膿毒癥大鼠血清一氧化氮和內(nèi)皮素-1水平變化的研究

1、膿毒癥大鼠血清一氧化氮和內(nèi)皮素-1水平變化的研究作者：占利民，余又新，胡德林，王春華，郭海雷，方林森徐慶連 作者單位：230022 安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院燒傷科(通訊作者)【摘要】 目的 研究膿毒癥大鼠早期血清一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素-1(ET-1)水平的變化及相互關(guān)系。方法 64只SD大鼠隨機分成A組(假手術(shù)組，n=32)和B組(膿毒癥組，n=32)，A組僅行盲腸探查術(shù)，B組采用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)制作大鼠膿毒癥模型。兩組術(shù)后即刻皮下注射生理鹽水5 ml。各組均于術(shù)后3、6、12、24 h時點經(jīng)腹主動脈采血檢測血清NO和ET-1。結(jié)果 盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)造模后B組較A組在各時點血清N

2、O和ET-1水平均明顯升高(P<0.05)，在各時點B組血清NO/ET-1比值顯著低于A組(P<0.05)。結(jié)論 血漿NO和ET-1水平升高是膿毒癥大鼠早期出現(xiàn)微循環(huán)障礙、血管通透性降低的重要原因，在膿毒癥發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。【關(guān)鍵詞】 膿毒癥;一氧化氮;內(nèi)皮素-1;大鼠Study of serum nitric oxide and endothelin-1 level in septic ratsZHAN Li-min，YU You-xin，HU De-lin，et al.Department of Burns，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Anh

3、ui Medical University，Hefei 230022，ChinaAbstract Objective To study septic rats on changes in nitric oxide(NO) and endothelin-1(ET-1) level in serum.Methods 64 SD rats were divided into two groups randomly：group A(sham group，n=32) and group B(sepsis group，n=32).In group A，appendix exploration was do

4、ne.In group B，the animals received cecal ligation and puncture (CLP).In each group，the animals were subcutaneous injected saline of 5 ml at the time of operation respectively.In group A,B，all rats were taken to measure the levels of nitric oxide and endothelin-1 in serum through abdominal aortic blo

5、od at 3,6,12,24 h.Results Compared with group A，the levels of NO and ET-1 in serum were increased significantly in group B(P<0.05)，the levels of NO/ET-1 in serum were significantly lower in group B than in group A at every time point(P<0.05).Conclusion The high levels of NO and ET-1 may be the

6、 inportant causes of the damaged microcirculation and the elevated vascular permeability，they may have a certain effect on the sepsis.Key words sepsis;nitric oxide;endothelin-1;rat膿毒癥是嚴重創(chuàng)傷、燒傷、休克等常見的并發(fā)癥，是重癥監(jiān)護室最主要的死亡原因，研究顯示膿毒癥所致死亡率超過50%1。盡管對膿毒癥機制進一步認識，治療技術(shù)的不斷發(fā)展，在過去30年來，這一數(shù)據(jù)沒有明顯的改變，最近研究表明一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(E

7、T-1)是與膿毒癥相關(guān)的主要因素之一2，3。ET-1和NO是主要的血管收縮和舒張物質(zhì)，是一對重要的血管張力調(diào)節(jié)物質(zhì)，主要功能是改善微循環(huán)，但在分泌失調(diào)時又引起嚴重的組織細胞缺血缺氧性損害。本文通過觀察膿毒癥大鼠血清NO和ET-1水平的變化，以探討膿毒癥時NO和ET-1在膿毒癥時微循環(huán)障礙，血管通透性降低中的 作用。1 材料與方法1.1 實驗動物與分組 清潔級SD大鼠64只(安徽醫(yī)科大學動物實驗中心提供)，體重(250±30)g，雌雄不限。大鼠染色編號，隨機分成兩組：A組(假手術(shù)組，n=32)和B組(膿毒癥組，n=32)，兩組術(shù)后即刻皮下注射生理鹽水5 ml。1.2 動物模型制備 試驗

8、性飼養(yǎng)一周，術(shù)前各組大鼠禁食過夜(自由飲水)。B組依照相關(guān)文獻4方法行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)復制膿毒癥動物模型。A組打開腹腔找到盲腸后縫合腹壁切口，盲腸不做穿刺。1.3 血清NO和ET-1標本采集 A、B組均于術(shù)后3 h、6 h、12 h和24 h四時點，分批用水合氯醛麻醉大鼠，剖腹行腹主動脈抽取血標本進行血清NO和ET-1檢測。1.4 血清NO和ET-1標本檢測 標本置于4 下，4 000 r/min離心10 min，分離血清并置于-80 冰箱中保存。應用酶聯(lián)免疫原理檢測標本中NO和ET-1的含量(檢測試劑盒購于南京基蛋生物技術(shù)有限公司，嚴格按說明書進行操作)。1.5 統(tǒng)計學處理 采用SP

