。其作為一種定量分析方法，大約開(kāi)始于19 世紀(jì) 30 40 年代。常用的比色法有兩種：目視比色法和光電比色法， 都是以朗伯 -比爾定律為基礎(chǔ)的。 在

43、20 世紀(jì) 30 60 年代，是比色分析發(fā)展的繁盛時(shí)期， 它廣泛的應(yīng)用于冶金、地質(zhì)、金屬材料中微量的金屬和部分非金屬元素的測(cè)定。但隨著光學(xué)儀器制造技術(shù)的發(fā)展，分光光度法逐漸代替了比色法。2.2現(xiàn)代測(cè)定方法2.1.1高效液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）又稱高壓液相色譜、近代柱色譜，是以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)， 將具有不同極性的單一溶劑或不同比例混合的溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、 醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。1906 年俄國(guó)植物化學(xué)家茨維特（Tswett ）

44、首次提出“色譜法”和“色譜圖”的概念。1960年中后期，液相色譜開(kāi)始活躍，到60 年代末把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用 于 液相 色譜 就出 現(xiàn) 了 HPLC； 1990 年以后，生物工程和生命科學(xué)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，促進(jìn)了它的迅速發(fā)展。高效液相色譜中的固定相可以是液體、吸附劑、離子交換劑、離子交換樹(shù)脂、凝膠，固定相的不同，分.離原理也有差異。較常用的是液- 液分配色譜法，即流動(dòng)相和固定相都是液體，并且互不相溶，有一個(gè)明顯的分界面。 其又包括正相液-液分配色譜法即流動(dòng)相的極性小于固定相、反相液 - 液分配色譜法即流動(dòng)相的極性大于固定相

45、。在液 -液分配色譜中盡管流動(dòng)相與固定相的極性要求完全不同， 但固定液仍不可避免的在流動(dòng)相中有微量的溶解；并且流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊力，會(huì)造成固定液的流失。20 世紀(jì) 70 年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相可以克服上述的缺點(diǎn)， 現(xiàn)在應(yīng)用很廣泛。 郭佳莉等 33 采用 Hypersil ODS（ 125× 4.0mm，5 m） 色譜柱；檢測(cè)波長(zhǎng) 275 nm；流動(dòng)相為80%甲醇和 20%水；流速為 0.5mL· min- 1測(cè)定余甘子中單寧酸的含量，相關(guān)系數(shù)達(dá)99.996% 以上， 充分顯示了該法快速、方便、精確可靠的優(yōu)點(diǎn)。2.2.2 流動(dòng)注射法流動(dòng)注射分析法（ FIA）是丹

46、麥科學(xué)家于1974年創(chuàng)立的一項(xiàng)溶液自動(dòng)在線處理及測(cè)定的現(xiàn)代分析技術(shù)。 1988 年 Ruzicka 等對(duì)流動(dòng)注射分析作了定義： 向流路中注入一個(gè)明確的流體帶， 在連續(xù)非隔離載流中分散而形成濃度梯度，從此濃度梯度中獲得信息的技術(shù)。流動(dòng)注射分析法是利用具有流速的試劑流的容量測(cè)定，即用聚四氟乙烯管代替燒杯和容量瓶，通過(guò)流動(dòng)注射進(jìn)行分析的方法。用恒流量泵使檢測(cè)試劑流過(guò)內(nèi)徑為0.5 1 mm 的聚四氟乙烯管，在中途有注入部件（旋轉(zhuǎn)閥）注入微升量試樣，使其在混合圈中反應(yīng)。檢測(cè)器通常是采用裝有流通池的分光光度計(jì)、熒光光度計(jì)、原子吸收分光光度計(jì)和離子計(jì)等。李淮芬等34基于在甲醛存在的酸性介質(zhì)中，高錳酸鉀氧化單

47、寧酸產(chǎn)生較強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，結(jié)合流動(dòng)注射技術(shù)， 測(cè)定了幾種啤酒中微量的單寧酸含量。趙川等 35 使用經(jīng)陽(yáng)極化處理的雙鉑電極，通過(guò)偶合單寧在一支電極上的催化氧化和氧化鉑在另一支電極上的還原兩個(gè)不可逆電極過(guò)程，建立了不可逆電對(duì)的流動(dòng)注射雙安培法快速檢測(cè)綠茶、花茶等中的單寧含量的新方法 。流動(dòng)注射法還可與化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)法、動(dòng)力學(xué)光度法等方法結(jié)合36- 37 ，對(duì)被測(cè)試樣的單寧含量進(jìn)行測(cè)定，具有較好的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。流動(dòng)注射法的測(cè)量是在動(dòng)態(tài)條件下進(jìn)行，反應(yīng)條件和分析操作能自動(dòng)保持一致，結(jié)果重現(xiàn)性好； 分析速度快， 特別適合于大批量樣品分析；并且易于實(shí)現(xiàn)連續(xù)自動(dòng)分析，使某些難以或無(wú)法實(shí)現(xiàn)的手工操作成為可能

48、，將有良好的發(fā)展前景 。2.2.4 薄層掃描法層掃描法（ TLCS ）是指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中有紫外或可見(jiàn)吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描， 將掃描的圖譜及積分值用于藥品的質(zhì)量檢驗(yàn)方法 。蔡毓瓊等 38 使用島津 CS- 930雙波長(zhǎng)薄層掃描儀， 建立了余甘子喉片中沒(méi)食子酸含量的測(cè)定方法 。該法簡(jiǎn)便 、快速，穩(wěn)定，并且不須任何顯色劑， 加熱即呈現(xiàn)穩(wěn)定的黃褐色斑點(diǎn)，大大提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性 。2.2.4 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法（ AAS ）是基于蒸汽相中待測(cè)元素的基態(tài)原子對(duì)其共振輻射的吸收強(qiáng)度來(lái)測(cè)定試樣中該元素含量的一種儀器分析方法。主要應(yīng)用于測(cè)量痕量和超痕量元素。張穎等39 建立了火焰原子吸收法測(cè)土茯苓中單寧的含量，單寧與醋酸銨溶液中的銅離子產(chǎn)生沉淀，離心后通過(guò)測(cè)定剩余銅離子和未加入單寧前銅離子的吸光度，兩者之差在一定的范圍內(nèi)與單寧濃度呈線性關(guān)系，由此得出單寧含量 。此法靈敏度高 、干擾較少 、選擇性好，可使整個(gè)操作自動(dòng)化，應(yīng)用日益廣泛