一氧化氮在潘托拉唑?qū)Υ笫笪葛つp傷保護(hù)中的作用(一)

1、一氧化氮在潘托拉唑?qū)Υ笫笪葛つp傷保護(hù)中的作用(一)    【關(guān)鍵詞】 胃黏膜損傷Role of nitric oxide in pantoprazoles protective effect from gastric mucosal lesion in rats【Abstract】 AIM: To observe the role of nitric oxide（NO） in the protective effect of pantoprazole (PZ) on gastric mucosal lesion in rats. METHODS: Be

2、fore gastric mucosal lesion was made in rats by pure alcohol, PZ（20 mg/kg）, NnitroLarginine methyl ester（LNAME，4 mg/kg）, Larginine（250 mg/kg） and Darginine（250 mg/kg） were injected into the vein. Gastric mucosal blood flow（GMBF） was assessed with laser Doppler flowmetry（LDF）, gastric mucosal and ser

3、um NO-2/NO-3 were measured by cadmium granulation reduction and colorimetric method and the changes of ulcer index and the severity of tissue necrosis and neutrophils infiltration were observed. RESULTS: Ulcer index in the PZ group was much lower than that in the control group（P0.01） and the degree

4、of tissue necrosis and neutrophils infiltration were much milder than those in the control group（P0.01）. The protective effect of PZ was significantly decreased by prior administration of LNAME. The inhibitory effect of LNAME was antagonized by prior administration of Larginine but not by Darginine.

5、 PZ administered into the vein obviously increased GMBF, gastric mucosal and serum NO-2/NO-3, which was prevented by pretreatment with LNAME but the antisecretory effect of PZ was not affected by LNAME. CONCLUSION: PZ has some NO mediated protective effect against gastric mucosal lesion in rats and

6、the action of PZ against gastric acid secretion contributes little to the protective effect.【Keywords】 nitric oxide；pantoprazole；gastric mucosal lesion；cytoprotection; rats【摘要】 目的：探討一氧化氮（NO）在潘托拉唑(pantoprazole, PZ)保護(hù)大鼠胃黏膜損傷中的作用. 方法：在乙醇誘導(dǎo)大鼠胃黏膜損傷前，預(yù)先給予PZ（20 mg/kg）,L硝基精氨酸甲酯（LNAME，4 mg/kg）,L精氨酸（250 mg/kg

7、）及D精氨酸（250 mg/kg）靜脈注射. 采用激光多普勒血流計（LDF）測定胃黏膜血流量（GMBF），采用鎘粒還原和比色法測定胃黏膜和血漿NO-2/NO-3含量，并觀察了胃黏膜損傷指數(shù)（UI）、潰瘍壞死組織和中性粒細(xì)胞浸潤嚴(yán)重程度的變化. 結(jié)果：與模型損傷組比，PZ組大鼠UI明顯降低（P0.01），潰瘍壞死組織和中性粒細(xì)胞浸潤程度明顯減輕（P0.01）. 預(yù)先用LNAME處理后，PZ保護(hù)胃黏膜損傷作用明顯減弱；LNAME抑制作用可被L精氨酸拮抗，而不被D精氨酸拮抗. iv PZ，可增加GMBF、胃黏膜和血漿NO-2/NO-3，LNAME可逆轉(zhuǎn)這種作用，但對PZ抑制酸分泌作用無明顯影響. 結(jié)

8、論：PZ對大鼠胃黏膜損傷保護(hù)作用與NO有關(guān)，這一作用與抑制胃酸分泌無關(guān).【關(guān)鍵詞】 一氧化氮；潘托拉唑；胃黏膜損傷；細(xì)胞保護(hù);大鼠0引言潘托拉唑（pantoprazole, PZ）是人工合成的新一代質(zhì)子泵抑制劑（proton pump inhibitor，PPI）,對酸分泌有顯著的抑制作用1；同時對胃黏膜具有保護(hù)作用2-4，但這方面作用機制尚未完全闡明. 一氧化氮（NO）是擴血管物質(zhì)，可增加胃黏膜血流量(GMBF)，對胃黏膜具有保護(hù)作用. 我們研究NO在PZ對大鼠胃黏膜損傷保護(hù)中的作用，以探討PZ對胃黏膜保護(hù)作用的可能機制.1材料和方法1.1材料PZ(楊子江藥業(yè)公司產(chǎn)品)，L硝基精氨酸甲酯（N

