檢驗科PCR室作業(yè)指導書

1、PCR室作業(yè)指導書文件編號：ABCD-3-PR-0131第A版編制： 審核： 批準： 生效日期：20XX年X月X日ABCD人民醫(yī)院檢驗科編 制 說 明本分冊文件可以作為單獨申請衛(wèi)生部PCR實驗室認可的全套作業(yè)文件，因此作為ISO15189質(zhì)量管理體系的PCR室作業(yè)文件，要對其重復部分進行刪減，各檢驗科根據(jù)各自用途要求與特點進行選用，特此說明。 2006年8月8日目 錄序號主 題 內(nèi) 容 代 號頁 號1PCR實驗室的設(shè)置及管理ABCD-3-PR-0172PCR實驗室工作制度ABCD-3-PR-0283PCR實驗室內(nèi)務(wù)管理制度ABCD-3-PR-0394PCR實驗室人員的配置及管理ABCD-3-P

2、R-04105PCR實驗室清潔程序ABCD-3-PR-05126PCR標本唯一標識編號規(guī)則ABCD-3-PR-06137PCR基因擴增實驗室的要求ABCD-3-PR-07148PCR廢棄物的處理程序ABCD-3-PR-08179基因擴增檢測及結(jié)果分析ABCD-3-PR-091810臨床標本的保存操作程序ABCD-3-PR-102111標本的采集運送接收程序ABCD-3-PR-112212PCR生物防護措施ABCD-3-PR-122413PCR實驗室化學試劑配ABCD-3-PR-132514PCR實驗室記錄管理制度ABCD-3-PR-142615PCR應急處理程序ABCD-3-PR-152816

3、PCR試劑的質(zhì)檢標準操作程序ABCD-3-PR-163017PCR消耗品進購質(zhì)檢貯存程序ABCD-3-PR-173118PCR室內(nèi)質(zhì)量控制操作程序ABCD-3-PR-183319PCR室間質(zhì)量控制操作程序ABCD-3-PR-193520PCR溫度校準標準操作程序ABCD-3-PR-203621核酸擴增熒光儀操作維護規(guī)程ABCD-3-PR-213722干式恒溫器操作維護規(guī)程ABCD-3-PR-224323離心機操作維護規(guī)程ABCD-3-PR-234524冰箱操作維護規(guī)程ABCD-3-PR-244725生物安全柜操作維護規(guī)程ABCD-3-PR-254926移液器操作維護規(guī)程ABCD-3-PR-26

4、5127沙眼衣原體核酸擴增熒光檢測ABCD-3-PR-275428乙肝病毒核酸擴增熒光檢測ABCD-3-PR-285629丙肝病毒核酸擴增熒光檢測ABCD-3-PR-295830結(jié)核桿菌核酸擴增熒光檢測ABCD-3-PR-306031高速冷凍離心機操作維護規(guī)程ABCD-3-PR-3162附錄表格檢驗科基因檢測實驗室平面圖ABCD/001實驗室主要負責人簡歷表ABCD/002PCR實驗室工作人員一覽表ABCD/003PCR擴增接收標本記錄表ABCD/004拒收標本記錄本ABCD/005標本超低溫保存記錄表ABCD/006PCR試劑購買記錄表ABCD/007試劑驗收記錄表ABCD/008PCR室特

5、殊耗材驗收記錄表ABCD/009普通耗材驗收記錄表ABCD/010室間質(zhì)評記錄表ABCD/011PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表ABCD/012室內(nèi)質(zhì)控圖ABCD/013PCR實驗室環(huán)境溫濕度記錄表ABCD/014冰箱溫度質(zhì)控圖ABCD/015儀器使用記錄表ABCD/016儀器設(shè)備維護和校準記錄表ABCD/017紫外消毒車消毒記錄表ABCD/018應急處理登記表ABCD/019PCR廢血標本處理交接表ABCD/020垃圾處理記錄表ABCD/021實驗室清潔消毒記錄表ABCD/022PCR檢驗報告單ABCD/023耗材進購記錄表ABCD/024試劑耗材供應商一覽表ABCD/025 修 訂 頁序號文件編號頁碼

6、需更改的內(nèi)容更改內(nèi)容批準人批準日期1234567891011121314151617181920PCR實驗室的設(shè)置及管理1目的：建立實驗室的合理設(shè)置和科學管理，防止實驗污染，保證檢測結(jié)果的可靠性。2適用范圍：本程序適用于分子診斷室的設(shè)置、工作流程和日常管理等。3負責人： 4細則：41 分子診斷室為檢驗科下設(shè)的專業(yè)實驗室，從事臨床標本的基因擴增檢測及相關(guān)科研工作。42 本實驗室采用實時熒光定量PCR技術(shù)作為臨床基因診斷的主要手段，實驗室分為三個區(qū)：試劑準備區(qū)（第一區(qū)）、標本處理區(qū)（第二區(qū)）、擴增分析區(qū)（第三區(qū)）。每一工作區(qū)配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有

