月季的花藥培養(yǎng)

1、課題課題2 2 月季的花藥培養(yǎng)月季的花藥培養(yǎng)一、被子植物花粉粒的形成一、被子植物花粉粒的形成花粉?；ǚ哿?N)花粉壁細胞花粉壁細胞(2N)花藥花藥花絲花絲花粉橫切花粉囊小孢子母細胞4個小孢子(小孢子四分體時期)1個小孢子(單核居中期)1個小孢子(單核靠邊期)花粉管細胞核生殖細胞核花粉母細胞2N(小孢子母細胞)減數(shù)分裂4個小孢子N(四分體時期)4個小孢子N單核期居中期單核期靠邊期有絲分裂4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有絲分裂8個精子雙核期花粉壁細胞兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同?；ǚ勰富ǚ勰讣毎毎?N(小孢子小孢子母細胞母細胞)減數(shù)減數(shù)分裂分裂4個小個小孢子孢子N(四分四分體時期體時期)4個

2、小個小孢子孢子N單核期單核期居中期居中期單核期單核期靠邊期靠邊期有絲有絲分裂分裂4個花粉個花粉管細胞核管細胞核4個生殖個生殖細胞核細胞核有絲有絲分裂分裂8個個精子精子雙核期雙核期雙核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞核。（精子在花粉管中形成）花絲花藥：囊狀結構，內有很多花粉?；ǚ凼腔ǚ勰讣毎葱℃咦幽讣毎┙涍^減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞。雄蕊：花粉的發(fā)育要經歷：四分體時期、單核期、雙核期練習：寫出花粉的發(fā)育過程的發(fā)育過程（學生板書）假如一種生物體細胞有條染色體那么它的小孢子母細胞、小孢子、花粉管細胞核、生殖細胞核各有多少條染色體？如果小孢子母細胞的基因型為

3、AB（兩對基因位于兩對同源染色體上）那么小孢子、花粉管細胞核和生殖細胞核的基因型是什么？小孢子母細胞個小孢子單核居中期單核靠邊期花粉粒 無論哪一種，來源于同一個小孢子的花粉管和生殖核的基因一定相同。、，AB或A或B或。形成原因：主要取決于培養(yǎng)基中的激素的種類及其濃度的比例二、產生花粉植株的兩種途徑合子胚：由合子(受精卵)發(fā)育成的胚(含胚芽、胚軸、根根等)花粉胚：由單倍體性細胞產生的類似合子胚的結構。體細胞胚：在組織培養(yǎng)過程中，某些體細胞在形態(tài)上轉變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結構，發(fā)育過程亦與合子胚類似，被稱為體細胞胚(胚狀體)。三、影響花藥培養(yǎng)的因素三、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇、材料

4、的選擇不同植物的誘導成功率很不相同，就同一種植物來說親本的生理狀況對誘導成功率也有直接影響?；ㄆ谠缙跁r的花藥比后期的更容易產生花粉植物。選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導成功率的重要因素。因為并不是任何時期的花粉都可以經過培養(yǎng)產生愈傷組織或胚狀體?；ǚ郯l(fā)育的過程中，只有某一個時期對離體刺激敏感。一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養(yǎng)的成功率最高。即：最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期為單核靠邊期。選擇單核期以前的花藥接種，質地幼嫩，極易破碎；選擇單核期之后的花藥接種，花瓣已有些松動，又給材料的消毒帶來困難，且難以挑選到單核期的花藥。某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青-鉻

5、礬法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。最常用的方法有醋酸洋紅。1、方法2、培養(yǎng)基組成P58四、操作流程(一)材料的選取通過鏡檢確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。1000mL MS培養(yǎng)基 添加2,4-D 0.4mg KT 0.2mgIAA 4mg 調pH至5.8親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種的密度等對誘導成功都有一定的影響。3、其他因素醋酸洋紅法染色機理 2、醋酸洋紅法染色操作 醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細胞內的染色體易被堿性染料著色染成紅色。將花藥放在載玻片上，加一滴質量分數(shù)1的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。3、焙花青-鉻釩法 花藥應該在卡諾氏固定液

