高效液相色譜法測定磷酸苦參堿注射液中苦參堿的含量

1、    高效液相色譜法測定磷酸苦參堿注射液中苦參堿的含量        摘要：目的：建立了HPLC法測定磷酸苦參堿注射液中苦參堿的含 量。方法：以ZORBAX SB-C18 (5m ，4.6×250mm )為分析 用色譜柱；以乙腈-0.1%磷酸（1090）為流動(dòng)相；流速：1.0ml/min；檢測波長：202nm； 柱溫：40；內(nèi)標(biāo)物為：鹽酸麻黃堿。結(jié)果：磷酸苦參堿的線性關(guān) 系良好，測定6次加樣回收率，結(jié)果平均回收率為：100.30%；RSD為1.73%。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)

2、方法簡便、準(zhǔn)確，靈敏度高，重現(xiàn)性好。關(guān)鍵詞：苦參堿；鹽酸麻黃堿；磷酸苦參堿注射液；高效液相色譜 法中分類號：R914.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號:1008-9926(2000)06-325-04HPLC Determination of Matrine in Matrine Phosphate InjectionCAO Hong,WEI Ping(Institute for Drug and Instrument Control Health Dept GLD of PLA,Beijing10007 1)ABSTRACT：Aim To establish a high performance l

3、iquid chromatog raphy (HPLC) method for determination of matrine in matrine phosphate injection. Methods ZORBAX SB-C18 was used as the stationary phase,a cetonitrile-0.1% phosphoric acid(1090)as the mobile phase,with a detection wav elength at 202nm.Ephedrine hydrochloride was selected as internal s

4、tandard.Results Satisfactory linearity and accuracy were obtained.The mean recovery of matrine in matrine phosphate injection was 100.30% (RSD=1.73%)( n=6).Conclusion The results showed that this method was re liable and accurate.KEY WORDS：Matrine;Ephedrine hydrochloride;Matrine phosphate i njection

5、;HPLC苦參堿的含量測定方法，文獻(xiàn)報(bào)道有薄層掃描法1，高 效液相色譜法2、3等。本試驗(yàn)采用了檢測靈敏度高、準(zhǔn)確度及精密度好的高效液 相色譜法，由于注射液只有單一藥物，故采用了定量較為準(zhǔn)確的內(nèi)標(biāo)法。對于內(nèi)標(biāo)物的選擇 ，因苦參堿易溶解于水中，故選擇了在水中易溶解的鹽酸麻黃堿作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，且鹽酸麻黃 堿峰與苦參堿峰能基線分離。1儀器與藥品儀器：惠普HP-1050四元梯度泵，HP-1050 DAD檢測器，HP化學(xué)工作站（美國惠普公司）；HP DeskJet 500Q打印機(jī)。試劑：乙腈為色譜純；其它試劑均為分析純；水為超純水。對照品 ：苦參堿對照品(0705-9304)（供含量測定用）；鹽酸麻黃堿對照

6、品（中國藥品生物制品檢 定所提供）。樣品：磷酸苦參堿注射液（解放軍302醫(yī)院提供；批號 981012、981024、9810 31）。2色譜條件ZORBAX SB-C18分析柱（250mm×4.6mm 5m）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（1090） ；檢測波長：202nm（帶寬2nm）；參比波長：550nm（帶寬100nm）；流速：1.0ml/min；柱 溫：40；內(nèi)標(biāo)：鹽酸麻黃堿。按以上色譜條件得到樣品、對照品分離色譜見1。1磷酸苦參堿注射液的HPLC色譜A 對照品B 樣品1 苦參堿峰2 內(nèi)標(biāo)物峰3實(shí)驗(yàn)方法3.1對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品，加流動(dòng)相制成含0 .5mgml-

7、1的溶液；精密吸取上述對照品溶液1ml，內(nèi)標(biāo)溶液1ml，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作 為對照品溶液。3.2樣品溶液的制備精密量取注射液1ml，置50ml量瓶中，加流動(dòng) 相稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各1ml，置10ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至 刻度，搖勻，作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10l，注入高效 液相色譜儀，依上述色譜條件，以內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行測定。3.3線性關(guān)系及標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系的考察精密吸取苦參堿對照品 貯備溶液0.25、0.5、1、1.5、2.0ml，置10ml量瓶中，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加流動(dòng)相稀 釋至刻度，搖勻。依次注入高效液相色