7、明顯的區(qū)分標識。各區(qū)標簽顏色：紅色（第一區(qū)）、白色或綠色（第二區(qū)）、藍色（第三區(qū)）；專用工作服：粉紅色（第一區(qū)）、白色（第二區(qū)）、藍色（第三區(qū)）。標本的接收則在檢驗科標本接收處進行。43 各工作區(qū)專用的儀器設(shè)備、辦公用品、工作服、實驗耗材和清潔用具等，不可混用。44 各工作區(qū)配置、功能和內(nèi)務(wù)管理見各相關(guān)SOP文件。45 嚴格遵守從“試劑準備區(qū)標本處理區(qū)擴增分析區(qū)”的單一流向制度，不得逆向進入前一工作區(qū)。46 非本實驗室工作人員，未經(jīng)許可不得入內(nèi)；進修、實習或其他科室人員因科研活動需要，進入實驗區(qū)域（試劑準備區(qū)、標本處理區(qū)、擴增分析區(qū)） 需首先熟悉本程序的各項規(guī)定并嚴格遵守執(zhí)行，在本實驗室人員監(jiān)

8、督指導下進行。47 實驗完畢后做好清潔消毒工作。5. 本文涉及以下圖表：1.實驗室設(shè)計平面圖PCR實驗室工作制度1目的 ：保持良好的工作環(huán)境，以確保檢測結(jié)果的可靠性，防止交叉污染，防止差錯、事故及糾紛的發(fā)生。2適用范圍：所有本實驗室人員。3負責人： 4細則：41 本實驗室進行臨床基因擴增檢測及相關(guān)實驗工作，不得進行其它實驗操作。42各區(qū)的用品不得混用。43在各區(qū)的實驗操作過程中，操作者必須戴手套和帽子，嚴格按照操作規(guī)程。44試劑準備區(qū)只能進行試劑的貯存及配制等相關(guān)操作（見相關(guān)SOP文件）。45標本處理區(qū)只能進行臨床標本的保存，核酸提取、保存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成（見相

9、關(guān)SOP文件）。46擴增分析區(qū)只能進行DNA或cDNA的擴增、實時熒光PCR擴增產(chǎn)物的分析（見相關(guān)SOP文件）。47進行實驗時嚴格執(zhí)行本實驗室的各項操作規(guī)程，及時做好各種操作記錄，力求準確、可靠。實驗完畢，做好清潔、整理及分析統(tǒng)計等工作。48室內(nèi)儀器由專人負責，未經(jīng)許可，不得隨意使用或挪用；愛護使用儀器，定期進行保養(yǎng)與維修。49 愛護醫(yī)院財產(chǎn)，注意安全；離開實驗室前應關(guān)好門窗，檢查水、電等。PCR實驗室內(nèi)務(wù)管理制度1目的：保證實驗室日常內(nèi)務(wù)管理及清潔工作順利進行。2適用范圍：實驗室相關(guān)人員及醫(yī)院相關(guān)清潔工人。3負責人： 4細則：41非本室工作人員未經(jīng)允許不得進入實驗室。42各區(qū)的用品不得混用。

10、43實驗人員要有強烈的時間觀念，按時上下班，不遲到、早退。44進入實驗室的工作人員必須遵守實驗室的單一流向的規(guī)定，禁止逆向走動。45所有儀器（如PCR擴增儀）須有專人負責，并有使用維護記錄；實驗人員必須熟悉儀器性能后方允許操作，并嚴格遵守操作規(guī)程。46所有試劑進購、配制、質(zhì)檢、使用均要有記錄，未經(jīng)允許不得隨意帶出本實驗室。47每天了解儀器運轉(zhuǎn)情況及試劑使用情況，確保儀器整潔安全，試劑合格使用。48各區(qū)的各種清潔消毒均應有記錄，工作衣消毒時注意各區(qū)應分開進行處理。49注意保持實驗室衛(wèi)生整潔，嚴禁在室內(nèi)抽煙、吃零食，非實驗操作人員應盡量少入。4. 10下班前檢查門、窗、水、電，節(jié)假日應指定人員負責

11、檢查實驗室的儀器、設(shè)備。PCR實驗室人員的配置及管理1目的：保證實驗室有足夠數(shù)量的合格的具備開展該類實驗能力的實驗人員。2適用范圍：適用于實驗室人員配置、管理、培訓及考核。3負責人： 4細則：41 人員要求411 本實驗室工作人員應為醫(yī)學檢驗專業(yè)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，具有中級以上技術(shù)職稱或?qū)？埔陨蠈W歷。412 實驗室工作人員應參加衛(wèi)生部或省臨檢中心舉辦的PCR技術(shù)培訓，并取得合格證。413 對于新進入本室的人員，如尚未取得PCR技術(shù)培訓合格證，應在實驗室有培訓合格證的上級技術(shù)人員的指導下進行實驗工作，實驗報告由有資格人員出具，并應在最短的時間內(nèi)取得上崗培訓合格證。42 人員配置421 實驗室應根據(jù)工

12、作需要配備足夠的工作人員，目前實驗室有主管技師2人、技師1人，3人都已獲得培訓合格證，視工作量的增加和業(yè)務(wù)發(fā)展需要，會適當增加工作人員。422 各級技術(shù)人員履行相應的工作職責。43 人員培訓及考核431 實驗室負責人或負責人指定人員參加每年衛(wèi)生部PCR室間質(zhì)評總結(jié)會。432 實驗室工作人員每12年至少參加1次PCR技術(shù)的省級或國家級繼續(xù)教育項目，參加相關(guān)學術(shù)交流會議。433 安排未取得上崗培訓合格證的工作人員在合適的時間內(nèi)參加技術(shù)培訓。434 科室不定期組織實驗室內(nèi)部實驗人員學習、更新核酸擴增方面的相關(guān)知識，提升自身的理論學習水平。特別是在標本接收區(qū)采血、接收標本的人員，需定期對其進行有關(guān)核酸