6、中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青-鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。1、酒精處理 (二)材料的消毒無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分?；ɡ儆皿w積分數(shù)為70%的酒精浸泡30秒，立即取出。無菌水清洗。 用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。2、氯化汞處理放入質量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中24分鐘(也可質量分數(shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液)無菌水沖洗3-5次為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。接種花藥培養(yǎng)分化培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定和篩選常常會

7、出現(xiàn)染色體倍性的變化？每個培養(yǎng)瓶接種 （710 ） 個花藥？花藥長出愈傷組織還要轉移到哪？主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成的否則接種后，容易從受傷部位產生二倍體的愈傷組織。與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。(三)接種和培養(yǎng)消毒后的花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。剝離花藥時不要損傷花藥要徹底除去花絲 通常每瓶接種花藥7-10個，25左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 20-30天培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。 將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。 如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內就會產生大量幼

8、小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。 在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化。（主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成的）故需對培養(yǎng)出來的植株作進一步的鑒定和篩選。項目組織培養(yǎng)花藥培養(yǎng)基本理論植物細胞的全能性基本過程外植體脫分化再分化幼苗影響因素選材、營養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照等材料選取一般選擇未開花植株莖上部新萌發(fā)的側枝通常選擇完全未開放的花蕾外植體類型體細胞生殖細胞光照狀況每日用日光燈照12h開始不需要光照，細小植株形成后不需要流程制備MS培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培選材消毒接種培養(yǎng)篩選移栽栽培結果

9、正常植株單倍體植株可育性可育高度不育，秋水仙處理后可育課題成果評價課題成果評價接種是否成功接種是否成功 如果接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體如果接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時轉換培養(yǎng)基，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時轉換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。，以便愈傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。2 2、基因型為、基因型為AaBbAaBb的水稻（條染色體）的花藥通的水稻（條染色體）的花藥通過無菌操作，接入試管后，在一定條件下培養(yǎng)成試管過無菌操作，接入試管后，在一定條件下培養(yǎng)成試管苗。苗。（）愈傷組織是花粉細胞分裂形成的不規(guī)則的細胞（

10、）愈傷組織是花粉細胞分裂形成的不規(guī)則的細胞團，愈傷組織必須從培養(yǎng)基中獲得（）（團，愈傷組織必須從培養(yǎng)基中獲得（）（ ) )和和小分子有機物等營養(yǎng)物質。小分子有機物等營養(yǎng)物質。（）要促進花粉細胞的分裂分化，培養(yǎng)基中應有（）要促進花粉細胞的分裂分化，培養(yǎng)基中應有（）（）（ ）兩種激素。）兩種激素。愈傷組織分化是指愈傷組織形成芽和根，由芽發(fā)育成愈傷組織分化是指愈傷組織形成芽和根，由芽發(fā)育成葉莖。這一過程必須給予光照，其原因是（）利用葉莖。這一過程必須給予光照，其原因是（）利用光能制造有機物促進試管苗生長發(fā)育。光能制造有機物促進試管苗生長發(fā)育。（）試管苗的細胞核中有（）條脫氧核苷酸（）試管苗的細胞核中

11、有（）條脫氧核苷酸鏈。試管苗的基因型有：鏈。試管苗的基因型有： 水水無機鹽無機鹽生長素生長素細胞分裂素細胞分裂素葉葉2424AB Ab aB abAB Ab aB ab3 3（9 9分）草莓生產上傳統(tǒng)的繁殖方式易將所感染的病分）草莓生產上傳統(tǒng)的繁殖方式易將所感染的病毒傳播給后代，導致產量降低。品質變差。運用微型繁殖毒傳播給后代，導致產量降低。品質變差。運用微型繁殖技術可以培育出無病毒幼苗。草技術可以培育出無病毒幼苗。草 莓微型繁殖的基本過程莓微型繁殖的基本過程如下：如下：外植體外植體 愈傷組織愈傷組織 芽、根芽、根 植株植株（1 1）微型繁殖培育無病毒草莓苗時，一般選取）微型繁殖培育無病毒草莓