9、SS 11.5軟件包進行統(tǒng)計學處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較用t檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。2 結(jié)果在CLP術(shù)后3 h，B組血清NO和ET-1水平即開始上升，明顯高于A組(P<0.05);在術(shù)后12 h達到峰值，以后一直維持較高水平，顯著高于A組(P<0.05)。B組大鼠在CLP術(shù)后3 h，NO/ET-1比值開始降低，且隨時間推移逐漸降低，在24 h達最低值，顯著低于A組(P<0.05)。見表1。表1 兩組大鼠血清NO、ET-1和NO/ET-1指標測定結(jié)果注：B組與A組比較，P<0.05;P<0.05;P<

10、;0.053 討論膿毒癥時，炎癥因子與血管內(nèi)皮細胞損傷相互作用，引起微血栓形成，血管收縮因子ET-1、TXA等和舒張因子NO、PGI等大量釋放，平衡失調(diào)，使血管張力和血流動力學調(diào)節(jié)機制受損，導致血管通透性增加、微循環(huán)障礙，進一步導致器官功能障礙。NO由左旋精氨酸在一氧化氮合酶作用下產(chǎn)生，是主要的血管舒張物質(zhì)5，基礎(chǔ)量的NO具有防止血管痙攣和血栓形成作用，而在創(chuàng)傷、膿毒癥等條件下，誘導性一氧化氮合酶(iNOS)在炎癥刺激下大量表達，使體內(nèi)NO水平呈指數(shù)級增加，高濃度的NO通過脂質(zhì)過氧化反應，對機體產(chǎn)生破壞作用6，7，本實驗結(jié)果顯示，在CLP術(shù)后3 h，B組血清NO開始上升，到術(shù)后12 h達到峰值

11、，隨后稍有下降，但仍處于較高水平，明顯高于A組(P<0.05)。提示膿毒癥時產(chǎn)生大量的NO，增加血管通透性，在膿毒癥發(fā)生發(fā)展中可能起到重要作用。ET-1是主要的內(nèi)皮源性血管收縮劑，具有強烈持久的收縮血管平滑肌的作用，可引起全身各種血管，尤其是內(nèi)臟血管的收縮8。本實驗中，在CLP術(shù)后3 h，B組血清ET-1水平開始上升，到術(shù)后12 h達到峰值，在24 h時點稍有下降，但仍處于較高水平，明顯高于A組(P<0.05)。提示ET-1不僅是內(nèi)皮細胞損傷的指標，同時也是膿毒癥時微循環(huán)障礙的重要因素。本實驗也從NO/ET-1的角度觀察到NO和ET-1加重膿毒癥大鼠微循環(huán)障礙，血管通透性降低的作用

12、，實驗結(jié)果顯示，NO上升速度低于ET-1，隨著血清中NO和ET-1平衡失調(diào)，比值逐漸下降，顯著低于A組(P<0.05)。提示膿毒癥時，高表達ET-1和NO平衡失調(diào)，并隨膿毒癥的發(fā)展有逐漸加劇的表現(xiàn)。表明NO和ET-1在膿毒癥早期發(fā)病中具有重要作用，是導致膿毒癥時微循環(huán)障礙，血管通透性降低的重要原因，為臨床上膿毒癥的治療提供了重要的理論依據(jù)。【參考文獻】1 Hinshaw LB.Sepsis/septic shock：Participation of the microcirculation：An abbreviated review.Crit Care Med，1996，24：1072-

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14、磊.膿毒癥動物模型制作方略及應用.中華實驗外科雜志，2006，23(12)：1433-1434.5 Xiao-Qi Xie，Yotaro S，Junichi S，et al.The effects of arginine and selective inducible nitric oxide synthase inhibitor on pathophysiology of Sepsis in a CLP Model.Jonural of Surgical Research，2008，146：298-303.6 Ann S，Yoram V，Richard W，et al.Nitric oxide and wound repair：role of cytokines?Nitric Oxide，2002，7：1-10.7 Bahar T，Sedat A，Orhan U，et al.Effects of cyclooxygenase inhibitors o