13、擴增技術(shù)，標本采集、保存、運輸?shù)戎R的培訓。一些科室的送檢標本由該科室的人員送到標本接收區(qū)，對這些臨床醫(yī)護人員也要定期進行有關(guān)核酸擴增技術(shù)，標本采集、保存、運輸?shù)戎R的培訓。435 本實驗室工作人員每年進行考核一次,考核內(nèi)容:a)日常工作質(zhì)量b)室內(nèi)質(zhì)控測評c)室間質(zhì)控測評d)在抱怨處理中的表現(xiàn) 436 本實驗室工作人員實行嚴格獎懲制度,有下列表現(xiàn)者可受獎:a)工作質(zhì)量高, 質(zhì)控測評成績優(yōu)秀者b)有科研能力,并有一定數(shù)量和質(zhì)量的論文發(fā)表c)有獨創(chuàng)性工作成果,經(jīng)鑒定認可者d)受到有關(guān)部門或群眾嘉獎?wù)哂邢铝星闆r者將受到懲處:a)工作質(zhì)量問題較多，質(zhì)控測評成績不合格；b)不遵守規(guī)章制度并造成一定影響

14、；c)不求上進。437 本實驗室工作人員獎懲方法分精神及物質(zhì)兩類,經(jīng)實驗室上報醫(yī)院及有關(guān)部門批準后執(zhí)行。438 本實驗室工作人員均建立業(yè)績檔案,實行能進能出制度,不斷吸收高質(zhì)量人員,加強培訓和提高,對于不適合本室工作的人員要及時調(diào)離。44 人員管理441 實驗室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學歷、任職資格、發(fā)表論文、研究成果、培訓等相關(guān)材料復印件。442 技術(shù)檔案分文本檔案和電子檔案，文本檔案每年更新1次，電子檔案隨時更新。5. 本文涉及以下表格實驗室主要負責人簡歷表 PCR實驗室工作人員一覽表 培訓申請表 年度培訓計劃表 培訓記錄表 員工培訓履歷表 人員檔案卡 PCR實驗室清潔程序1目的

15、：保證實驗室環(huán)境的整潔，防止污染。2適用范圍：適于實驗室工作環(huán)境、實驗臺面、工作服、移液器等的清潔消毒工作。3負責人： 操作人： 4細則：41 實驗室地面必須平整、干凈，通道要利于通行，沒有無用的物品阻礙。42 合理規(guī)劃實驗室內(nèi)物品，做到擺放整齊、有序，無用的或使用效率低的物品放置到儲存處，常用的物品要容易尋找到。43抽屜、柜子、文件類物品要作好標記，以方便識別。44 實驗結(jié)束后用2%戊二醛對臺面進行清潔，并用移動紫外燈進行消毒。45每天對使用過的移液器用75%酒精進行擦拭。每周1次對移液器咀進行75%酒精浸泡15分鐘左右，若使用過程中發(fā)生污染應隨時浸泡處理。46實驗過程中如發(fā)生標本或試劑外濺

16、，應立即用2%戊二醛滴上，濾紙蓋上半小時，然后用酒精擦洗，并用移動紫外燈消毒。47 每天實驗前開啟各區(qū)的通風系統(tǒng)，各區(qū)實驗結(jié)束后，分別打開傳遞窗紫外燈、移動紫外燈（對實驗臺面消毒）、天花板紫外燈消毒實驗室，每次開啟 3060分鐘。48 待紫外燈消毒時間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄。49 依次清潔三個區(qū)的實驗臺面和地面，各區(qū)清潔消毒工具均專用，不可混用，注意按照單一方向流程的原則來進行清潔。410 處理好各區(qū)廢棄物，交醫(yī)院集中處理。411 每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實驗區(qū)的工作服隔開洗滌。5. 本文涉及以下表格實驗室清潔消毒記錄表 垃 圾 處 理 記 錄 表 PCR標本唯一標識編號

17、規(guī)則1目的：保證標本編號的唯一性，也是準確發(fā)放報告的基礎(chǔ)。2適用范圍：使用核酸擴增熒光檢測實驗室所開展的四種檢測項目：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、結(jié)核桿菌、沙眼衣原體。3負責人： 操作人： 4程序：41 按檢測日期分類標記根據(jù)標本送檢的日期，每天的標本對應標記一種唯一的代號。如當天為2005年3月1日，則編為050301。42 按檢測類型分類標記根據(jù)檢測項目的不同，每種檢測項目對應標記一種唯一的代號。如乙型肝炎病毒標記為B，丙型肝炎病毒標記為HC，結(jié)核桿菌標記為T，沙眼衣原體為C。43 按驗單接收順序編號在同種檢測類型的驗單中，按驗單順序編號。如第一個檢測乙型肝炎病毒的驗單編為B01，第二個檢

18、測乙型肝炎病毒的驗單編為B02，第三個檢測結(jié)核的驗單編為B03等。44 特殊標本的編號如有特殊情況，應在標記前面增加特異字母區(qū)別開，如住院的單和門診的單、其它醫(yī)院送來的單和本醫(yī)院的單要區(qū)分開等。45 編號步驟a）對當天送來的標本，根據(jù)編號的基本原則編號，每個樣本的每個檢測項目對應一個唯一的編號（如050301T04）。b） 用筆在每張檢驗申請單和對應的樣品管上作好相同的標記。c） 做好標本的接收記錄，每個樣本的記錄都應包括以下信息：接收時間、醫(yī)院、科室、送檢醫(yī)生、患者姓名、性別、年齡、標本類別、標本狀態(tài)、送標本者、接收人、檢驗單號、標本唯一統(tǒng)編號等。d）處理好樣品、點樣后，將反應管放入擴增儀上

