蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗(一)(共4頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗（一）蛋白質(zhì)及氨基酸的呈色反應一、目的1了解構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位及主要連接方式。2了解蛋白質(zhì)和某些氨基酸的呈色反應原理。3學習幾種常用的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法。二、呈色反應（一）雙縮脲反應1原理尿素加熱至180左右，生成雙縮脲并放出一分子氨。雙縮脲在堿性環(huán)境中能與Cu2+結(jié)合生成紫紅色化合物，此反應稱為雙縮脲反應。蛋白質(zhì)分子中有肽鍵，其結(jié)構(gòu)與雙縮脲相似，也能發(fā)生此反應?？捎糜诘鞍踪|(zhì)的定性或定量測定。雙縮脲反應不僅為含有兩個以上肽鍵的物質(zhì)所有。含有一個肽鍵和一個CSNH2，CH2NH2，CRHNH2，CH2NH2CHNH2CH2OH或CHOHCH2

2、NH2等基團的物質(zhì)以及一切蛋白質(zhì)或二肽以上的多肽都有雙縮脲反應，但有雙縮脲反應的物質(zhì)不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。 2試劑3操作取少量尿素結(jié)晶，放在干燥試管中。用微火加熱使尿素熔化。熔化的尿素開始硬化時，停止加熱，尿素放出氨，形成雙縮脲。冷后，加10氫氧化鈉溶液約1mL，振蕩混勻，再加1硫酸銅溶液1滴，再振蕩。觀察出現(xiàn)的粉紅顏色。要避免添加過量硫酸銅，否則，生成的藍色氫氧化銅能掩蓋粉紅色。向另一試管加卵清蛋白溶液約1mL和10氫氧化鈉溶液約 2 mL，搖勻，再加1硫酸銅溶液2滴，隨加隨搖。觀察紫玫瑰色的出現(xiàn)。（二）茚三酮反應1原理除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應產(chǎn)生黃色物質(zhì)外，所有-氨基酸及一切蛋白質(zhì)

3、都能和茚三酮反應生成藍紫色物質(zhì)。-丙氨酸、氨和許多一級胺都呈正反應。尿素、馬尿酸、二酮吡嗪和肽鍵上的亞氨基不呈現(xiàn)此反應。因此，雖然蛋白質(zhì)和氨基酸均有茚三酮反應，但能與茚三酮呈陽性反應的不一定就是蛋白質(zhì)或氨基酸。在定性、定量測定中，應嚴防干擾物存在。該反應十分靈敏，1濃度的氨基酸水溶液即能給出反應，是一種常用的氨基酸定量測定方法。茚三酮反應分為兩步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被還原成還原型茚三酮；第二步是所形成的還原型茚三酮同另一個水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質(zhì)。此反應的適宜pH為57，同一濃度的蛋白質(zhì)或氨基酸在不同pH條件下的顏色深淺不同，酸度過大時甚至不顯色。

4、2試劑3操作（1）取2支試管分別加入蛋白質(zhì)溶液和甘氨酸溶液mL，再各加 0.5 mL 0.1茚三酮水溶液，混勻，在沸水浴中加熱12分鐘，觀察顏色由粉色變紫紅色再變藍。（2）在一小塊濾紙上滴一滴0.5甘氨酸溶液，風干后再在原處滴一滴0.1茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干顯色觀察紫紅色斑點的出現(xiàn)。（三）黃色反應1原理含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黃色物質(zhì)，該化合物在堿性溶液中進一步形成深橙色的硝醌酸鈉。反應式如下：多數(shù)蛋白質(zhì)分子含有帶苯環(huán)的氨基酸，所以有黃色反應，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量濃硫酸才有黃色反應。2試劑（1）雞蛋清溶液 100 mL將新鮮雞蛋的蛋清與水按12

5、0混勻，然后用6層紗布過濾。（2）大豆提取液 100 mL將大豆浸泡充分吸脹后研磨成漿狀再用紗布過濾。（3）頭發(fā)（4）指甲（5）0.5苯酚溶液 50mL3操作向7個試管中分別按下表加入試劑，觀察各管出現(xiàn)的現(xiàn)象，有的試管反應慢可略放置或用微火加熱。待各管出現(xiàn)黃色后，于室溫下逐滴加入 10氫氧化鈉溶液至堿性，觀察顏色變化。（四）考馬斯亮藍反應1原理考馬斯亮藍G250具有紅色和藍色兩種色調(diào)。在酸性溶液中，其以游離態(tài)存在呈棕紅色；當它與蛋白質(zhì)通過疏水作用結(jié)合后變?yōu)樗{色。它染色靈敏度高，比氨基黑高3倍。反應速度快，約在2分鐘左右時間達到平衡，在室溫一小時內(nèi)穩(wěn)定。在0.011.0mg蛋白質(zhì)范圍內(nèi)，2試劑（1）蛋白質(zhì)溶液（雞蛋清水=120）5 mL（2）考馬斯亮藍染液 300 mL考馬斯亮藍Gg溶于50 mL 95乙醇中，加100mL85磷酸混勻，配成原液。臨用前取原液15 mL，加蒸