12、苗時，一般選取_作為外植體，其依據(jù)是作為外植體，其依據(jù)是_ _ _ 。（2 2）在過程）在過程中，常用的中，常用的MSMS培養(yǎng)基主要成分包括大量元培養(yǎng)基主要成分包括大量元素、微量元素和素、微量元素和_，在配制好的培養(yǎng)基中，常常需要，在配制好的培養(yǎng)基中，常常需要添加添加_，有利于外植體啟動細胞分裂形成愈傷組織。，有利于外植體啟動細胞分裂形成愈傷組織。接種后接種后25d25d，若發(fā)現(xiàn)外植體邊緣局部污染，原因可能是，若發(fā)現(xiàn)外植體邊緣局部污染，原因可能是_ 。（3 3）過程）過程中，愈傷組織在誘導生根的培養(yǎng)基中未形成中，愈傷組織在誘導生根的培養(yǎng)基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是根，但分化出了芽，

13、其原因可能是 _莖尖、根尖莖尖、根尖莖尖、根尖不含病毒莖尖、根尖不含病毒有機物有機物植物激素植物激素外植體消毒不徹底外植體消毒不徹底 培養(yǎng)基中生長素類物培養(yǎng)基中生長素類物質和細胞分裂素類物質用量的比值偏低質和細胞分裂素類物質用量的比值偏低項目項目雜交育種雜交育種誘變育種誘變育種多倍體育種多倍體育種單倍體育種單倍體育種處理處理雜交雜交用射線、化學藥用射線、化學藥品處理品處理用秋水仙素處理種用秋水仙素處理種子或幼苗子或幼苗花藥離體培養(yǎng)花藥離體培養(yǎng)原理原理基因重組，把基因重組，把兩親本優(yōu)良性兩親本優(yōu)良性狀組合在同一狀組合在同一后代中后代中用人工方法誘發(fā)用人工方法誘發(fā)基因突變，產生基因突變，產生新性狀

14、和新品種新性狀和新品種抑制細胞分裂中紡抑制細胞分裂中紡錘體的形成，使染錘體的形成，使染色體數(shù)加倍后不形色體數(shù)加倍后不形成兩個細胞成兩個細胞誘導配子直接誘導配子直接發(fā)育成植株，發(fā)育成植株，再用秋水仙素再用秋水仙素加倍成純合體加倍成純合體優(yōu)缺優(yōu)缺點點方法簡便，但方法簡便，但耗時長，需經耗時長，需經多年才能獲得多年才能獲得純合體純合體加速育種進程，加速育種進程，大幅度改變某些大幅度改變某些性狀，但有利個性狀，但有利個體不多體不多器官較大，營養(yǎng)物器官較大，營養(yǎng)物質含量高，但發(fā)育質含量高，但發(fā)育延遲，結實率低延遲，結實率低縮短育種年限，縮短育種年限，但方法復雜，但方法復雜，成活率低成活率低舉例舉例水稻雜

15、交水稻雜交高產量青霉素菌高產量青霉素菌株株三倍體無子西瓜、三倍體無子西瓜、八倍體小黑麥八倍體小黑麥月季花藥培養(yǎng)月季花藥培養(yǎng)人工種子人工種子 人工種子是指通過植物組織培養(yǎng)技術獲得具有人工種子是指通過植物組織培養(yǎng)技術獲得具有胚胚芽、胚根、胚軸等結構的植物胚狀體芽、胚根、胚軸等結構的植物胚狀體，并且用適當方法將胚并且用適當方法將胚狀體包裹起來，用以代替天然種子進行繁殖的一種結構。狀體包裹起來，用以代替天然種子進行繁殖的一種結構。 目前研制的人工種子，是由目前研制的人工種子，是由胚狀體、胚狀體、作為保護性作為保護性外殼的外殼的人工種皮人工種皮和提供發(fā)育所需營養(yǎng)的和提供發(fā)育所需營養(yǎng)的人工胚乳人工胚乳三部