19、開始擴增。f）擴增得到結(jié)果后，先在統(tǒng)計簿上填入結(jié)果，作好記錄，再一一把實驗結(jié)果填入相應申請單。g）發(fā)放檢驗報告單。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴增接收標本記錄表 PCR基因擴增實驗室的要求1目的：規(guī)定在各區(qū)內(nèi)所進行的工作及其操作。2適用范圍：所有在本區(qū)內(nèi)進行的工作。3負責人： 操作人： 4程序：實驗室分四區(qū):標本接收區(qū)；試劑貯存、準備區(qū)；標本制備區(qū)；擴增區(qū)。進入各區(qū)嚴格按照單一方向進行，即試劑貯存、準備區(qū)標本接收區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)。各區(qū)及其設(shè)備、物品必須有明確的標記，嚴禁混用。進入PCR實驗室的工作人員（含衛(wèi)生員），都必須遵守實驗室的規(guī)則，尤其嚴格遵守進入PCR實驗室的唯一流向。不可進入PC

20、R擴增后區(qū)打掃衛(wèi)生，再返回擴增前區(qū)工作。防止非本室工作人員串崗，進入本室。尤其不得為找人，而逆向誤入PCR實驗室?？倓t（1） PCR實驗室工作人員應具備醫(yī)學檢驗、微生物檢驗基本知識，大專以上學歷，并受過PCR實驗的基礎(chǔ)知識和技能培訓。（2） PCR實驗室分試劑準備，樣本準備，PCR擴增和產(chǎn)物檢測四個室，各室的實驗物品（含加樣器，試管架，吸頭，記錄紙，筆等），不得混用，須貼上標簽予以區(qū)別。（3） 實驗室技術(shù)人員必須嚴格按照PCR實驗室操作程序進行，包括實驗室擦洗。臺面消毒，離心管，吸頭的無菌滅活準備，儀器使用和廢棄物處理等。（4） 進入實驗室的工作人員必須更換各室不同的工作服（含帽和鞋），勤換洗

21、工作服，以及遵守實驗室的唯一流向的規(guī)定，嚴禁反向流動。（5） 進入PCR實驗室后區(qū)的物品不許帶進PCR實驗室前區(qū)。每天實驗開始前，必須清潔地面和消毒實驗室前區(qū)。實驗結(jié)束應紫外線消毒實驗臺面，產(chǎn)物分析室紫外燈最好徹夜開啟，排風扇應晝夜工作。每天下班前處理好廢物，應關(guān)好水、電、煤氣和門窗。（6） 定期校準和維修PCR儀、酶標儀及離心機、水浴箱等儀器設(shè)備。（7） 實驗室內(nèi)不得飲食、吸煙。4.1標本接收區(qū)4.1.1實驗人員進入該區(qū)須穿本區(qū)白色工作服，接收標本須戴一次性手套。4.1.2記錄實驗室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。使用帶有本區(qū)標識的記錄本、紙和筆，每項記錄，書寫工整詳細。4.1.3對送檢的標本實行

22、雙簽制度，并仔細檢查是否符合檢測要求，對有不符合要求的標本及時通知相關(guān)科室重新采樣，并作記錄，每份標本需給出唯一性編號。4.1.4本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封好，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將垃圾帶出實驗室。4.1.5每次實驗結(jié)束后，清潔實驗臺及地面打開紫外燈消毒30分鐘。記錄紫外燈使用情況。4.2試劑貯存、準備區(qū)4.2.5使用帶有本區(qū)標識的記錄本、紙和筆，每項記錄，書寫工整詳細。4.2.6準備好的試劑送入下一區(qū) ，還原實驗臺面，將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將本區(qū)垃圾帶出實驗室。4.2.7白色工作服留在本區(qū)。4.2.8本區(qū)維持相對正壓狀態(tài)（開啟緩沖區(qū)的排氣

23、扇）。實驗結(jié)束后，清潔實驗臺及地面打開紫外燈消毒30分鐘。4.3標本制備區(qū)4.3.1實驗人員進入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專用藍色工作服及拖鞋。實驗中須使用一次性帽子，戴手套，手套在實驗過程中疑有污染應立即更換。4.3.2將傳入本區(qū)的試劑放入冰箱冷凍室試劑存放專區(qū)暫存。記錄實驗室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。4.3.3將冰箱內(nèi)二周前的標本密封丟入垃圾筐，然后記錄標本的保存情況。4.3.4使用帶有本區(qū)標識的記錄本、紙和筆，每項記錄，書寫工整詳細。4.3.5按試劑盒說明書對標本進行處理，將處理好的標本在超凈工作臺內(nèi)加樣，記錄標本的處理過程。4.3.6將加樣后的試劑傳送下一區(qū)，還原實驗臺面，關(guān)閉所有儀器，記錄儀

24、器使用時間和運行狀態(tài)。4.3.7使用過的離心管、吸頭須置于盛有1084液的廢液缸中，實驗結(jié)束后方丟入垃圾袋，患者樣品應按有生物傳染性危險品對待。4.3.8將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將垃圾帶出本區(qū)。4.3.9將藍色工作服留在本區(qū)。4.3.10本區(qū)應避免不必要的走動，同時維持相對正壓狀態(tài)，實驗結(jié)束后，清潔實驗臺及地面打開紫外燈消毒30分鐘。4.4擴增產(chǎn)物檢測區(qū)實驗人員進入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專用粉色工作服及拖鞋。4.4.2記錄實驗室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。使用帶有本區(qū)標識的記錄本、紙和筆，每項記錄，書寫工整詳細。將傳入本區(qū)加樣后的試劑上機擴增。4.4.5擴增完

