鹽酸環(huán)丙沙星注射液的高效液相色譜測定-

1、鹽酸環(huán)丙沙星注射液的高效液相色譜測定-    核心提示：鹽酸環(huán)丙沙星注射液的高效液相色譜測定摘要：建立測定鹽酸環(huán)丙沙星注射液中鹽酸環(huán)丙沙星含量的高效液相色譜檢測方法。色譜柱為Gemini C18110A( 250 mm×4.60 mm,5 m)，流動相.鹽酸環(huán)丙沙星注射液的高效液相色譜測定摘要：建立測定鹽酸環(huán)丙沙星注射液中鹽酸環(huán)丙沙星含量的高效液相色譜檢測方法。色譜柱為Gemini C18110A( 250 mm×4.60 mm,5 m)，流動相為0.025 mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)pH至3.0±0.1)-乙腈(752

2、5)，檢測波長277 nm，流速1.0 mL/min，進樣量10 L。在12.5 g/mL200 g/mL濃度范圍內(nèi)，鹽酸環(huán)丙沙星的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 4(n5)，平均回收率為99.58%。該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏，可用于測定鹽酸環(huán)丙沙星注射液的含量。關(guān)鍵詞：鹽酸環(huán)丙沙星；注射液；高效液相色譜法；含量測定鹽酸環(huán)丙沙星屬于氟喹諾酮類廣譜抗菌藥，在獸醫(yī)臨床上，用于敏感細(xì)菌和支原體所致家畜、禽類及小動物的各種感染性疾病。此藥具有抗菌譜廣、抗菌活性強、吸收良好、體內(nèi)分布廣泛、抗菌作用獨特、無交叉耐藥性等特點1-2，醫(yī)學(xué)上已廣泛應(yīng)用3-5。鹽酸環(huán)丙沙星注射液在獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2

3、003年版已有收載，該標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法測定含量6。此法專屬性不強，準(zhǔn)確性不及高效液相色譜法，作為生產(chǎn)過程中中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法較適合。筆者采用高效液相色譜法測定鹽酸環(huán)丙沙星注射液的含量6-10，經(jīng)與紫外分光光度法11比較12-13，結(jié)果基本一致，而且準(zhǔn)確性高，專屬性和可信度強。1材料與方法1.1材料Agilent 1200型高效液相色譜儀，CP225D型電子天平，UV-2450型紫外可見分光光度計，pHS-3C型精密pH計。鹽酸環(huán)丙沙星對照品，批號為H010105，含量100.0%，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)；鹽酸環(huán)丙沙星(原料)，批號為HB070945，浙江新華制藥有限公司生產(chǎn)；鹽酸環(huán)丙

4、沙星注射液，規(guī)格為10 mL含0.2 g，批號為20080601,20080602,20080603，廣東大華農(nóng)動物保健品股份有限公司生產(chǎn)；磷酸、鹽酸、三乙胺為分析純；乙腈為色譜純。1.2方法1.2.1試劑的配備1.2.1.1鹽酸溶液(0.1 mol/L)取鹽酸9 mL，加水至1 000 mL，搖勻，備用。1.2.1.2磷酸溶液(0.025 mol/L)取磷酸1.71 mL，加水至1 000 mL，搖勻，備用。1.2.2色譜條件色譜柱：填料Gemini 5 m C18110A，尺寸：250 mm×4.60 mm 5 micron；流動相：0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)pH至

5、3.0±0.1)-乙腈(7525)；檢測波長277 nm；流速1.0 mL/min；進樣量10 L。1.2.3繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線取鹽酸環(huán)丙沙星對照品0.012 5、0.025、0.05、0.1、0.2 g精密稱量，分別置100 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；各精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，制成濃度分別為12.5、25、50、100、200 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，參照高效液相色譜法14測定。1.2.4系統(tǒng)適用性精密量取鹽酸環(huán)丙沙星注射液(批號20080601)5 mL，按1.2.3方法稀釋并測定。1.2.5穩(wěn)定性試驗精密量取鹽酸環(huán)丙沙星注射液(批號

6、20080601)5 mL，置100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，放置0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h，按1.2.3方法測定。1.2.6空白試驗按處方比例稱取輔料適量，制備不含鹽酸環(huán)丙沙星的空白樣品，按1.2.3方法測定。1.2.7回收試驗取在105 干燥至恒重的鹽酸環(huán)丙沙星對照品50、100、200 mg各3份，精密稱量，分別置于100 mL容量瓶中，按處方量加入其他輔料，加溶劑溶解，搖勻，制成小樣，分別精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻；按1.2.3方法測定峰面積。1.