9、nitroLarginine methyl ester，LNAME）(Sigma公司產(chǎn)品)，L精氨酸、D精氨酸(上海華美工程公司). 鎘粒(上海亭新工廠)，甘氨酸、亞硝酸鹽(上海試劑一廠)，硫酸銅、N1奈乙胺鹽酸鹽(上海試劑三廠)，對氨基苯磺酸(上海山?？萍佳芯克?，硫酸、硫酸鋅、氫氧化鈉、酚紅(上海試劑二廠). 純種、雄性、健康SD大鼠（上海西普爾必凱實驗動物有限公司提供），體質(zhì)量210270 g，實驗前禁食24 h，但不禁水. XHF1高速分解器(上海金山生化儀器廠)，TG328 B型分析天平(上海天平儀器廠)，801型離心機(上海手術(shù)器械廠)，724微機型可見分光光度計(上海光學(xué)儀器廠)

10、，眼科手術(shù)器械一套. 激光多普勒血流計（LDF）(LDF型，南開大學(xué)制造)，技術(shù)參數(shù)如下：HeNe光源，功率2 mW，輸出功率>1 mW，光纖長2.5 m，測定范圍為1 mm半球區(qū)域，量程選×1檔，時間常數(shù)1 s檔，頻率為4 kHz.1.2方法大鼠禁食24 h后，30 g/L戊巴比妥鈉（4 mg/kg, ip)麻醉，用無水乙醇1 mL灌胃，1 h后腹正中切口進(jìn)入腹腔，沿胃大彎處剪開胃，并進(jìn)行各項實驗指標(biāo)測定. 取SD大鼠100只，分為6組，組每組20只，組每組10只. 組：假手術(shù)組，作為正常對照；組：損傷模型組，作為損傷對照；組：PZ組，在用無水乙醇灌胃30 min前，iv P

11、Z（20 mg/kg）; 組：LNAME組，在iv PZ 20 min前，iv LNAME（4 mg/kg）；組：L精氨酸（Larginine）組，在iv LNAME 15 min前，iv L精氨酸（250 mg/kg）；組：D精氨酸（Darginine）組，在iv LNAME 15 min前，iv D精氨酸（250 mg/kg）. 組又各分成2小組，每小組10只，其中1小組用于胃酸、胃黏膜血流量(GMBF)、胃黏膜和血漿NO-2/NO-3測定，另1小組用于胃黏膜損傷指數(shù)(ulcer index, UI)判定和組織學(xué)觀察. 對照組給予等量的生理鹽水. 取胃液2 mL，加酚紅指示劑2滴，黃色表示

12、有胃酸存在. 用0.1 mol/L氫氧化鈉滴定至粉紅色. 所耗氫氧化鈉mL數(shù)乖以50，即為胃酸濃度（mmol/L），并換算成pH.1.2.1GMBF測定采用LDF測定GMBF，開機預(yù)熱30 min調(diào)出LDF GMBF測定程序，從胃大彎處作一小切口，用LDF的探頭輕輕垂直接觸胃黏膜表面，待血流穩(wěn)定后，在胃體大小彎、胃竇大小彎取4點測定GMBF，取其平均值，以激光多普勒信號電壓值（mV）表示血流量的相對數(shù)值.1.2.2NO-2/NO-3含量測定用鈍性刀片刮取胃黏膜，組織勻漿離心后取上清液,-20貯存待測；取外周血2 mL，EDTA抗凝后取上清，-20貯存待測；NO-2/NO-3含量采用鎘粒還原和比

13、色法測定5.1.2.3UI判定按Guth標(biāo)準(zhǔn)計算UI，處死動物，取出胃及十二腸，沿大彎側(cè)剪開后，展平，按潰瘍或糜爛面積大小給予計分：斑點狀糜爛為1分;糜爛1 mm為2分;糜爛介于12 mm之間為3分;糜爛為24 mm為4分;糜爛>4 mm為5分.1.2.4組織學(xué)觀察全胃用40 g/L甲醛固定，制成石蠟切片，HE染色光鏡下觀察，評定標(biāo)準(zhǔn)如下：壞死物質(zhì)：未見為0;僅在潰瘍底面邊緣有少許為（+）;薄層覆蓋整個潰瘍底為（）;厚層覆蓋為（）. 中性粒細(xì)胞浸潤：未見為0;偶見（+）;明顯（）;介于后兩者之間為（）.統(tǒng)計學(xué)處理：多組計量資料之間比較采用方差分析，組間兩兩比較用SNKq檢驗，方差不齊時采