25、成后，記錄檢測結(jié)果，及時發(fā)放報告單，記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。4.4.6將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，然后將垃圾帶出實驗室。4.4.7將粉色工作服留在本室再離開實驗室4.4.8嚴禁本區(qū)物品帶至其他區(qū)，該區(qū)需維持負壓狀態(tài)，排氣扇24小時排氣，實驗結(jié)束后清潔該區(qū)打開紫外燈照射，最好整夜消毒，記錄紫外燈使用情況。5. 本文涉及以下表格PCR實驗室環(huán)境溫濕度記錄表 冰箱溫度質(zhì)控圖 實驗室清潔消毒記錄表 垃 圾 處 理 記 錄 表 紫外消毒車消毒記錄表 PCR廢棄物的處理程序1目的：保證實驗室、實驗人員和外部環(huán)境的安全。2適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室常用化學試劑（

26、NaOH、EDTA、乙醇、生理鹽水等）、實驗室廢棄物的處理；3負責人： 操作人： 4細則：4.1科室職責應對本室工作人員講明本程序在預防交叉、實驗室污染及切斷傳播途徑中的重要性，并要求嚴格執(zhí)行。4.2實驗室所有垃圾，裝入專用污物袋內(nèi)，各區(qū)備有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黃色）。使用過的一次性消耗品(如試管、吸頭、離心管、等)，先放入10%次氯酸鈉溶液中浸泡24小時后，再放入黃色垃圾袋內(nèi)，使用過的手套、鞋套等直接放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。4.3 夾取標本的工具，如鉗、鑷、接種環(huán)、吸管等，用后均應消毒清潔，進行微生物檢驗時，應重新滅菌，金屬工具可燒灼滅菌或消毒液浸泡；玻璃制品干熱或

27、壓力蒸汽滅菌。4.4 一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡24小時后，放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。4.5 廢棄標本如血、尿、胸水、腹水、腦脊液、唾液、胃液、腸液、關(guān)節(jié)腔液等用10%的84液浸泡24小時后，交醫(yī)院集中處理。4.6 盛標本的容器，若為一次性使用的紙質(zhì)容器及其外面包被的廢紙，放入污物袋里交醫(yī)院處理；對可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15分鐘或加入10%次氯酸鈉溶液浸泡24小時，消毒液每日更換，消毒后用洗滌劑及流水刷洗，瀝干，用于微生物培養(yǎng)采樣者，用壓力蒸汽滅菌后備用。4.7 廢棄標本及其容器裝入黃色垃圾袋內(nèi)、封閉，交醫(yī)院污物處理中心處理。4.8日常生活垃圾如紙屑等按一般垃圾交

28、醫(yī)院處理。5. 本文涉及以下表格PCR廢血標本處理交接表 基因擴增檢測實驗及結(jié)果分析1、目的：保證擴增及結(jié)果分析的標準化、規(guī)范化。2適用范圍：適用于本室使用的普通離心機。3負責人：肖靜 操作人：胡可存 蔣藝勤4、標準程序：4.1 基因擴增檢測標準程序：擴增反應前須先在樣本輸入模板上按照事先排好的標本位置進行設(shè)置。每次實驗除待檢標本，還需包括：陰性對照、陽性對照、室內(nèi)質(zhì)控品各一份，一組陽性標準品（4個梯度108、106、105、104）。4.1.1打開電腦電源開關(guān)，進入Windows NT界面。4.1.2 接著打開PCR儀電源開關(guān)，預熱5分鐘。 雙擊電腦桌面的ABI Prism 5700 SDS

29、 Software圖標進入程序設(shè)置界面。4.1.4單擊 “文件”菜單中的 “新建”命令，（或單擊工具欄中的“新建”按扭）。在測定、容器和模板中做相應的選擇，點擊OK。 4.1.5應用檢測管理程序，并將其添加到樣品板文檔中。 4.1.6檢測反應管，4.1.7 根據(jù)當次實驗所需條件編輯時間和溫度。運行樣品板文檔。4.2 結(jié)果分析標準程序 ：應按以下步驟進行：全部曲線陰性對照陽性對照陽性室內(nèi)質(zhì)控品陽性標準品逐個分析（標出陽性標本和可疑標本）調(diào)整參數(shù)，獲得較好的標準曲線，顯示定量結(jié)果登記，發(fā)報告。4.2.1 整體曲線的觀察：將所有曲線選中進行整體觀察1）觀察是否存在污染情況（包括標本污染和試劑污染），

30、特別應注意大量曲線在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。2）觀察是否有光路傳導阻滯或電壓波動等機器原因形成的異常曲線。4.2.2 陰性對照的分析陰性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陰性標本。作用：用以監(jiān)測實驗室和前處理過程中是否存在污染。4.2.3 陽性對照的分析陽性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陽性標本。作用：用以監(jiān)測實驗能否正常檢出陽性標本，避免假陰性的出現(xiàn)。4.2.4 室內(nèi)質(zhì)控品的分析室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知濃度室內(nèi)質(zhì)控品。作用：用以監(jiān)控日常實驗的精密度。4.2.5 陽性標準品的分析1）各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開，則表明陽模稀

