Mic微生物感染的實(shí)驗(yàn)室診斷ppt課件

1、Peking University Health Science CenterLaboratory diagnosis of microorganism infection精品課程精品課程醫(yī)學(xué)微生物學(xué)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部病原生物學(xué)系鄒清華P157實(shí)驗(yàn)室診斷的意義實(shí)驗(yàn)室診斷的意義n明確患者的臨床診斷明確患者的臨床診斷n選擇有效的治療措施選擇有效的治療措施n預(yù)防疾病繼續(xù)傳播與流行預(yù)防疾病繼續(xù)傳播與流行n判別患者預(yù)后判別患者預(yù)后實(shí)驗(yàn)室診斷方法分類實(shí)驗(yàn)室診斷方法分類n鏡下直接察看鏡下直接察看n病原微生物分別、培育和鑒定病原微生物分別、培育和鑒定n病原微生物的抗原檢測病原微生物的抗原檢測n特異性特

2、異性RNA或或DNA片段檢測片段檢測n抗體和細(xì)胞免疫指征的檢測抗體和細(xì)胞免疫指征的檢測n樣本的采集、運(yùn)輸、樣本前期處置樣本的采集、運(yùn)輸、樣本前期處置n形狀學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物形狀學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)和生物學(xué)等方法檢查出病原微生物及學(xué)和生物學(xué)等方法檢查出病原微生物及其型別其型別n動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)菌毒素檢測和藥物敏感性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)菌毒素檢測和藥物敏感性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷n采集操作：無菌操作采集操作：無菌操作 ，做好標(biāo)志，做好標(biāo)志n采集部位：組織、血、尿液、糞便、痰、采集部位：組織、血、尿液、糞便、痰、腦脊液、分泌物、嘔吐物、胸腹穿刺物及腦脊液、分泌物

3、、嘔吐物、胸腹穿刺物及解剖樣品等解剖樣品等 n采集時(shí)機(jī)：根據(jù)病程開展的不同階段采集采集時(shí)機(jī)：根據(jù)病程開展的不同階段采集不同部位的樣品不同部位的樣品 n運(yùn)輸：應(yīng)遵照平安、快捷的原那么運(yùn)輸：應(yīng)遵照平安、快捷的原那么 n前期處置：濃縮前期處置：濃縮 標(biāo)本采集和運(yùn)送標(biāo)本采集和運(yùn)送 形狀學(xué)檢查形狀學(xué)檢查n細(xì)菌的培育特征察看：細(xì)菌的培育特征察看：n顏色、氣味、溶血性、菌落形狀、細(xì)菌顏色、氣味、溶血性、菌落形狀、細(xì)菌動(dòng)力及在液體、半固體、固體培育基中動(dòng)力及在液體、半固體、固體培育基中的生長形狀的生長形狀 n顯微鏡檢查法：形狀、根本構(gòu)造、染色顯微鏡檢查法：形狀、根本構(gòu)造、染色性、陳列方式、數(shù)量性、陳列方式、數(shù)

4、量 n非染色檢查法非染色檢查法 n染色檢查法染色檢查法n負(fù)染色檢查法負(fù)染色檢查法 細(xì)菌分別培育法細(xì)菌分別培育法 臨床標(biāo)本臨床標(biāo)本細(xì)菌分別：分區(qū)劃線細(xì)菌分別：分區(qū)劃線細(xì)菌培育細(xì)菌培育挑取單菌落，純培育挑取單菌落，純培育鑒定鑒定細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷程序細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷程序 免疫學(xué)檢查免疫學(xué)檢查 n免疫沉淀反響免疫沉淀反響 n凝集反響凝集反響 n補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn) n免疫標(biāo)志技術(shù)免疫標(biāo)志技術(shù) 生物化學(xué)檢查生物化學(xué)檢查 n糖代謝實(shí)驗(yàn) n糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn) n甲基紅實(shí)驗(yàn) nV-P實(shí)驗(yàn) n蛋白質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn) n硫化氫產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)n尿素分解實(shí)驗(yàn)n碳源和氮源利用實(shí)驗(yàn) n枸櫞酸鹽利用實(shí)驗(yàn) n呼吸酶類實(shí)驗(yàn)n過氧化氫酶實(shí)