14、用KruskalWallis檢驗. 計數(shù)資料之間采用2檢驗.2結(jié)果2.1UI測定損傷模型組大鼠UI比正常對照組（0）明顯升高（P0.01）；PZ組與損傷模型組比明顯降低（P0.01）；LNAME組與損傷模型組比無明顯差異，而比PZ組明顯升高（P0.01）；L精氨酸組與損傷模型組和LNAME組比均明顯降低（P0.01），D精氨酸組與損傷模型組和LNAME組比均無明顯差異，而比PZ組明顯升高（P0.01，Tab 1）.表1大鼠胃黏膜損傷指數(shù)和組織學(xué)（略）2.2胃組織學(xué)觀察損傷模型組大鼠潰瘍底部可見大量壞死物質(zhì)，周圍組織中中性粒細(xì)胞浸潤明顯；PZ組潰瘍底部壞死物質(zhì)和周圍組織中中性粒細(xì)胞浸潤均比損傷模

15、型組明顯減輕（P0.01）；LNAME組潰瘍底部壞死物質(zhì)和周圍組織中中性粒細(xì)胞浸潤與損傷模型組比均無明顯差異（P>0.05），而比PZ組嚴(yán)重（P0.01）；L精氨酸組與損傷模型組和LNAME組比二者均明顯減輕（P0.01），與PZ組比無明顯差異，D精氨酸組與損傷模型組和LNAME組比二者均無明顯差異，而比PZ組嚴(yán)重（P0.01，Tab 1）.2.3GMBF損傷模型組大鼠GMBF與正常對照組比明顯降低（P0.01），PZ組與損傷模型組比明顯升高（P0.05），LNAME組與損傷模型組比無明顯差異（P>0.05），而比PZ組明顯降低（P0.05，Tab 2）.表2大鼠GMBF，胃黏膜和

16、血漿NO-2/NO-3 及胃液pH（略）2.4NO-2/NO-3含量損傷模型組大鼠胃黏膜和血漿NO-2/NO-3比正常對照組均非常顯著增加（P0.01）；PZ組比正常對照組非常顯著增加（P0.01），亦比損傷模型組明顯增加（P0.05）；LNAME組與PZ組比顯著減少（P0.01），而與正常對照組比無明顯差異（P>0.05，Tab 2）.2.5胃液pH損傷模型組大鼠胃液pH與正常對照組比明顯降低（P0.05），PZ組與損傷模型組比明顯升高（P0.01），LNAME組與PZ組比無明顯差異（P>0.05， Tab 2）.3討論PZ是人工合成的PPI. 我們的實驗結(jié)果顯示，預(yù)先用PZ給由

17、乙醇誘導(dǎo)胃黏膜損傷大鼠iv，與損傷模型組比，UI明顯降低，病理組織觀察，其潰瘍壞死物質(zhì)和周圍中性粒細(xì)胞浸潤亦明顯減少，表明PZ對大鼠胃黏膜損傷具有保護(hù)作用. NO是由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生血管舒張因子，LNAME能明顯降低大鼠GMBF和胃黏膜血紅蛋含量，表明NO對胃黏膜損傷有保護(hù)作用. 我們用LNAME預(yù)先處理大鼠，能明顯升高PZ降低的UI，潰瘍底部壞死物質(zhì)增多，周圍中性粒細(xì)胞浸潤也非常明顯，在LNAME給藥15 min前給予L精氨酸則能抑制這種損傷作用，而不被D精氨酸抑制，表明NO介導(dǎo)了PZ對胃黏膜的保護(hù)作用. 本實驗結(jié)果顯示，iv PZ，能明顯增加胃黏膜和血漿NO-2/NO-3含量，同時GMBF

18、亦升高，而在PZ iv 20 min前給予LNAME則能逆轉(zhuǎn)這種作用. 本結(jié)果還顯示，PZ能著顯提高胃液pH，抑制胃酸分泌，而LNAME則對PZ抑制胃酸分泌的作用無明顯影響.【參考文獻(xiàn)】1 Cheer SM，Prakash A，F(xiàn)aulds D，et al. Pantoprazole：An update of its pharmacological properties and therapeutic use in the management of acid related disordersJ. Drugs，2003；63(1)：101-133.2 Zhao CM，Bakke I，TostrupSkogaker N，et al. Functionally impaired，hypertrophic ECL cells accumulate vacuoles an