鹽酸克倫特羅的檢測(cè)方法

1、鹽酸克倫特羅的檢測(cè)方法科技信息職教與成教 鹽酸克倫特罵硇楦測(cè)方法河南科技大學(xué)林業(yè)職業(yè)學(xué)院劉榮森 摘要 肉食中的鹽酸克倫特羅嚴(yán)重危害人體健康.檢測(cè)鹽酸克倫特羅殘留常用的方法有氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法,高效液相色譜法，酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法，毛細(xì)管電泳'-（CE）等,本文分析了各方法的優(yōu)缺點(diǎn)，指 出了今后的研究方向 . 關(guān)鍵詞 鹽酸克倫特羅檢測(cè)方法研究進(jìn)展中央電視臺(tái) 2011 年 3.15晚會(huì)上 ,曝光了一些地方在動(dòng)物飼養(yǎng)中濫用 "瘦肉精" 的問題."瘦肉精"是鹽酸克倫特羅的俗稱 ,通用名稱 :Clenbuterol（CLB）,化學(xué)名稱:d （叔丁氨基）甲

2、基卜4 一氨基一 3,5二氯苯甲醇鹽酸鹽，分子式:C.:H.C12N20?HC1,結(jié)構(gòu)式：H31. l鹽酸克倫特羅是一種B:一受體激動(dòng)劑，具有蛋白同化作用，可以減少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被濫用于飼養(yǎng)業(yè),造成該藥在動(dòng)物體內(nèi)蓄積,尤其是肝臟組織中的濃度較高.人類食用含有克倫特羅殘留的肉品后會(huì)出現(xiàn)頭暈,心悸 ,手指震頗等中毒癥狀.濫用瘦肉精已成為重大的食品安全問題.中國嚴(yán)禁鹽酸克倫特羅等在動(dòng)物生產(chǎn)中使用 .但目前非法使用情況仍非常嚴(yán)重.近幾年來,接連發(fā)生數(shù)起人食用有CLB 殘留的肉品中毒事件 .造成 CLB 屢禁不止的原因一方面是利益驅(qū)使;另一方面是現(xiàn)在檢測(cè) CLB 的方法 ,手段還

3、不完善,急需建立宰前監(jiān)測(cè)體系和準(zhǔn)確,迅速 ,方便 ,精確的檢測(cè)方法.檢測(cè)CLB殘留常用的方法有氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法（GCMS）,高效液相色譜法（HPLC）,酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法（ELISA）,毛細(xì)管電泳法(CE)等.1 .氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法(GC MS)氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法是我國 CLB 測(cè)定中的確證性方法 fNY/T468 2001.是最常用的 CLB 測(cè)定方法 ,能在多種殘留物同時(shí)存在 情況下對(duì)某種特定的殘留物進(jìn)行定性,定量分析 .具有靈敏度高 ,假陽性率低等特點(diǎn).測(cè)定時(shí)一般需要柱前衍生,最常用的衍生試劑是雙三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本辦法具有前處理過程煩瑣，檢測(cè)時(shí)間長 ,需貴

4、重儀器等缺點(diǎn).吳銀良等建立了同時(shí)測(cè)定動(dòng)物肝組織中鹽酸克倫特羅和鹽酸萊克多巴胺殘留量的固相萃取一氣相色譜一質(zhì)譜分析方法.樣品在堿化條件下經(jīng)乙酸乙酯和異丙醇混合溶劑提取,濃縮后用乙酸乙酯溶解,經(jīng)SCX固相萃取(SPE)柱凈化，經(jīng)氮?dú)獯蹈珊笥秒p三甲基硅基三氟乙酰氨 (BSTFA)衍生，外標(biāo)法定量.鹽酸克倫特羅的檢出限為 O.301g/kg鹽酸 克倫特羅添加濃度在1.O5.01zg/kg范圍內(nèi)，添加回收率為77.4% 88.3%;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.1%5.1%.胡明友等21建立了克倫特羅 的測(cè)定方法,用甲醇提取,正己烷脫脂凈化,然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)冷凍離心濃縮后加 0.1mmol/L 的鹽酸溶解,加

5、樣到凈化柱上,用 4%氨化乙酸乙酯洗脫后氮?dú)獯蹈?甲苯溶解后加BSTFA 衍生 ,用氣相色譜一質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定，內(nèi)標(biāo)定量.結(jié)果表明：添加5650-9540x10(8)濃度水平的克倫 特羅,方法回收率在89.3%107%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.3%16.5%,線性 相關(guān)系數(shù)r為0.998，克倫特羅的最低檢測(cè)限為2.0xl0foo).PeterBa- tioens等31用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定了牛，羊,豬糞便中的鹽酸克倫 特羅含量,最低檢測(cè)限為2n.2 .高效液相色譜法(HPLC)高效液相色譜法是檢測(cè) CLB 殘留常見的分析檢測(cè)手段之一,適合大批量樣品的快速測(cè)定.我國已將HPLC 法作為檢測(cè) CLB 殘