31、釋可能存在問題，提示實驗中存在較大人為誤差。2）觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置。情況1：若出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而各曲線Ct 值均后移，則判斷是否為試劑擴增效率下降（如試劑過期或保存條件不合格）。情況2：出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標準品的降解情況。3）每日必做104標準品，用作以下三方面監(jiān)控：一是否存在操作誤差，如加樣量過少等原因?qū)е?04標準品未能檢出；二是否存在稀釋后的梯度放置過久，低拷貝標準品降解的情況；三是若高拷貝標準品出現(xiàn)Ct值后移，且能排除情況1、2，則判斷是否為試劑靈敏度下降。4.2.6 單個曲線的判斷：逐個分析每條曲線，

32、判斷曲線的陰陽性或?qū)倏梢汕€。（可疑標本是指曲線在25個Ct值后出現(xiàn)上漲且平臺趨勢不明顯或上漲幅度比較低的標本。可疑標本要第二天重做，兩次結(jié)果一致則報陽性，否則結(jié)果報陰性。）曲線觀察內(nèi)容：在基線選擇28時觀察熒光強度（是否有三期特征）。并分別在Delta Rn vs.Cycle 、Ct vs.Well Number和 Rn vs.Cycle這三種擴增圖形式下分析數(shù)據(jù)。4.2.7 得出定量結(jié)果：調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標準曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽性結(jié)果值。此時應排除某些陰性標本因熒光曲線假性上揚而得出的假陽性結(jié)果和某些弱陽性標本因終末熒光值過低而顯示的假陰性。4.2.8 發(fā)放報告：及時登記檢

33、測結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報告。4.3實驗結(jié)果無效的判斷標準：出現(xiàn)下述四種情況中的任何一種或多種，當次實驗結(jié)果不可發(fā)，查找原因，重做實驗。4.3.1 陰性對照出現(xiàn)擴增。4.3.2 陽性對照無擴增。 4.3.3大批甚至所有的標本都擴增了。4.3.4 室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果出現(xiàn)失控情況，實驗失控的具體標準詳見室內(nèi)質(zhì)控標準操作程序。4.4實驗結(jié)果有效的判斷標準：達到下列要求后，當次實驗有效，可以發(fā)放結(jié)果。4.4.1陰性對照沒有擴增，陽性對照擴增。4.4.2陽性標準品梯度曲線平滑均勻，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)三個參數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。4.4.3室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果處于在控狀態(tài)，具體標準詳見5. 本文涉及以下表格室

34、間質(zhì)評記錄表 PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表 室內(nèi)質(zhì)控圖 臨床標本的保存操作程序1目的：臨床標本正確保存，以便必要時復查。2適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測標本。3負責人： 操作人： 4程序：41 處理前的標本保存a）HBV：全血標本可4下短期（24h內(nèi)）保存，長期保存則需分離出血清（血漿），保存于-20下。d）HCV：在1小時內(nèi)分離血清，吸取200µl，加入20u Rnasin，保存于-20。盡可能快的提取RNA。c）TB：痰或胸腹水、腦脊液、膿液標本用于TB檢測的短期保存可置于4下，長期保存則于-20下。d）CT：標本短期（24h內(nèi)）保存置于4下，長期保存則需在-20下。42 報告發(fā)出后

35、的標本保存：a） 提取的核酸標本當天檢測可置4保存，如當天不檢測應置-20保存。報告發(fā)出后第二天丟棄。b） 原始血清/血漿樣本在報告發(fā)出后放入低溫冰箱-20保存1個星期，以備復查。超過1個星期保存期的標本由室負責人酌情處理，一般按生物傳染性物品交醫(yī)院統(tǒng)一處理。c）血清/血漿標本放置低溫冰箱保存時須有記錄，按編號順序存放，并由專人負責管理。43 特殊標本的處理：對暫不檢測的項目和規(guī)定時間外收到的零散樣本，要隨時登記和交班，以免漏檢，遺失和延誤檢驗。對特殊樣本或特殊病人的樣本，實行“首接”負責制，所謂特殊樣本是指難于采集的樣本，以及特殊病人的樣本一律實行“首接”負責制，無論那位工作人員，一旦收到樣

36、本后，均須負其責任，不得以任何借口推托，及時和正確保管和轉(zhuǎn)送樣本到有關(guān)實驗室或有關(guān)人員，同時作交班記錄和雙簽名。對于做長期病情動態(tài)考察的病人標本一律置于-20下長期保存，使用時再按需取出檢測。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴增接收標本記錄表 拒收標本記錄本 標本超低溫保存記錄表 臨床標本的采集、運送、接收程序1目的：規(guī)范臨床待檢標本的正確采集、送檢和處理。2適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測標本。3負責人： 操作人： 4程序：41 標本的采集411 標本由臨床各科室接受過臨床基因擴增檢測有關(guān)標本采集、保存、運輸知識培訓的醫(yī)護人員采集并送至實驗室。412標本采集要求a）血液標本：用2ml真空采集

37、管或1.5ml高壓滅菌離心管采集血液標本，血標本采集后在2小時內(nèi)送達實驗室（HCV采用EDTA抗凝的血漿）。離心（檢驗單與標本一道）后用一次性吸管吸取血清或血漿加入經(jīng)消毒的1.5ml的離心管中，編號。b）痰標本：用帶蓋的無菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰標本送檢。（對于無痰或少痰的患者，可用45加溫的100g/L NaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標本。）標本在室溫下保存不能超過24小時。c）生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專用取樣拭子（滅菌，一次性）采集樣本，及時送檢。采集生殖道拭子標本，要