16、分組成三部分組成的。的。能在一定的條件下萌發(fā)生長，形成完整植株。能在一定的條件下萌發(fā)生長，形成完整植株。人工種子的優(yōu)點人工種子的優(yōu)點: :首先，它首先，它解決解決了有些了有些作物品種繁殖能力差、結子困難作物品種繁殖能力差、結子困難或發(fā)芽率低等問題?；虬l(fā)芽率低等問題。第二，人工種子可以第二，人工種子可以工業(yè)化生產工業(yè)化生產，提高農業(yè)的自動化，提高農業(yè)的自動化程度。程度。第三，第三，人工胚乳中除含有胚狀體發(fā)育所需的營養(yǎng)物質人工胚乳中除含有胚狀體發(fā)育所需的營養(yǎng)物質外，還可以添加各種附加成分外，還可以添加各種附加成分，如固氮細菌、防病蟲，如固氮細菌、防病蟲農藥、除草劑和植物激素類似物等，有利于幼苗茁壯

17、農藥、除草劑和植物激素類似物等，有利于幼苗茁壯成長，提高作物產量。成長，提高作物產量。第四，第四，用人工種子播種可以節(jié)約糧食用人工種子播種可以節(jié)約糧食。例如，一個例如，一個12 12 L L的發(fā)酵罐在的發(fā)酵罐在20 d20 d內生產的胡蘿卜胚狀體，可以制成內生產的胡蘿卜胚狀體，可以制成1 1 000000萬粒人工種子，滿足幾千公頃農田的種植需要，與萬粒人工種子，滿足幾千公頃農田的種植需要，與天然種子相比，大大節(jié)約了糧食。天然種子相比，大大節(jié)約了糧食。2、氯化汞、氯化汞處理處理放入放入質量分數(shù)為質量分數(shù)為0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中24分鐘分鐘(也可質量分數(shù)也可質量分數(shù)為為1%的次氯酸鈣

18、溶液或飽和漂白粉溶液的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液)無菌水沖洗無菌水沖洗35次次用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。整個花蕾或幼穗消毒即可。1 1、材料的選擇、材料的選擇2 2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成(MS(MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基+ +不同比例的激素不同比例的激素) )3 3、親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以、親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種密度等對誘導成功率都有一定影響及接種密度等對誘導成功率都有一定影

19、響三、影響花藥培養(yǎng)的因素三、影響花藥培養(yǎng)的因素影響花藥培養(yǎng)的因素影響花藥培養(yǎng)的因素1 1、材料的選擇：、材料的選擇：不同種類植物的誘導成功率不同。不同種類植物的誘導成功率不同。同一種植物，親本植株的生理狀況對誘導成功率同一種植物，親本植株的生理狀況對誘導成功率有直接影響。有直接影響。合適的花粉發(fā)育時期合適的花粉發(fā)育時期：花期早期時的花藥最佳。：花期早期時的花藥最佳。選擇最合適的花粉發(fā)育時期選擇最合適的花粉發(fā)育時期 不選擇單核期之前花藥原因：花藥質地幼嫩，不選擇單核期之前花藥原因：花藥質地幼嫩，容易破碎；容易破碎； 不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動，不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動，

20、給材料消毒帶來困難困難；給材料消毒帶來困難困難； 挑選單核期花藥方法：應當選擇完全未開放的挑選單核期花藥方法：應當選擇完全未開放的花蕾，菌少，易消毒。花蕾，菌少，易消毒。2 2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基各成分中植物生長調節(jié)劑的花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基各成分中植物生長調節(jié)劑的水平和配比起決定作用。水平和配比起決定作用。誘導愈傷組織或胚狀體產生的培養(yǎng)基：廣泛使用誘導愈傷組織或胚狀體產生的培養(yǎng)基：廣泛使用2 2，4-D4-D、IAAIAA和和KTKT；誘導分化的培養(yǎng)基常除去誘導分化的培養(yǎng)基常除去2 2，4-D4-D而以而以IBAIBA或或BABA等代等代之。之。3 3、其他因素

