酚試劑分光光度法測定空氣中微量甲醛含量影響因素研究

1、第32卷第2期濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)2009年4月Vol132,No.2J OU RNAL OF J ININ G MEDICAL COLL EGE Apr,2009酚試劑分光光度法測定空氣中微量甲醛含量影響因素分析趙艷霞陳雁君李寧程曉平張建萍郭建麗(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院提要目的改進(jìn)G B/T18204.26公共場所空氣中甲醛測定方法中的酚試劑分光光度法測定空氣中甲醛含量影響條件。方法對顯色溫度和顯色時間、入射光波長及顯色劑酸度等幾個方面進(jìn)行了分析。結(jié)果該方法檢出限為0.058g/5mL,線性范圍0.12.0g/5mL,加標(biāo)回收率93%97%。結(jié)論該方法精密度高、準(zhǔn)確性好,簡單、快速,可用于空氣中甲

2、醛含量的測定。關(guān)鍵詞酚試劑;分光光度法;甲醛;空氣;影響因素分析甲醛是一種無色、具有強(qiáng)烈刺激性氣味的揮發(fā)性氣體,是一種具有較高毒性的化合物,在我國有毒化學(xué)品優(yōu)先控制名單上位居第二,已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織確定為致癌和致畸性物質(zhì)1。實(shí)驗(yàn)證明,當(dāng)甲醛濃度在0.121.2mg/m3之間時,能導(dǎo)致肝功能、肺功能異常;當(dāng)甲醛濃度在0.060.07mg/m3之間時,兒童會發(fā)生氣喘病2。隨著人們生活水平的提高,大量可揮發(fā)出有害物質(zhì)甲醛的各種建筑材料、裝飾材料等民用化工產(chǎn)品進(jìn)入室內(nèi),使人們接觸甲醛的機(jī)會大大增多3。由于甲醛對人體的危害,國家對不同場所空氣中甲醛的含量做了相應(yīng)規(guī)定:我國工作場所空氣中甲醛最高容許濃度為

3、0.5mg/m3;公共場所甲醛含量0.12mg/m3;居室內(nèi)空氣中甲醛最高容許濃度為0.10mg/m3(G B/T18883-2002,室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?？諝庵屑兹┑臏y定方法很多,有氣相色譜法、極譜法、液相色譜法和分光光度法,而對于分光光度法,又可以分為乙酰丙酮分光光度法、品紅亞硫酸法、酚試劑法、變色酸法等。在民用建筑工程室內(nèi)環(huán)境污染控制(G B50325-2001中列出了3種測定空氣中甲醛濃度的方法,其中包括酚試劑分光光度法,而在G B/T18204.26-2000中也推薦了酚試劑分光光度法。本文結(jié)合實(shí)際,對酚試劑分光光度法從顯色溫度、顯色時間、入射波長和顯色劑用量及酸度等幾個方面進(jìn)行了優(yōu)選

4、和改進(jìn),以期達(dá)到快速準(zhǔn)確的分析要求。1材料與方法主要儀器與試劑:754型紫外-可見分光光度計(jì)(上海分析儀器廠;H HS型電熱恒溫水浴鍋(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司;QC-2型大氣采樣器:流量范圍01L/min(北京市勞動保護(hù)科學(xué)研究所; Arin-611超純水裝置(德國賽多利斯公司;大型氣泡吸收管(具有5ml和10ml二個刻度;10ml具塞比色管。甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1000.0g/ml吸取1.4ml含量為36%38%甲醛溶液,置于500ml容量瓶中,加超純水稀釋至刻度,其準(zhǔn)確濃度用碘量法進(jìn)行標(biāo)定。甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液:臨用時,將甲醛標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液用水稀釋成1.00mL含10g甲醛溶液,立即再取此溶液10.00m