38、求男性病人在采樣前2小時內(nèi)不能排尿，采樣時，將棉拭子伸入男性尿道及女性宮頸口23cm，轉(zhuǎn)動一周以獲得上皮細胞。d）尿液：由病人自留尿液于無菌封閉的杯中送檢。e）腦脊液和胸腹水：由臨床醫(yī)生采集后放入消毒的試管中及時送檢。注意：所有上述用于臨床標本采集的容器如試管或離心管，均應使用前高壓滅菌和密封。42 標本的運送標本采集后，密閉、標（貼）姓名，應盡可能快的送至檢測實驗室，如運送時間需2小時以上，必須用冰盒送至實驗室。標本中如加入了適當?shù)姆€(wěn)定劑，如用于RNA測定加入4mol/L異硫氰酸胍鹽（GITC）的血清（漿）標本和用于DNA測定的EDTA抗凝血等，則可在室溫下運送或郵寄。45 接收451嚴格對

39、各類樣本的查對和雙簽制度，對病房各樣本及時進行驗收，查對，不符合要求的樣本一律退回，并有書面記錄。452 分類驗證4521 一般內(nèi)容進入實驗室的樣本在進行編號、離心前，工作人員應再次認真查對姓名，聯(lián)號，住院號，病區(qū)床號，項目等。對不符合要求者應作記錄，并及時通知采樣科室，正確及時地補采樣，以免延誤病人的檢測結(jié)果報告。對書寫不清楚的申請單，當事者要及時與病房聯(lián)系(可電話)，明確受檢者姓名，住院號，性別，年齡，病區(qū)，床號和檢驗項目等；并作相應記錄。4522 按檢測項目驗證標本a）HBV：所需標本類型為未溶血的血清或血漿，注意血漿標本所用的抗凝劑，用EDTA-K2，不可使用肝素。標本為全血時應及時分

40、離出血漿保存。b）HCV：同上，但標本為血清時，要在1小時內(nèi)分離出血清用于檢測。c）TB：晨起第一口深部痰(不能為唾液)、胸腹水、腦脊液、膿液或穿刺液。d）CT：尿道或陰道分泌物。4523 實驗室人員對標本進行查驗，出現(xiàn)下表中不合要求的情況時，應拒收標本，登記并告知相關(guān)科室。類別拒收原因1未正確使用抗凝劑的標本造成凝血的標本2嚴重溶血3嚴重脂血4采血量不足（血清200uL、全血1mL） 5檢測項目TB的標本是唾液而不是晨痰6標本容器破裂，標本被污染7標本的病人姓名、年齡、性別等與檢驗單不相符8RNA檢測，采樣時間超過 2小時9其他可能嚴重影響檢驗結(jié)果的原因4524 拒收程序a）對拒收的不合格標

41、本應在拒收標本記錄本上登記。b）填寫不合格標本處置單，并隨同申請單送返送檢科室。c）必要時電話告之相關(guān)科室醫(yī)生或護士。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴增接收標本記錄表 PCR擴增拒收標本記錄表 PCR生物安全防護措施1目的：預防工作人員在實驗過程中被感染或污染。2適用范圍：適用于本室所有工作人員。3負責人： 操作人： 4細則：41 實驗人員在實施生物防護措施時，應嚴格遵守各項相應的規(guī)章制度，建立起強烈的生物防護意識。42 每天更換廢液缸的2%戊二醛溶液，并保證2%戊二醛溶液用量為廢液缸內(nèi)總液量的五分之一左右。配置消毒液時，正確量取足量的消毒劑（用量杯，保證濃度），水的用量也要正確，缸體密封性良

42、好。43 實驗臺面日常清潔時使用75%的酒精擦拭。44 每區(qū)每次實驗后紫外燈照射3060分鐘，如有需要可延長照射時間。45 所有來自病人的血液或體液標本均應視作傳染源，因此在標本的采集、運輸過程中，標本容器應完好無泄漏。46 處理標本時應穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體液標本以及試劑，應立即沖洗干凈。有下列情況之一者，需另外消毒：手接觸有傳染性的微生物，水龍頭、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量細菌污染。消毒劑可用“84”消毒液。47 在實驗過程中，病人標本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應立即用清水洗。48 實驗過程中在使用針具等銳器時，盡量小心防止受傷。若

43、被銳器刺破時，應立即脫下手套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時進行預防補救措施。49 在實驗過程中病人標本（血液、體液）外漏時，應立即用2%戊二醛滴上，濾紙或紗布蓋上半小時，然后用酒精擦洗，并用紫外燈消毒。410 實驗完畢離開時，應脫下所有該實驗區(qū)個人防護裝備。411 實驗完畢后應對實驗室進行紫外消毒。412 遇有意外事故應立即報告科室負責人，當事人應立即注射相關(guān)疫苗或進行預防性治療，并進行醫(yī)學觀察，嚴重者應報告院技術(shù)負責人。5. 本文涉及以下表格紫外消毒車消毒記錄表 實驗室清潔消毒記錄表 PCR實驗室化學試劑配制程序1目的：保證實驗中用到的各種溶液符合實驗要求。2適用范圍