21、：、其他因素：材料的低溫處理、接種密度、培養(yǎng)的環(huán)境條件等對誘材料的低溫處理、接種密度、培養(yǎng)的環(huán)境條件等對誘導的成功率都有一定的影響。導的成功率都有一定的影響。實驗操作實驗操作一、材料的選取一、材料的選取二、材料的消毒二、材料的消毒三、接種和培養(yǎng)三、接種和培養(yǎng) （一）（一）材料的選取材料的選取 1 1、選擇花藥一般通過鏡檢來確定其中的花粉、選擇花藥一般通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。是否處于適宜的發(fā)育期。 2 2、確定花粉發(fā)育時期最常用方法：醋酸洋紅、確定花粉發(fā)育時期最常用方法：醋酸洋紅法；焙花青鉻礬法。法；焙花青鉻礬法。實驗操作實驗操作鑒定花粉：鑒定花粉： 最常用的方法是醋酸洋紅

22、法：最常用的方法是醋酸洋紅法：花藥（載玻片上）花藥（載玻片上）1%1%的醋酸洋紅的醋酸洋紅1 1滴滴用鑷柄將花用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片藥搗碎，蓋上蓋玻片鏡檢（花粉粒的細胞核被染成鏡檢（花粉粒的細胞核被染成紅色）紅色）某些植物的花粉細胞核不易著色，需要采用焙花某些植物的花粉細胞核不易著色，需要采用焙花青青鉻釩法：鉻釩法：花藥（在卡諾氏固定液中處理花藥（在卡諾氏固定液中處理20min20min）取出，置于取出，置于載玻片上載玻片上焙花青鉻釩溶液染色焙花青鉻釩溶液染色蓋上蓋玻片蓋上蓋玻片鏡鏡檢（花粉粒的細胞核被染成藍黑色）檢（花粉粒的細胞核被染成藍黑色）注：注：花粉細胞核內有染色體，染色體主要由

23、花粉細胞核內有染色體，染色體主要由DNADNA和蛋白質組成，和蛋白質組成，醋酸洋紅為堿性染色劑，染色體容易被染色。通過染色，可以醋酸洋紅為堿性染色劑，染色體容易被染色。通過染色，可以確定細胞核為單核期還是雙核期，是單核居中期還是單核靠邊確定細胞核為單核期還是雙核期，是單核居中期還是單核靠邊期。一般單核靠邊期的花藥培養(yǎng)成功率最高。期。一般單核靠邊期的花藥培養(yǎng)成功率最高。（二）材料的消毒（二）材料的消毒1 1、花蕾用、花蕾用體積分數(shù)為體積分數(shù)為70%70%的酒精的酒精浸泡浸泡3030秒秒2 2、無菌水清洗、無菌水清洗3 3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4 4、放入、放

24、入質量分數(shù)為質量分數(shù)為0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中2 24 4分鐘（也分鐘（也可可質量分數(shù)為質量分數(shù)為1%1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）5 5、無菌水沖洗、無菌水沖洗3 35 5次次 用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。只要將整個花蕾或幼穗消毒即可?；ɑɡ倮伲?070酒酒精精）大約大約30s30s（無無菌水菌水）清洗清洗（無菌吸無菌吸水紙水紙）吸干水分吸干水分（0.10.1氯