5、L,加入100mL容量瓶中,加入5mL吸收原液,用水定容至100mL,此液1.00mL含1.00g 甲醛,放置30min后,用于配制標(biāo)準(zhǔn)色列。此標(biāo)準(zhǔn)溶液可穩(wěn)定24h。吸收液原液:稱0.10g酚試劑C6H4SN(C H3 CHN H2HCl,簡稱MB T H,加水溶解,定容于100mL容量瓶中,放冰箱中保存,用時以20倍稀釋。1%硫酸鐵銨顯色劑溶液:稱取5.0g硫酸鐵銨(A R,加入0.1mol/L鹽酸溶液20ml溶解,并稀釋至500mL。本法中所用水均為重蒸餾水或去離子交換水;所用的試劑純度為分析純。實(shí)驗(yàn)原理:酚試劑法是利用空氣中的甲醛與酚試劑反應(yīng)生成嗪,嗪在酸性溶液中被高價鐵離子氧化形成藍(lán)綠

6、色化合物,根據(jù)顏色深淺,比色定量。樣品的采集:用一個內(nèi)裝5mL吸收液的大型氣泡吸收管,以0.5L/min流量,采氣10L,采氣時間20min。并記錄采樣點(diǎn)的溫度和大氣壓力。采樣后樣品在室溫下應(yīng)在24h內(nèi)分析4。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:取9支10ml具塞比色管,用甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)系列。在各管中,加入0.4mL 1%的硫酸鐵銨溶液,搖勻,于40水浴放置10min。用1cm比色皿,在波長630nm下,以水作參比,測68定各管溶液的吸光度。以甲醛含量為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見表1。表1甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列管號012345678標(biāo)準(zhǔn)溶液mL 00.100.200.400.600.80 1.00 1

7、.50 2.00吸收液mL 5.0 4.9 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 3.5 3.0甲醛含量g0.10.20.40.60.81.01.52.0樣品測定:采樣后,將樣品溶液全部轉(zhuǎn)入比色管中,用少量吸收液洗吸收管,合并使總體積為5mL 。以下操作步驟同標(biāo)準(zhǔn)系列,測定吸光度。在每批樣品測定的同時,用5mL 未采樣的吸收液作試劑空白,測定試劑空白的吸光度。計(jì)算時要注意將采樣體積換算成標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下采樣體積?？諝庵屑兹┖堪聪率接?jì)算:C =(A -A 0×Bs/V 0式中:C -空氣中甲醛含量,單位:mg/m 3;A -樣品溶液的吸光度;A 0-空白溶液的吸光度;Bs -回歸線斜率倒

8、數(shù)(作為樣品測定的計(jì)算因子單位:g/吸光度;V 0-換算成標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下的采樣體積,單位:L 2結(jié)果與討論 顯色劑酸度的影響:本試驗(yàn)是在酸性溶液中進(jìn)行的,而其酸性是通過配制硫酸鐵銨顯色劑時加入鹽酸來實(shí)現(xiàn)的。在G B/T 18204.26-2000公共場所中甲醛測定方法中,只是說明了在配制硫酸鐵銨顯色劑時加入0.1mol/L 鹽酸溶液溶解,但加入鹽酸溶液的具體用量并未說明。試驗(yàn)表明,鹽酸溶液的用量直接影響方法的精密度。固定其它條件不變,分別用不同體積的0.1mol/L 鹽酸溶液溶解硫酸鐵銨,配制不同p H 值的顯色劑溶液,按照1.3.2中的操作步驟,測定吸光度值。試驗(yàn)結(jié)果表明,對于同一個濃度的標(biāo)樣,

9、酸度越大,溶液的吸光度值也越大,但酸度過大,又會抑制反應(yīng)。當(dāng)溶液的p H 值在4.0時,測定1.0g/5ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液,其吸光度值達(dá)到最大。結(jié)果見圖1。 圖1顯色劑酸度的影響顯色溫度和顯色時間對顯色效果的影響:同樣,在G B/T 18204.26-2000公共場所中甲醛測定方法中,也未詳細(xì)說明反應(yīng)時的溫度條件,只是說明了反應(yīng)時間15min 。試驗(yàn)表明,若固定其它條件不變,對于同一個濃度的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液,反應(yīng)時的溫度和時間對反應(yīng)有顯著影響。本試驗(yàn)中采用水浴鍋控制水溫(必要時加冰塊,分別設(shè)定溫度為10、15、20、30、35、40,相應(yīng)的顯色時間分別設(shè)定為15、20、25、30、35min ,測定