44、：核酸擴增熒光檢測實驗室常用溶液：4%NaOH溶液、75%酒精、消毒劑（三氯異氰尿酸或 二氯異氰尿酸鈉）、2%戊二醛溶液等。3負責人： 操作人： 4程序：44 化學試劑的配制：441 用具：干燥潔凈的250ml量桶一只，1000ml量桶一只，1000ml燒杯一只，三角燒瓶兩只，天平一架，100ml塑料試劑瓶、2000ml廣口瓶各一只。442 配制步驟：4421 配制4%NaOH溶液:a）用天平稱取4克分析純的NaOH固體，置于一只三角燒瓶中。b）用250ml量桶準確取100ml水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。c）搖蕩三角燒瓶使NaOH固體充分溶解。d）然后緩緩傾倒入100ml塑料試劑

45、瓶中密封保存?zhèn)溆谩?422 配制消毒劑:a）一般桌面、器具和地面的消毒只要使有效氯達到500mg/L，即可達到消毒作用。b）消毒劑為粉狀（20克/袋），如配制一升的消毒劑溶液，則取500g，倒入燒杯中，緩緩加入1000ml水充分溶解，備用。c）如需加大消毒力度，則有效氯濃度加大。4423 配制75%酒精溶液:a）一般常規(guī)消毒的75%酒精由醫(yī)院藥劑科提供。b）RNA提取的75%酒精的配制，試劑盒提供DEPC水，酒精用分析純的無水酒精，根據(jù)當天的標本數(shù)量進行配制。4424 配制2%戊二醛溶液:a）準確量取戊二醛原液20ml倒入1000ml燒杯中。b）量取980ml水，緩緩倒入1000ml燒杯中，混

46、勻，加至2000ml廣口瓶中備用。注意事項：每份配制好的溶液保質(zhì)期為14天PCR實驗室記錄管理制度1、目的：確保檢驗資料的記錄、保存狀態(tài)在控2、適用范圍：實驗過程中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)、文本資料的記錄3負責人： 操作人： 4、工作程序：4.1 書面記錄文件的管理： 本實驗室的書面記錄包括：001 ABCD人民醫(yī)院檢驗科基因檢測實驗室平面圖-編號ABCD/001002實驗室主要負責人簡歷表-編號ABCD/002003PCR實驗室工作人員一覽表-編號ABCD/003004PCR擴增接收標本記錄表-編號ABCD/004005拒收標本記錄本-編號ABCD/005006標本超低溫保存記錄表-編號ABCD/0060

47、07PCR試劑購買記錄表-編號ABCD/007008試劑驗收記錄表-編號ABCD/008009PCR室特殊耗材驗收記錄表-編號ABCD/009010普通耗材驗收記錄表-編號ABCD/010011室間質(zhì)評記錄表-編號ABCD/011012PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表-編號ABCD/012013室內(nèi)質(zhì)控圖-編號ABCD/013014 PCR實驗室環(huán)境溫濕度記錄表-編號ABCD/014015冰箱溫度質(zhì)控圖-編號ABCD/015016儀器使用記錄表-編號ABCD/016017儀器設(shè)備維護和校準記錄表-編號ABCD/017018紫外消毒車消毒記錄表-編號ABCD/018019應急處理登記表-編號ABCD/019

48、020 PCR廢血標本處理交接表-編號ABCD/020021垃圾處理記錄表-編號ABCD/021022實驗室清潔消毒記錄表-編號ABCD/022023 PCR檢驗報告單-編號ABCD/023024耗材進購記錄表-編號ABCD/024025試劑耗材供應商一覽表-編號ABCD/0254.1.2 填寫書面記錄，需使用黑色墨水或圓珠筆，字跡清晰，如有涂改，在涂改處應有涂改人簽名，不得在記錄表上進行無關(guān)書寫，保持記錄表清潔、完整。實驗記錄表嚴格專用，不同實驗區(qū)不得混用。4.1.3 每個記錄本要納入檔案管理，寫完后及時放入檔案柜，每月分類裝訂成冊,并依照要求進行編號,如2003年5月的實驗結(jié)果記錄本、試劑

49、消耗記錄本、室內(nèi)質(zhì)控圖分別編為200305SYJG、200305SJXH、200305SLZK，分別放于檔案柜的不同位置以便查詢。標本原始檢測申請單最后保存于倉庫2年，其它實驗記錄保存于各自實驗操作區(qū)內(nèi)，保存5年。4.1.4 定期對保存的記錄進行分析總結(jié)，形成總結(jié)報告，以便改進工作。4.1.5 在沒有實驗室職責同意的情況下，不得隨意將記錄借出。在記錄借出時需有實驗室職責、經(jīng)手人、借閱人的簽名方可。4.2 電腦上記錄文件的管理4.2.1記錄文件必須保存在非系統(tǒng)分區(qū)中，如D盤，保存路徑要清晰、便捷、易查找。4.2.2文件夾目錄結(jié)構(gòu)要求層次分明，一整年的實驗結(jié)果均保存在一個年度文件夾里，如“2003年”文件夾；每個年度文件夾包含12個月文件夾，如“Jan01”、“Feb02”，每天的實驗結(jié)果就保存在當月文件夾里。4.2.3 實驗文件保存時以當天日期命名，若某天進行了多次實驗，命名時在后面以a、b、c等字母標識，如2003年5月8日做的兩次實驗，分別保存為20030508a和20030508b。4.2.4為了防止儲存實驗結(jié)果的電腦發(fā)生系統(tǒng)崩潰、硬件故障等問題導致實驗結(jié)果丟失、無法查詢等情況，每個月的實驗結(jié)果記錄文件都要用移動存儲設(shè)備（如軟盤、USB硬盤等）拷貝到另一部PC機上做備份；一年的數(shù)據(jù)要用刻錄機刻制一張CD光盤備份儲