高效液相色譜法測(cè)定魚腥草中槲皮素的含量

1、    高效液相色譜法測(cè)定魚腥草中槲皮素的含量        摘要目的：建立魚腥草中槲皮素的反相高效液相色譜法，并用該法對(duì)不同產(chǎn)地魚腥草中槲皮素的含量進(jìn)行測(cè)定。方法：采用Alltima C18硅膠柱，以乙腈-0.4%磷酸（45：55）為流動(dòng)相；370nm波長(zhǎng)處檢測(cè)；流速： 1.0ml.min-1；柱溫：30。結(jié)果：線性范圍為0.241.20g，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6，平均回收率為96.30%,RSD=1.19%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，適合于對(duì)魚腥草進(jìn)行質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞反

2、相高效液相色譜法；魚腥草；槲皮素中分類號(hào)R927.2 DETERMINATION OF QUERCETINUM IN HOUTTUYNIA CORDATA THUNB BY HPLCLiu Wenyao(Institute for Drug and Instrument Control of PLA Beijing100071)Liang Aijun，Bai Hao(Department of Chinese Medicine,First Medical University510515)AbstractAIM To develop a HPLC method for determinatio

3、n of quercetinum and study the difference of Houttuynia cordata Thunb from different districts.METHODS Quercetinum was determined by HPLC on Alltima C18 column 250mm(4.6mm,5m) at 30 with acetonitrile-0.4% phosphoric acid ( 4555) as the mobile phase.Detection wavelength was 370nm. The flow rate was 1

4、.0ml/min.RESULTS The calibration curve of quercetinum was 0.241.20g(r=0.999 6).The average recovery of quercetinum were 96.30%（RSD=1.19%）.CONCLUSION The method was simple and accurate and apt to control the quality of Houttuynia cordata Thunb.Key wordsHPLC；Houttuynia cordata Thunb；Quercetinum魚腥草為三白草

5、科蕺菜屬植物蕺菜（Houttuynia cordata）的全草，具有清熱解毒、止咳化痰之功效，尤其抗菌、抗病毒作用明顯1。魚腥草中含魚腥草素（癸酰乙醛）、槲皮甙、槲皮素、蘆丁、金絲桃甙等黃酮甙及氯原酸、谷甾醇、石竹烯、芳樟醇、檸檬烯等2。其中所含以槲皮素為甙元的黃酮甙槲皮甙、蘆丁、金絲桃甙等相對(duì)較多，槲皮素的含量測(cè)定方法有薄層掃描法、高效液相色譜法等3。本法選擇先用酸水解，再測(cè)定其甙元槲皮素的含量來控制本品質(zhì)量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。1儀器與試藥高效液相色譜儀：HP1050 DAD 系統(tǒng)（美國(guó)惠普公司）；試劑：水為超純水；乙腈為色譜純；其余均為分析純；對(duì)照品：槲皮素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；

6、樣品：分別購(gòu)自北京和河北安國(guó)。2實(shí)驗(yàn)條件2.1色譜條件色譜柱：Alltima C18 (5um,4.6mm×250mm)，流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸（45：55），流速：1.0 ml.min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：370nm，柱溫：30。按以上條件分析，樣品分離色譜見1。1槲皮素對(duì)照品與樣品色譜A 對(duì)照品B 樣品2.2檢測(cè)波長(zhǎng)的確定槲皮素對(duì)照品色譜峰在200nm600nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在258nm、370nm處有最大吸收，但在258nm處槲皮素峰與其他雜質(zhì)峰未能達(dá)到基線分離，在370nm處可達(dá)到基線分離，故選擇以370nm處為檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果見2。2樣品測(cè)定成分與對(duì)照品光譜比較1 槲皮素對(duì)照

7、品2 樣品3實(shí)驗(yàn)方法3.1供試品溶液的制備取魚腥草藥材適量，研細(xì)，精密稱取1g，加5%硫酸乙醇溶液40ml，置水浴上加熱回流4h，趁熱濾過，殘?jiān)右掖?ml洗滌，合并濾液，加乙醇稀釋至50ml，作為供試品溶液。3.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取槲皮素對(duì)照品適量，加乙醇制成60g.ml-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。3.3樣品測(cè)定方法準(zhǔn)確吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各5l，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件，依法測(cè)定。3.4線性關(guān)系的考察取濃度為60g.ml-1的槲皮素對(duì)照品乙醇溶液，分別進(jìn)樣4、8、12、16、20l，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，槲皮素進(jìn)樣量（g）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，

8、計(jì)算得回歸方程為：Y=358634X+4502,r=0.999 6。表明測(cè)定成分在0.241.20g范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。3.5精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液5l，重復(fù)進(jìn)樣5次，槲皮素峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.83%。3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液5l，按3.3法測(cè)定，結(jié)果表明供試品在4h內(nèi)有良好的穩(wěn)定性。3.7回收率試驗(yàn)取已知含量樣品加入對(duì)照品適量，依法測(cè)定，結(jié)果平均回收率為96.30%，RSD=1.19%（n=5）。3.8樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各5l，按上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中槲皮素甙元類黃酮的含量，不同產(chǎn)地樣品的測(cè)定結(jié)果見表1。表1魚

9、腥草中槲皮素的含量測(cè)定結(jié)果魚腥草槲皮素含量（%） 河北安國(guó)(1)0.33河北安國(guó)(2)0.20河北安國(guó)(3)0.41北京0.43注：購(gòu)自河北安國(guó)的魚腥草分(1)(2)(3)為不同批號(hào) 4討論4.1為了使槲皮素甙元類黃酮甙均水解為甙元，選用5%硫酸乙醇加熱回流水解。實(shí)驗(yàn)表明，水解4h已基本水解完全。4.2流動(dòng)相分別選擇了甲醇-0.4%磷酸溶液（5545）、（7030）、（4060）；乙腈-0.4%磷酸溶液（3070）；（4555）等進(jìn)行考察，結(jié)果以乙腈-0.4%磷酸溶液（4555）分離效果好。作者簡(jiǎn)介：劉文堯，男，學(xué)士，藥師。作者單位：劉文堯（中國(guó)人民解放軍總后衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所北京100071）白皓（中國(guó)人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué)中藥系廣州510515）參考文獻(xiàn)：1陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用（