25、氯化汞溶液）化汞溶液）2 24min4min（無無菌水菌水）沖洗沖洗（三）接種和培養(yǎng)（三）接種和培養(yǎng) 滅菌后花蕾，要在滅菌后花蕾，要在無菌條件無菌條件下除去萼片和下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時，要盡量藥時，要盡量不損傷花藥不損傷花藥（否則接種后，容易從否則接種后，容易從受傷部位產生二倍體的愈傷組織受傷部位產生二倍體的愈傷組織），同時還要徹），同時還要徹底底去除花絲去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成組織或胚狀體的形成。 通常每瓶通常每瓶接種花藥接種花藥7-107-10個個，

26、溫度控制在，溫度控制在2525左右，左右，不需要光照不需要光照。幼小植株形成后才。幼小植株形成后才需要需要光照。光照。 一般經過一般經過20-3020-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出長出愈傷組織或釋放出胚狀體愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時。將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植轉移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。株。 如果花藥開裂釋放出如果花藥開裂釋放出胚狀體胚狀體，則一個花藥內就會產生大量幼小植則一個花藥內就會產生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基植株分開，分別

27、移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。上，否則這些植株將很難分開。 在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化現(xiàn)染色體倍性的變化 （四）結果分析與評價（四）結果分析與評價選材是否恰當：選材時實驗成功的關鍵。選材是否恰當：選材時實驗成功的關鍵。要能通過鏡檢找到適宜發(fā)育期的花粉。要能通過鏡檢找到適宜發(fā)育期的花粉。無菌技術是否過關：如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)無菌技術是否過關：如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，說明某些技術操作步驟，如培養(yǎng)基滅象，說明某些技術操作步驟，如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問題。菌、花蕾消毒或接種等有問題。

28、接種是否成功：如果接種的花藥長出愈接種是否成功：如果接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時轉換培養(yǎng)基，以便愈步就成功了。要適時轉換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的異同點植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的異同點項目項目相同點相同點不同點不同點植物組織培養(yǎng)技植物組織培養(yǎng)技術術離體的植物組織離體的植物組織經脫分化形成愈經脫分化形成愈傷組織，再分化傷組織，再分化成叢芽，誘導出成叢芽，誘導出根，然后進行移根，然后進行移栽。栽。外植體為體細胞，外植體為體細

29、胞，染色體數(shù)無需加染色體數(shù)無需加倍。倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術花藥培養(yǎng)技術取材為花藥，培養(yǎng)取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不植株弱小，高度不育，必須用秋水仙育，必須用秋水仙素處理，使染色體素處理，使染色體加倍，恢復正常植加倍，恢復正常植株的染色體數(shù)，而株的染色體數(shù)，而且為純種。且為純種。實例一 關于被子植物花粉發(fā)育的說法，不正確的是關于被子植物花粉發(fā)育的說法，不正確的是（ ） A A、花粉粒是在花藥中的花粉囊里形成的、花粉粒是在花藥中的花粉囊里形成的 B B、被子植物精子的形成是直接減數(shù)分裂的結果、被子植物精子的形成是直接減數(shù)分裂的結果 C C、被子植物的花粉的發(fā)育要經歷四

30、分體時期、被子植物的花粉的發(fā)育要經歷四分體時期、單核期、雙核期等階段單核期、雙核期等階段 D D、花粉粒在發(fā)育過程中，核先位于細胞一側，、花粉粒在發(fā)育過程中，核先位于細胞一側，再移到細胞中央再移到細胞中央注：花粉母細胞經減數(shù)分裂形成注：花粉母細胞經減數(shù)分裂形成4 4個單核花粉粒，每個花粉粒的個單核花粉粒，每個花粉粒的細胞核進行一次有絲分裂形成細胞核進行一次有絲分裂形成1 1個花粉管細胞核和個花粉管細胞核和1 1個生殖細胞個生殖細胞核，每個生殖細胞核再進行一次有絲分裂生成核，每個生殖細胞核再進行一次有絲分裂生成2 2個精子。個精子。BD課后習題：課后習題： 1 1、F2F2代紫色甜玉米的基因型組