5、驗(yàn)n氧化酶實(shí)驗(yàn) 分子生物學(xué)檢查分子生物學(xué)檢查 nG+C測定技術(shù)測定技術(shù) n核酸雜交技術(shù)核酸雜交技術(shù) n聚合酶鏈反響技術(shù)聚合酶鏈反響技術(shù) n質(zhì)粒指紋圖譜技術(shù)質(zhì)粒指紋圖譜技術(shù)n蛋白質(zhì)芯片技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)nDNA芯片技術(shù)芯片技術(shù)生物學(xué)檢查生物學(xué)檢查 n噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)噬菌體裂解實(shí)驗(yàn) n細(xì)菌素分型技術(shù)細(xì)菌素分型技術(shù) n抗菌譜實(shí)驗(yàn)抗菌譜實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)菌毒素檢測動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及細(xì)菌毒素檢測 小鼠小鼠豚鼠豚鼠家兔家兔* LD50* ID50藥物敏感性實(shí)驗(yàn)藥物敏感性實(shí)驗(yàn) n紙片分散法紙片分散法 n液體稀釋法液體稀釋法 nE測定法測定法(E test) n自動(dòng)化藥敏測定法自動(dòng)化藥敏測定法 n耐藥基因測定法耐藥基因

6、測定法 病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷 標(biāo)本的采集和送檢標(biāo)本的采集和送檢n標(biāo)本采集部位：標(biāo)本采集部位：n鼻咽分泌液或痰液鼻咽分泌液或痰液 、腦脊液、腦脊液 、糞便、糞便 、血液、血液 n標(biāo)本采集時(shí)間標(biāo)本采集時(shí)間 n發(fā)病早期或急性期發(fā)病早期或急性期n標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本運(yùn)送n對熱不穩(wěn)定，裝有冰塊或干冰的容器內(nèi)立刻送對熱不穩(wěn)定，裝有冰塊或干冰的容器內(nèi)立刻送檢檢 n參與青霉素、鏈霉素等抗生素參與青霉素、鏈霉素等抗生素 ，抑制細(xì)菌和，抑制細(xì)菌和真菌生長真菌生長形狀學(xué)檢查形狀學(xué)檢查 n光學(xué)顯微鏡檢查光學(xué)顯微鏡檢查 n包涵體包涵體inclusion：某些病毒感染宿：某些病毒感染宿主細(xì)胞后主細(xì)胞后,可在細(xì)

7、胞核或漿內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)或可在細(xì)胞核或漿內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)或數(shù)個(gè)、呈圓形或不規(guī)那么、大小不一、數(shù)個(gè)、呈圓形或不規(guī)那么、大小不一、嗜酸性或嗜堿性的構(gòu)造嗜酸性或嗜堿性的構(gòu)造 n電鏡檢查電鏡檢查 n直接電鏡法直接電鏡法 n免疫電鏡法免疫電鏡法 病毒分別和培育病毒分別和培育 n動(dòng)物接種動(dòng)物接種n小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、雞、猴，采用鼻腔、腦內(nèi)、皮小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、雞、猴，采用鼻腔、腦內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹腔、靜脈等方式下、皮內(nèi)、腹腔、靜脈等方式 n雞胚培育雞胚培育n組織培育組織培育n器官培育器官培育n組織培育組織培育n細(xì)胞培育細(xì)胞培育n原代細(xì)胞培育：原代細(xì)胞培育： 23代代 用于診斷和疫苗制備用于診斷和疫苗制備

8、 n二倍體細(xì)胞培育：二倍體細(xì)胞培育：40 10代代 n傳代細(xì)胞培育：無限傳代傳代細(xì)胞培育：無限傳代 用于分別多種病毒，但不能用于用于分別多種病毒，但不能用于制備疫苗制備疫苗 病毒生長繁衍的目的與鑒定病毒生長繁衍的目的與鑒定 n細(xì)胞病變效應(yīng)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE)n紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞吸附 n紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞凝集 n干擾作用干擾作用 n細(xì)胞代謝反響細(xì)胞代謝反響n空斑構(gòu)成單位空斑構(gòu)成單位PFU n細(xì)胞病變效應(yīng)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE)n 培育的單層細(xì)胞接種病毒后導(dǎo)致細(xì)培育的單層細(xì)胞接種病毒后導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生圓縮、溶解、零落等病變的景胞發(fā)

9、生圓縮、溶解、零落等病變的景象。象。 病變細(xì)胞正常細(xì)胞紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞凝集病毒干擾作用病毒干擾作用空空 斑斑 plaque由病毒感染細(xì)胞后在培育瓶的由病毒感染細(xì)胞后在培育瓶的瓊脂層上構(gòu)成的一個(gè)壞死病灶瓊脂層上構(gòu)成的一個(gè)壞死病灶空斑構(gòu)成單位空斑構(gòu)成單位 PFU (plaque formation unit)每毫升空斑構(gòu)成單位每毫升空斑構(gòu)成單位 病毒蛋白的檢測病毒蛋白的檢測 nSDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳 n免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù) n酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù) n固相放射免疫技術(shù)固相放射免疫技術(shù) n蛋白印記分析蛋白印記分析 病毒核酸的檢測病毒核酸的檢測 n核酸分子雜交技術(shù)核