6、留的半確證法 .HPLC 法中常用的檢測(cè)器有電化學(xué)檢測(cè)器,紫外檢測(cè)器;其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)精確度高，其最低檢測(cè)限范圍為115ng/g,而且假陽性率低，與 GC MS 法相比樣品不必衍生;缺點(diǎn)是檢測(cè)過程繁瑣,檢測(cè)時(shí)間長,需貴重儀器,難于操作,價(jià)格昂貴.吳慶潔等用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定畜禽組織中鹽酸克倫特羅和 4 種抗生素（土霉素,四環(huán)素 ,金霉素 ,氯霉素）.用 50%的三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)，通過固相萃?。╯PE）小柱進(jìn)彳T活化，進(jìn)行高效液相色譜分析.本法對(duì)鹽酸克倫特羅的最低檢出量為1.25ng鹽酸克倫特羅的回收率85.4%93.8%.顧國平等用5%HClO超聲提取肉樣中的鹽酸克倫特羅 ,80%水浴沉淀雜

7、質(zhì),然后用固相萃取柱預(yù)分離和富集,用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定,以 SunfireCl84.6mX150mm,3.9txm 分離柱為固定相 ,用紫外二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量;在該色譜條件下鹽酸克倫特羅在6.3rain左右可達(dá)到基線分離.方法的回收率在81.6%103.7%.相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.76%7.94%劉志梅等選用7cm的聚丙烯中空纖維，在樣品溶液pH=l1，室溫條件下萃取20min后，將有機(jī)溶劑在氮?dú)饬飨麓蹈?用 151xL 甲醇溶解 ,進(jìn)行液相色譜分析.結(jié)果表明:在優(yōu)化的試驗(yàn)條件下，克倫特羅的富集倍數(shù)為78倍，線性范圍在3060001g/kg之間,線性相關(guān)系數(shù)O.9995,檢出限2

8、.4lg/kg.將該方法用于豬肉組織中克倫特羅的測(cè)定,低,中,高 3種濃度的加標(biāo)回收率分別為 84.9%,91.4%和95.0%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為6.3%,5.8咐口 4.6%該方法操作簡便,環(huán)境友好,具有較高的靈敏度,適于豬肉中鹽酸克倫特羅殘留的檢測(cè).高效液相色譜法也經(jīng)常和質(zhì)譜聯(lián)用,實(shí)現(xiàn)分析過程的自動(dòng)化.毛麗莎等 171 通過液相色譜一質(zhì)譜以 MRM 方式檢測(cè),同時(shí)測(cè)定了豬肉組織中沙丁胺醇,萊克多巴胺和克倫特羅.樣品用5%高氯酸溶液振蕩提取,反相 c18 小柱凈化濃縮,以 D3 一沙丁胺醇為內(nèi)標(biāo)定量.測(cè)定克倫特羅的線性范圍均為0.110.OeL,線性相關(guān)系數(shù)0.9992定量檢出限

9、為0.5g/kg,回收率為88-4%96.2%該方法簡便，靈敏度好,選擇性好.3 .酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法（ELISA）ELBA 法是檢測(cè)鹽酸克倫特羅較高效的免疫分析法,測(cè)定的基礎(chǔ)是免疫學(xué)抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)和高效的酶促反應(yīng) .ELISA 法檢測(cè)限可達(dá)0.05r-gs實(shí)際應(yīng)用中常使用EHSA試劑盒該方法具有樣品不需前處理或前處理簡單,一次可檢測(cè)樣品數(shù)多,操作簡便,快速等特點(diǎn).但假陽性率較高 .楊興武等8】應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)豬尿液中鹽酸克侖特羅殘留.結(jié)果表明，鹽酸克侖特羅的線性范圍為2002000ng/kg,最小檢出限為 100nL,樣品不用前處理可直接檢測(cè)，1個(gè)樣品的2個(gè)平行樣測(cè)定時(shí)間為4

