牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備與滅菌

1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備與滅菌一、實驗目的 ：1、學習并掌握培養(yǎng)基配制的原理，掌握配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的方法和步驟。2、學習并了解高壓蒸汽滅菌的原理和操作技術。二、實驗原理：（一）微生物分離與純化1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備與滅菌牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基，它含有牛肉膏、蛋白胨和 NaCl 。其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽、蛋白胨主要提供氮源，而 NaCl 提供無機鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下 96 時溶化，一般實際應用時在下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在 40時凝固，通常不被微生物分解利用。由于這種

2、培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH 調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。三、實驗儀器和試劑1、儀器：分析天平；錐形瓶；移液管；高溫電爐；容量瓶；燒杯；無菌培養(yǎng)皿；pH 試紙；膠頭滴管；玻璃試管；酒精燈；高壓蒸氣鍋；玻璃棒；2、試劑：牛肉膏；蛋白胨；NaCl ；瓊脂 ；蒸餾水；四、實驗步驟：（一）分離純化制備試驗菌種的菌懸液1、培養(yǎng)基的配置1配置牛肉膏蛋白胨的液體培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻后進行分裝。 將分裝完畢后的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌；稱量：按試驗用微生物培養(yǎng)基配方，逐一稱取各種藥品放入燒杯中。液體培養(yǎng)基配方：牛肉膏蛋白胨NaCl葡萄糖蒸餾水0.6g2g1g2g200ml溶解：

3、將去蒸餾水加入到上述燒杯中使各種成分溶解，難溶的物質(zhì)， 例如蛋白胨、加熱促進其溶解，待全部溶解后，加水補足加熱蒸發(fā)的水量。制備固體培養(yǎng)基，加熱融化瓊脂時要不斷的攪拌，避免瓊脂糊底燒焦。調(diào)節(jié) pH 值；初配好的培養(yǎng)基往往不能符合所需要的pH 值，故需用 pH試紙檢測，并以一定濃度的鹽酸溶液和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基溶液pH值至 78。分裝：將調(diào)節(jié)好 pH 值的培養(yǎng)基分裝于十支試管和兩個錐形瓶中 ( 注意防止培養(yǎng)基沾污管口或瓶口， 避免浸濕橡皮塞塞引起雜菌污染 ) 。分裝液體培養(yǎng)基時，每支試管裝的量為試管高度的 1/3 1/2 ，錐形瓶中各加入 250300ml 培養(yǎng)基。分裝完畢后，將試管及錐形瓶用

4、橡皮塞塞緊， 防止高壓蒸汽滅菌時管內(nèi)壓力過大沖開。包扎：加塞后，在全部試管膠塞外包裹雙層報紙，并用棉繩捆扎好，同樣的，將兩個錐形瓶也用同樣的方法包扎好。最后，用記號筆注明培養(yǎng)基名稱，日期。2、滅菌本試驗采用高壓蒸氣滅菌法。加水，立式鍋是直接加水至鍋內(nèi)底部隔板以下1/3 處。把需滅菌的器物放入鍋內(nèi)( 器物不要裝得太滿，否則滅菌不徹底) ，關嚴鍋蓋 ( 對角式均勻擰緊螺旋 ) ，打開排氣閥。啟動電源開關。待爐內(nèi)水沸騰后，蒸氣將爐內(nèi)冷空氣驅(qū)凈，關閉排氣閥。升壓，升溫。關閉排氣閥以后，鍋內(nèi)成為密閉系統(tǒng)，蒸氣不斷增加，壓力計和溫度計的指針上升，當壓力達到1.05kg/cm 2( 溫度為121 ) 即滅菌開始，這時開、關電源，保證壓力維持在1.05 kg/cm 2， 20min 左右。2中斷熱源，達到滅菌時間要求后停止加熱， 任其自然降壓，當指針回到“0”時，打開排氣閥 ( 排氣閥不能過早打開，否則培養(yǎng)基因壓力突降，溫度沒下降而翻騰沖到棉塞處，既損失培養(yǎng)基又沾污了棉塞) 。揭開鍋蓋，取出器物，分裝至無菌培養(yǎng)皿中，靜置。二十四小時后觀察是否有菌種