7500熒光定量PCR儀使用說明

1、7500熒光定量PCR儀使用說明注意事項：實驗過程必須戴干凈的一次性乳膠手套 進(jìn)行操作。PCR反應(yīng)所用的96孔板、8聯(lián)管或單管必須為ABI7500專用，凸蓋PCR管禁止使用。 使用8聯(lián)管兩側(cè)需用空管支撐，使用單管四角需用空管支撐，以防止板槽受力不均。實驗數(shù)據(jù)用光盤刻錄，禁止U盤拷取，數(shù)據(jù)可暫存于本機(jī)電腦硬盤中，各實驗室D盤中有指定 文件夾，中心外部人員數(shù)據(jù)存于FUWU文件夾下的子文件夾中。操作步驟?開機(jī)依次打開電腦顯示屏、主機(jī)，輸入開機(jī)密碼“ 7500”待電腦啟動穩(wěn)定后，按壓7500儀器電源按扭，等待儀 器啟動（約30 s）。當(dāng)儀器只顯示Power狀態(tài)指 示燈時，方可按壓托盤以打 開它。放入反

2、應(yīng)板按壓此處注:關(guān)閉儀器托盤時，應(yīng)按一個角度推壓托盤的右側(cè)。（以下過程按字母順序a-q進(jìn)行操作）?創(chuàng)建反應(yīng)板文件雙擊電腦桌面上SDS軟件圖標(biāo)打開SDS軟件;在對話框中選擇 Create New Document,或選擇菜單欄 File > New; c.單擊 Nextb.為反應(yīng)板文件命名a.從 Assay下拉列表中選擇反應(yīng)板類型1.Relative Quantification （ddCt） Plate（相對定卓里）2.Absolute Quantification （Standard對定量標(biāo)準(zhǔn)曲線）Curve）（絕3.Allelic Discrimination （等位基因鑒別）4.P

3、lus/Minus （陽性/陰性實驗）反應(yīng)板文件類型有以下幾種f. 單擊Nextd.選擇要添加到反應(yīng)板 文件的探針（引物），單擊 Add添加選中探針e.如果在列表中未列出 所需探針，請單擊NewDetector創(chuàng)建新探針?為每個反應(yīng)孔指定探針與任務(wù)?為反應(yīng)孔設(shè)置樣品名g. 選取探針相同的反應(yīng)孔h. 點擊反應(yīng)孔對應(yīng)的探針。i. 單擊Task欄的下邊指定探 針任務(wù)。j. 選擇Use （使用）。k. 單擊Finish （完成）。BWPIIT 加 XCUE1/PlateEspon 川I Tc 兀叭igimrHnM yslem- p jte ' jr J C:-14乩 船 閔.亠 匕-JB.JL

4、 lh F!2innru-rtA- |L1»_iq占金屜百區(qū)1 r n縞甩g := 川屮 Tools-AMljfsisWindowti-dpFswirt Tom*卩和",刊岡n JPF.J.1二 駅 |進(jìn)行修改）l. 選取反應(yīng)孔，直接輸入相 應(yīng)樣品名（也可右鍵，調(diào) 出反 Well Inspector 對話 框，在 Sample Name 中MH Q-iarflap陽 dyiDilscoiMectedII iw 胡?設(shè)定PCR循環(huán)參數(shù)、運行程序J tiM t J'lJBtrnlZJL醫(yī)E卿¥InstSvkgft-rnrt stnrtg> 750C SymteF S XftBE - PlalsL 洛lardedp 日1令 過力薩 工gk Jnstrjrnnt Anlyis Wndow HlpELiltM TLlwm. 選擇 Instrument 選項卡，默認(rèn)條件下顯示標(biāo)準(zhǔn)PCR條件，可跟據(jù)實 驗具體情況修改；n. 單擊 Add DissociationStage添加溶解曲線循 環(huán)；o. 修改PCR反應(yīng)體積；p. 將反應(yīng)板文件保存至 指定路徑。q. 點擊Start運行程序?結(jié)束實驗1. 實驗結(jié)束后關(guān)閉軟件。（確認(rèn)反應(yīng)板文件數(shù)據(jù)已保存）2. 打開拖盤，將反應(yīng)板取出，關(guān)閉拖盤。3. 按下7500儀器電源開關(guān)