7、2.8精密度試驗取在105 干燥至恒重的鹽酸環(huán)丙沙星原料藥(批號HB070945)3份，各約100 mg，精密稱量，分別置100 mL容量瓶中，按處方量加入其他輔料，加溶劑溶解，搖勻，制成3份注射液小樣，分別精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為測定鹽酸環(huán)丙沙星注射液精密度試驗用溶液，另取鹽酸環(huán)丙沙星對照品適量，按1.2.3項下方法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算。1.2.9高效液相色譜法與紫外分光光度法測定鹽酸環(huán)丙沙星注射液含量的比較。1.2.9.1高效液相色譜法取批號為20080601、20080602、20080603的鹽酸環(huán)丙沙星注射液，精密量取5 mL，按1

8、.2.3方法稀釋并測定，記錄色譜圖。另取鹽酸環(huán)丙沙星對照品適量，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算含量。1.2.9.2紫外分光光度法參照文獻6，取批號20080601,20080602,20080603的鹽酸環(huán)丙沙星注射液，精密量取5 mL，分別置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，按照紫外分光光度法，在277 nm波長處測定吸光度，按環(huán)丙沙星(C17H18FN3O3)的吸收系數(shù)為1 266.1計算出含量。1.2.9.3紫外分光光度法參照文獻13，取批號20080601,2008

9、0602,20080603的鹽酸環(huán)丙沙星注射液，精密量取5 mL，分別置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。另取鹽酸環(huán)丙沙星對照品適量，照紫外分光光度法，在277 nm波長處測定吸光度，并計算出含量13。2結(jié)果2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見表1。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A63.765C134.15(r0.999 4，n5，C的單位為g/mL)。結(jié)果表明，在12.5 g/mL200 g/mL的濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系(圖1

10、)。     表1標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積  Table 1The peak-area of standard solution 濃度/(g·mL1) Concentration12.52550100200峰面積AUC844.11 683.03 363.26 692.112 797.4圖1鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1The standard curve ofciprofloxacin hydrochloride2.2系統(tǒng)適用性結(jié)果連續(xù)進樣6次，所得峰面積的RSD為0.14%。按鹽酸環(huán)丙沙星峰計算，理論板數(shù)為10 922，保留時間約為3.5

11、min。2.3穩(wěn)定性試驗結(jié)果從表2可見，鹽酸環(huán)丙沙星注射液在2.5 h內(nèi)峰面積基本保持不變，穩(wěn)定性良好。表2鹽酸環(huán)丙沙星注射液的穩(wěn)定性試驗結(jié)果Table 2The stabilitytest of ciprofloxacin hydrochloride injection時間/minTime00.51.01.52.02.5峰面積AUC6 143.46 142.46 156.66 163.26 159.96 149.92.4空白試驗結(jié)果 結(jié)果無吸收，不干擾測定，符合要求。2.5回收試驗結(jié)果按下式計算含量，并求出回收率，平均回收率為99.58%，RSD為0.38%，結(jié)果見表3。式中A為測得的峰面積

12、，N為稀釋倍數(shù)，V為量取樣品的體積(mL)，P為樣品規(guī)格(10 mL0.2 g)；134.15為標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距，15.68×103為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的倒數(shù)。含量%=15.68×10-3×（A-134.15）×NV×P表3鹽酸環(huán)丙沙星注射液回收率試驗結(jié)果Table 3The recovery rate of ciprofloxacin hydrochloride injection序號 No.稱樣量/mg Added quantity測得量/mg Determined quantity回收率/% Recovery rate平均回收率/% Averag

13、erecovery rate變異系數(shù)/% RSD150.0349.6199.16250.0649.9899.84350.0249.6299.204100.08100.0499.965100.0199.5399.5299.580.386100.05100.10100.057200.07198.7599.348200.11200.0199.959200.05198.3999.17結(jié)果表明，鹽酸環(huán)丙沙星注射液回收率試驗符合要求。 2.6精密度試驗結(jié)果鹽酸環(huán)丙沙星注射液含量的RSD為0.18%，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，本法具有良好的精密度。2.7幾種測定方法結(jié)果的比較結(jié)果見表5。表4精密度試驗結(jié)果Tab

14、le 4Precision test of ciprofloxacin hydrochloride injection測定次數(shù)Test times123456含量/%Content100.15100.2199.8799.7399.94100.01變異系數(shù)RSD/%0.18表5測得鹽酸環(huán)丙沙星注射液中鹽酸環(huán)丙沙星的含量Table 5Determination of ciprofloxacin hydrochloride content ininjection批號 Lot number含量/%Content高效液相色譜法HPLC紫外分光光度法1UV1紫外分光光度法2UV22008060199.9599.9299.8920080602100.1299.9699.942008060399.9199.98100.05結(jié)果表明，高效液相色譜法與紫