10、5min.該方法回收率在81.9%106.8%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）d于 9%.李平等（采用直接競(jìng)爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)動(dòng)物組織中的鹽酸克倫特羅殘留量進(jìn)行了快速檢測(cè).將 CBL 與蛋白質(zhì)載體偶聯(lián)制備了CBL BSA 和 HRP CBL 結(jié)合物 ,以 CBL BSA 免疫實(shí)驗(yàn)兔獲得特異性抗體 ,并建立了CBL 殘留直接競(jìng)爭EHSA 檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒.結(jié)果表明，檢測(cè)線Tt范圍0.162.5ng/mL,檢測(cè)低限為0.10ng/mL,尿，肝， 肉和飼料的加標(biāo)回收率為60.3%115.0%;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差fRSD1為3.4% 7-2%.4 .毛細(xì)管電泳法（CE）毛細(xì)管電泳法測(cè)定鹽酸克倫特羅殘留具有

11、重復(fù)性好,操作相對(duì)簡單 ,所需樣品數(shù)量少等特點(diǎn).高楊菲等峒毛細(xì)管電泳法同步分離檢測(cè)肉制品中 "瘦肉精 "及其替代物法,整個(gè)分離在12min 內(nèi)完成 .以 90mmo1/L 的檸檬酸三鈉（pH5.6）為電泳緩沖液，8kV分離電壓,200nm檢測(cè)波長，在25C下可使克倫特羅,沙丁胺醇,特布他林和萊克多巴胺達(dá)到分離,分離度分別為1.90,2.73和2.17，回收率為92.4%102.0%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）Ib于3.2%,結(jié)果令人滿意.王偉宇等采用小型化毛細(xì)管電泳一電化學(xué)檢測(cè) 技術(shù)測(cè)定了豬尿和豬飼料中的克倫特羅及其替代品萊克多巴胺和沙丁胺醇 ,以直徑300m 的碳圓盤電極為工

12、作電極,檢測(cè)電極電位為+0.95V,在 100mmo1/L 的硼酸鹽運(yùn)行緩沖液中 ,3種組分在 7min 內(nèi)實(shí)現(xiàn)了分離.被測(cè)物濃度與峰電流在3 個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,檢測(cè)限為1.20x10-2.06x10-Tg/ml.該方法簡單可靠，已成功應(yīng)用于豬尿和豬飼料樣品中 3 種 B 一興奮劑的測(cè)定,是一種有效的食品安全分析檢測(cè)方法5.其他方法樊曉博等采用時(shí)間分辨熒光免疫分析建立了簡便,快速 ,靈敏的鹽酸克倫特羅檢測(cè)方法.以自制鹽酸克倫特羅單克隆抗體包被96 孔微孑 L 板作為固相抗體 ,Eu 標(biāo)記抗原與樣品中的 CBL 競(jìng)爭結(jié)合抗體,建立直接競(jìng)爭熒光免疫分析體系.實(shí)驗(yàn)表明:方法靈敏度為0.

13、021xg/L,樣品回收率為91%101%,與沙丁胺醇，萊克多巴胺等結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率均小于1%.方法靈敏度高,特異性強(qiáng),且操作簡單,完全可以滿足現(xiàn)有實(shí)際檢測(cè)需求.曾文芳等【'3l 建立了用離子色譜一電化學(xué)修飾方法l 鋇 0 定鹽酸克侖特羅.采用離子色譜分離,碳納米管修飾電極,直流安培檢測(cè),DionexAG9 - HC 保護(hù)柱(2mmx50mm),8mmol/L 碳酸鈉 +10%甲醇為淋洗液測(cè)定鹽酸克侖特羅.鹽酸克侖特羅的檢測(cè)限是0.0003mg/L;樣品測(cè)定的回收率分別為96%103%.陳麗莉等【鍛計(jì)了一種快速檢測(cè)豬肉中鹽酸克倫特羅的流動(dòng)注射一化學(xué)發(fā)光免疫分析方法.采用過氧化脲作

14、為luminolCHI20?Hz0zHRP化學(xué)發(fā)光體系氧化劑，聯(lián)苯硼酸作為207.1. 科技信息.職教與成教增強(qiáng)劑,流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)競(jìng)爭免疫反應(yīng)后的上清酶標(biāo)復(fù)合物.在最優(yōu)條件下，測(cè)定克倫特羅的線性范圍0.059zg/L(r=-0.9959),檢出限 為0.021L.該方法已經(jīng)成功應(yīng)用于豬肉中克倫特羅殘留的檢測(cè).胡華軍噪用巰基丁二酸作為表面修飾劑 ,水相法合成水溶性的 CdTe/ZnSe 核殼量子點(diǎn),然后在N 一羥基琥珀酰亞胺(NHS) 的作用下,將 CdTe/ZnSe核殼量子點(diǎn)與抗克倫特羅多克隆抗體(Anti CLBpAb) 連接 .CdTe/ZnSeAnti CLBpAb偶聯(lián)物能識(shí)別克