31、成可能為代紫色甜玉米的基因型組成可能為AasusuAasusu或或AasusuAasusu。如果運用常規(guī)育種方法，將。如果運用常規(guī)育種方法，將F2F2代中的紫色代中的紫色甜玉米與白色甜玉米（甜玉米與白色甜玉米（aasusuaasusu）進行測交，可以選）進行測交，可以選擇出基因型為擇出基因型為AAsusuAAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣，耗時較長，需要至少三年的選種和育種比較繁瑣，耗時較長，需要至少三年的選種和育種時間。如果利用花藥離體培養(yǎng)的技術，在時間。如果利用花藥離體培養(yǎng)的技術，在F1F1代產生代產生的花粉中就可能有的花粉中就可能有AsuAsu的配子

32、組合，再將花粉植株進的配子組合，再將花粉植株進行秋水仙素處理，使染色體加倍，就可以直接得到行秋水仙素處理，使染色體加倍，就可以直接得到紫色甜玉米的純合體（紫色甜玉米的純合體（AAsusuAAsusu）。這種方法可以大）。這種方法可以大大縮短育種周期。大縮短育種周期。 2 2、植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的相同、植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無菌技術及接種之處是：培養(yǎng)基配制方法、無菌技術及接種操作等基本相同。兩者不同之處在于：花藥操作等基本相同。兩者不同之處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時期適宜培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時期適宜的花蕾，花藥裂開后釋放

33、出的愈傷組織或胚的花蕾，花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基，對培養(yǎng)基配方的狀體也要及時更換培養(yǎng)基，對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大要求更為嚴格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。為增加。比較雜交育種、誘變育種、多倍體育種、單倍體育種比較雜交育種、誘變育種、多倍體育種、單倍體育種項目項目雜交育種雜交育種誘變育種誘變育種多倍體育種多倍體育種 單倍體育種單倍體育種處理處理雜交雜交用射線、化用射線、化學藥品處理學藥品處理用秋水仙素用秋水仙素處理種子或處理種子或幼苗幼苗花藥離體培花藥離體培養(yǎng)養(yǎng)原理原理基因重組，基因重組，把兩親本優(yōu)把兩親本優(yōu)良性狀組合良性狀組合在同一后

34、代在同一后代中中用人工方法用人工方法誘發(fā)基因突誘發(fā)基因突變，產生新變，產生新性狀和新品性狀和新品種種抑制細胞分抑制細胞分裂中紡錘體裂中紡錘體的形成，使的形成，使染色體數(shù)加染色體數(shù)加倍后不形成倍后不形成兩個細胞兩個細胞誘導配子直誘導配子直接發(fā)育成植接發(fā)育成植株，再用秋株，再用秋水仙素加倍水仙素加倍成純合體成純合體優(yōu)缺點優(yōu)缺點方法簡便，方法簡便，但耗時長，但耗時長，需經多年需經多年才能獲得才能獲得純合體純合體加速育種加速育種進程，大進程，大幅度改變幅度改變某些性狀，某些性狀，但有利個但有利個體不多體不多器官較大，器官較大，營養(yǎng)物質營養(yǎng)物質含量高，含量高，但發(fā)育延但發(fā)育延遲，結實遲，結實率低率低縮短育種縮短育種年限，但年限，但方法復雜，方法復雜，成活率低成活率低舉例舉例水稻雜交水稻雜交高產量青高產量青霉素菌株霉素菌株三倍體無三倍體無子西瓜、子西瓜、八倍體小八倍體小黑麥黑麥月季花藥月季花藥培養(yǎng)培養(yǎng)人工種子人工種子 人工種子是指通過植物組織培養(yǎng)技術獲得具有人工種子是指通過植物組織培養(yǎng)技術獲得具有胚胚芽、胚根、胚軸等結構的植物胚狀體芽、胚根、胚軸等結構的植物胚狀體，并且用適當方法將胚并且用適當方法將胚狀體包裹起來，用以代替天然種子進行繁殖的一種結構。狀體包裹起來，用以代替天然種子進行繁殖的一種結構。 目前研制的人工種子，是由目前研