8、譜儀，測定苦參堿峰面積，以苦參堿濃度(gml -1)為橫坐標(biāo)，苦參堿峰面積積分值與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積積分值之比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn) 曲線，結(jié)果表明苦參堿在12.65101.20gml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，其回歸 方程為：Y=1.006 54X+0.005 617，r=0.999 9 (n=5)3.4精密度試驗(yàn)精密吸取苦參堿對照品溶液10l ，重復(fù)進(jìn)樣7次 ，測量苦參堿峰面積與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積比，結(jié)果見表1。表1精密度試驗(yàn)結(jié)果次數(shù)苦參堿峰面積/內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積平均值RSD(%)10.891320.883630.891440.88910.89030.4250.890160.896470.89023.5

9、樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液，分別于配制后0 、1、2、4、6、8h，第2d，第3d，依法測定，結(jié)果表明，供試品溶液很穩(wěn)定。見表2。 表2供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)時(shí)間（h）苦參堿峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積平均值RSD（%）00.824510.828720.826140.8266082680.1960.826580.8263240.8293360.82603.6重現(xiàn)性試驗(yàn)按含量測定項(xiàng)方法測定，對同一批樣 品（981031）重復(fù)測定7次，結(jié)果見表3。 表3磷酸苦參堿重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果取樣量（ml）苦參堿含量（mgml-1）平均含量（mgml-1）RSD（%）1.00024.071.00023.931.00024

10、.101.00023.9323.990.311.00024.041.00023.921.00023.973.7加樣回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的同一批樣品 （981031）0.5ml ，精確加入苦參堿對照品，按正文供試品溶液的制備方法操作，測定其含 量，并計(jì)算回收率，測定結(jié)果見表4。 表4磷酸苦參堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果取樣量（ml）相當(dāng)苦參堿的量（mg） 加入苦參堿的量（mg）測得量（mg）回收率（%）（%）RSD（%）0.511.99512.65024.59099.570.511.99512.65024.47098.620.511.99512.65024.995102.77100.301.730

11、.511.99513.52525.30098.370.511.99513.52525.640100.890.511.99513.52525.730101.554樣品的測定 精密吸取苦參堿對照品溶液、 供試品溶液各10l，按上述色譜條件測定，以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中苦參堿的含量。5樣品測定結(jié)果按樣品測定方法，測定3批成藥樣品，結(jié)果見表5 。表5磷酸苦參堿樣品測定結(jié)果（n=3）批號苦參堿含量（mgml-1）98101224.5898102425.0198103123.996討論 6.1色譜峰純度檢測將苦參堿對照品溶液和樣品溶液注入高效液相色譜儀 ，應(yīng)用二級管陣列檢測器和色譜工作站，測得樣品色譜中苦參堿的

12、色譜峰峰純度系數(shù)大于99 6。6.2色譜峰光譜一致性檢測應(yīng)用二級管陣列檢測器和色譜工作站 ，對樣品中苦參堿色譜峰和對照品中苦參堿的色譜峰進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果兩者光譜吸收譜 重疊，見2。2苦參堿的紫外光譜1 苦參堿對照品紫外光譜2 磷酸苦參堿注射液HPLC色譜中與苦參堿相應(yīng)峰的紫外光譜6.3測定波長的選擇對苦參堿對照品溶液在190 600nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，苦參堿對照品在(202±2)nm 處有最大吸收，故選定202n m作為測定波長，見2。6.4供試品溶液的制備方法由于供試品溶液成分較為簡單，故選 擇了內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行測定，供試品溶液只要簡單稀釋即可進(jìn)樣測定。6.5本方法重現(xiàn)性較好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于控制磷酸苦參 堿注射液的質(zhì)量。作者簡介：曹紅(1963-)，女，醫(yī)學(xué)碩士，副主任藥師。曹紅(中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所北京100071)魏萍(中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所北京100071)參考文