15、倫特羅一 BSA抗原(CLB BSA).光譜分析 表明，量子點(diǎn)與抗體連接后熒光增強(qiáng)，熒光峰位從628nm紅移至635nm.將 合成的CdTe/ZnSe-Anti-CLBpAb偶聯(lián)物作為指示克倫特羅(CLB)分子 的熒光標(biāo)記物,制備出一種用于檢測(cè)CLB 的免疫層析試紙條,其最低檢測(cè)量可達(dá)1Ixg/L.現(xiàn)常用的鹽酸克倫特羅的檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn) ,研究更快速,高效,檢測(cè)限更低,操作簡單,費(fèi)用低廉的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)方法是今后的發(fā)展方向.參考文獻(xiàn)1 吳銀良,李曉薇,劉素英等 .氣相色譜一質(zhì)譜法測(cè)定肝臟組織中鹽酸克倫特羅和鹽酸菜克多巴胺J分析化學(xué),2006,34(8):1083-10862 胡明友,邵國建,郭和光

16、.GC MS 測(cè)定肝臟中克倫特羅方法的探討J沖國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010(8):186718683PeterBatioens',DirkCourtheyn,HuberF,eta1.GasChromatographicTandemMassSpectrometricanalvsisofclenbuterolresiduesinfaeces jJournalofChromatograF'hyA.1996,750(1 2):133 1394 吳慶潔 ,石朝輝 ,蔡江帆.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定畜禽組織中4 種抗生素及鹽酸克倫特羅殘留量 I. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志 ,2010(7):1642 1

17、6445 顧國平,王森,周亞蓮等 -固相萃取高效液相色譜法測(cè)定豬肉中鹽酸克倫特羅殘留 1. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2008(5):624 6266 劉志梅 ,陳永艷 ,楊秀敏等.中空纖維液相微萃取高效液相色譜法測(cè)定豬肉中鹽酸克倫特羅殘留 I 中國食品 ,2009,9(2):171 1757 毛麗莎,劉紅河,陳慧玲.液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定豬肉組織中 3 種 B 一激動(dòng)劑 J. 中國熱帶醫(yī)學(xué),2009,9(7):1356 13588 楊興武 ,劉振國 ,周蓉等應(yīng)用 ELISA 檢測(cè)肉豬尿液中鹽酸克侖特羅方法的研究111.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2003(5):A 109 李平 ,潘榮生,周洪斌等.動(dòng)物組織中鹽酸

18、克倫特羅殘留ELISA檢測(cè)試劑盒的研制J.免疫學(xué)雜志，2006,22(6):17815110 高楊菲 ,許學(xué)書毛細(xì)管電泳同步分離檢測(cè)"瘦肉精"及其替代物J.食品工業(yè),2008(3):71-7411王偉宇,張玉蓮,邢曉平等.小型化毛細(xì)管電泳! 電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)定豬尿和豬飼料中的 B 一興奮劑 J 色譜 ,2()O8,26(2):228 23112樊曉博，楊金易，高秀杰等Eu標(biāo)抗原鹽酸克倫特羅的時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)1.食品科學(xué),2010,31(20):307 31013 曾文芳,陳永欣,吳龍等l 離子色譜電化學(xué)修飾法測(cè)定鹽酸克侖特羅11沖國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007,17(8):13

19、5尸135214 陳麗莉,章竹君,付愛華流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)豬肉中的鹽酸克倫特羅殘留 1.分析實(shí)驗(yàn)室 ,2011,30(2):6-815胡華軍，付濤，張明洲等.CdTe/ZnSe核殼量子點(diǎn)免疫層析試紙條檢測(cè)克倫特羅的研究T.分析化學(xué),2010,38(12):17271731護(hù)理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)跬教學(xué)新搽i 刁寶雞職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)分院高麗萍 摘要 護(hù)理學(xué)基礎(chǔ)是一門實(shí)踐性很強(qiáng)的學(xué)科,也是護(hù)理專業(yè)一門重要學(xué)科, 要使護(hù)生學(xué)好掌握好,我們必須改革傳統(tǒng)的教學(xué)模式 ,以多元化的教學(xué)方式授課,來提高護(hù)生的學(xué)習(xí)興趣, 能力 ,以適應(yīng)醫(yī)學(xué)護(hù)理事業(yè)的發(fā)展 . 關(guān)鍵詞 護(hù)理學(xué)基礎(chǔ)實(shí)踐教學(xué)教學(xué)改革護(hù)理學(xué)基礎(chǔ)是護(hù)理專業(yè)