10、含量0.4g/5ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值,結(jié)果見表2。表2顯色溫度和顯色時間對反應(yīng)的影響顯色時間(min 顯色溫度(101520303540100.1520.1670.1740.1930.1940.200150.1640.1780.1880.1970.1980.200200.1720.1840.1920.2000.2000.201250.1870.1950.2000.1990.2010.200300.1940.2000.2000.2000.2000.201350.1970.1990.2010.2010.2000.200400.2000.2000.2000.2010.2000.200從表2中可

11、以看出,溫度越低,顯色完全所需要的時間越長。在10時,顯色完全需要40min ;15時,需要30min ;20時,需要25min ;而在40時,則10min 就顯色徹底。故顯色時所需要的最佳溫度和時間是40時(可采用水浴鍋以保持水溫恒定顯色10min 。吸收波長的影響:取1.5g/5ml 的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照已設(shè)定好的試驗(yàn)條件,分別在600660nm 波長范圍內(nèi)測定其吸光度值,發(fā)現(xiàn)其最大吸收波長在630nm 處,故選擇吸收波長為630nm 。見圖2。圖2波長與吸光度值曲線顯色劑用量的影響:取1.0g/5ml 的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照已設(shè)定好的試驗(yàn)條件,只改變顯色劑的用量,測定其吸光度值,吸光度值隨

12、顯色劑硫酸鐵銨加入量的變化曲線見圖3。由圖3可知,吸光度值隨78顯色劑量的增加先增大而后減小,在加入量為0140mL 時,吸光度值最大且最穩(wěn)定,在G B/T18204126-2000中規(guī)定顯色劑的加入量為0140mL ,本試驗(yàn)結(jié)果表明加入硫酸鐵銨的量不宜過多,否則空白管吸光度值高,影響比色,以加1%硫酸鐵銨014mL 為宜4。 圖3顯色劑用量與吸光度曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:按照所設(shè)定的最佳條件,測定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度值,以甲醛含量為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制甲醛濃度與吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過計(jì)算,得出其回歸方程為y =0.3756x +0.0489,相關(guān)系數(shù)為r =0.9997。線性范圍為0.10

13、2.0g/5mL ,結(jié)果見圖4。 圖4甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列通過連續(xù)對空白管進(jìn)行10次平行測定,用3倍的空白標(biāo)準(zhǔn)管的標(biāo)準(zhǔn)差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率,即DL =3×SD/K (DL 為檢出限,K 為曲線斜率,得到甲醛的檢出限為0.058g/5mL 。精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn):按試驗(yàn)方法,分別對0115、0.5g/5mL 的甲醛標(biāo)液進(jìn)行連續(xù)測試,測得的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%,說明本方法有很好的精密度,結(jié)果見表3。平行取甲醛含量為0.380g/5mL 樣品溶液兩份,按相同的方法分別加入高、低兩種濃度的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照試驗(yàn)操作步驟,計(jì)算回收率,測得樣品的回收率在93%97%之間。符合衛(wèi)生分析的要求。結(jié)果見表4

14、。樣品測定結(jié)果:用本方法分別測定學(xué)生實(shí)驗(yàn)室、計(jì)算機(jī)房、圖書館、多功能廳等的室內(nèi)空氣中甲醛平均含量,測定結(jié)果分別為0.025、0.032、0.035、01027mg/m 3,符合G B/T 18883-2002室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定,室內(nèi)空氣中甲醛含量不得大于0108mg/m 3。表3精密度試驗(yàn)試驗(yàn)編號12標(biāo)準(zhǔn)含量(g/5mL 0.150.5實(shí)測值(g/5mL 0.156、0.153、0.152、0.154、0.149、0.1480.558、0.555、0.555、0.553、0.547、0.544測定均值(g/5mL 0.1520.552s 0.0030.0054RSD (%1.970.98表