20、課程的主干課程,是一門實(shí)踐性應(yīng)用性學(xué)科,可使護(hù)生具備從事護(hù)理工作所必須的基本知識(shí),基本技能 ,基本情感的專業(yè)基礎(chǔ)課.隨著社會(huì)的發(fā)展,醫(yī)學(xué)事業(yè)的不斷創(chuàng)新,過去的護(hù)理醫(yī)學(xué)模式已不再滿足于臨床工作,這就要求護(hù)理教師在臨床教學(xué)工作中,必須改革傳統(tǒng)的教學(xué)模式,提高護(hù)理教學(xué)質(zhì)量,使大多數(shù)護(hù)生完成教學(xué)目標(biāo),強(qiáng)化護(hù)生的動(dòng)手實(shí)踐能力,做到理論和實(shí)踐的有機(jī)結(jié)合.因此 ,筆者在教學(xué)方法上做一下嘗試:1,道德素質(zhì)的培養(yǎng)近代護(hù)理學(xué)創(chuàng)始人南丁格爾將護(hù)理的發(fā)展帶進(jìn)新紀(jì)元 ,并提出和實(shí)踐了護(hù)理者必備的職業(yè)道德和倫理準(zhǔn)則 .1973年國際護(hù)士節(jié)學(xué)會(huì)修訂的護(hù)士倫理學(xué)國際法中規(guī)定:護(hù)士的基本職責(zé)包括"增進(jìn)健康 ,預(yù)防疾病

21、,恢復(fù)健康和減輕痛苦" 四個(gè)方面.與此相適應(yīng),護(hù)理道德的實(shí)質(zhì)在于 :珍視人的生命,尊重人的尊嚴(yán)和權(quán)利,為個(gè)人 ,為家庭 ,公眾提供高質(zhì)量的健康服務(wù).l】現(xiàn)代醫(yī)療護(hù)理是一種醫(yī)生,護(hù)士 ,患者之間幫助與被幫助的關(guān)系,護(hù)士承擔(dān)著各種各樣的角色,是護(hù)理工作的直接參與者,工作中應(yīng)協(xié)調(diào)好各方面的關(guān)系,才能使醫(yī)療護(hù)理井然有序,提高質(zhì)量.以促進(jìn)人民的健康為宗旨,視患者為親人.因此,我們要幫助學(xué)生樹立正確的人生觀,價(jià)值觀 ,職業(yè)責(zé)任感和道德感,樹立牢固的專業(yè)思想,養(yǎng)成精益求精,一絲不茍的工作作風(fēng),有吃苦耐勞的奉獻(xiàn)精神,熱愛護(hù)理事業(yè),以促進(jìn)患者的健康,視患者為親人為宗旨,為護(hù)理事業(yè)奉獻(xiàn)一生.2,傳統(tǒng)的教

22、學(xué)模式在護(hù)理學(xué)基礎(chǔ)的實(shí)踐教學(xué)過程中 ,傳統(tǒng)的教學(xué)模式是課前準(zhǔn)備一教師示教一學(xué)生回復(fù)一學(xué)生練習(xí)一抽查考核.這些教學(xué)方法如果重復(fù)二次 ,學(xué)生可能會(huì)認(rèn)真耐心的學(xué)習(xí),可長期用此教學(xué)方法會(huì)讓學(xué)生厭煩 ,甚至?xí)X得是一種填鴨式教學(xué),以至于對(duì)本門學(xué)科毫無興趣.如今的護(hù)生不同以往的中專生,她們基礎(chǔ)好,理解力強(qiáng),這種單一的教學(xué)模式根本無法滿足她們的求知欲望.3,改革措施3.1 提高教師的綜合素質(zhì)"要想教給學(xué)生一滴水的知識(shí) ,教師必須要有一桶水的知識(shí)",這是我院一位老校長的話.為了滿足護(hù)理事業(yè)的發(fā)展,教師在授課前堅(jiān)持集208.1 .體備課和學(xué)習(xí),討論護(hù)理理論及操作教學(xué)中可能出現(xiàn)的問題及教學(xué)改進(jìn)方法,在教育觀念上將應(yīng)試型轉(zhuǎn)變?yōu)閯?chuàng)新型,素質(zhì)型教育觀;為保證課堂教學(xué)不與臨床應(yīng)用脫節(jié),教師應(yīng)輪流定期到臨床實(shí)習(xí) ,參與臨床一作 ;為了更新 ,提高知識(shí) ,應(yīng)定期在高等學(xué)府進(jìn)行深造學(xué)習(xí),來滿足專業(yè)的需求 .208.2 方法改革208.2.1 應(yīng)用多媒體教學(xué)法多媒體教學(xué)是一種較