15、4準(zhǔn)確度試驗(yàn)試驗(yàn)序號本底值(g/5mL 加標(biāo)量(g/5mL 測定次數(shù)(n 加標(biāo)后測定均值(g/5mL 平均回收率(%10.3800.250.56793.520.3801.051.34196.1通過對G B/T 18204.26公共場所空氣中甲醛測定方法的改進(jìn),表明:(1酚試劑法顯色反應(yīng)受溫度的影響較大,溫度越高,顯色時間越短,本文中推薦顯色溫度為40水浴恒溫操作,顯色時間10min 為宜。(2顯色劑p H 值控制在4為好,此時吸光度達(dá)到最大且最穩(wěn)定。(3硫酸鐵銨的量不宜過多,否則空白管吸光度值高,影響比色,以加1%硫酸鐵銨0.4ml 為好。本方法操作簡便快捷,而且成本低,精密度和準(zhǔn)確度較高,工

16、作曲線的線性關(guān)系好,適用于測定空氣中的甲醛含量。參考文獻(xiàn)1楊銘.公共場所空氣中甲醛的測定.廣東微量元素科學(xué),2008,15(4:562閆金蘋.甲醛及其對人體的危害.化學(xué)世界,2004,10:5583黃智勇,張劍.室內(nèi)空氣中甲醛測定方法研究現(xiàn)狀.中國公共衛(wèi)生,2006,22(2:2314中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測所.環(huán)境空氣質(zhì)量監(jiān)測檢驗(yàn)方法.北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,1991.101104(收稿日期2009-03-1088第32卷第2期濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)2009年4月Vol132,No.2J OU RNAL OF J ININ G MEDICAL COLL EGE Apr,2009抑癌基因P T

17、 EN在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義張霞1,2張友忠2崔保霞2(1濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬第一人民醫(yī)院2山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院提要目的研究抑癌基因P TEN在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法應(yīng)用免疫組化的方法研究P TEN在50例宮頸癌組織,在65例CIN,98例CIN,20例正常宮頸組織中的表達(dá)情況。結(jié)果P TEN在宮頸癌中陽性率為36%,CIN中為84.6%,CIN中為61.2%,正常宮頸組織中為100%,差異有顯著性。結(jié)論P(yáng) TEN異常表達(dá)可能與宮頸癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。關(guān)鍵詞P TEN;宮頸腫瘤;基因?qū)m頸癌是我國生殖道發(fā)病率最高的惡性腫瘤,其發(fā)生機(jī)制尚未明確。最近研究發(fā)現(xiàn)抑癌基因的失活在很多腫瘤的發(fā)生發(fā)展

18、中起重要作用。第10號染色體同源缺性磷酸酶張力蛋白基因P TEN (p hosp hatase and tensin deletion on chromosome ten是迄今發(fā)現(xiàn)的第一個具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因1,在人類多種腫瘤及細(xì)胞中存在失活和突變,從而引起相應(yīng)蛋白表達(dá)異常。本研究采用免疫組織化學(xué)方法,探討宮頸癌病變中P TEN表達(dá)及意義。1資料和方法研究對象:收集2004年5月至2007年5月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院婦科住院治療共50例宮頸浸潤癌為研究對象,CIN65例,CIN共98例,另選取20例經(jīng)陰道鏡證實(shí)為無病變的正常宮頸組織為對照。方法:采用免疫組化方法檢測P TEN蛋白,標(biāo)本

19、均經(jīng)10%福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,4Dm連續(xù)切片。P TEN鼠抗人單克隆抗體及免疫組化試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)公司。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑盒進(jìn)行。P TEN染色:為胞漿染色,染色為深棕色,且可見粗大顆粒為強(qiáng)陽性(7;染色棕黃色,可見細(xì)黃色顆粒為中度陽性(6;染色淺黃色,未見明顯顆粒為陽性(+;不著色為陰性(-。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2結(jié)果與討論P(yáng) TEN在組織中的表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿中,為粗細(xì)不一的棕黃色顆粒。其在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織中的表達(dá)情況見表1。表中可見,隨宮頸組織病變加重,P TEN在宮頸組織中的表達(dá)呈遞減。Analysis of T race Form aldehyde Detectionin the Air with Mbth Spectreophotom EtryZ H A O Yanx i a,C H EN Yanj un,L I N i ng,et al(Public healt h instit ute,Jining Medical CollegeAbstractOb j ectiveTo adjust t he influencin