下咽鱗狀細(xì)胞癌中Slit2的表達(dá)及其與微血管密度關(guān)系的臨床研究

1、下咽鱗狀細(xì)胞癌中Slit2的表達(dá)及其與微血管密度關(guān)系的臨床研究    作者：姚磊,張中華,馬超,雷大鵬,潘新良作者單位：1. 山東大學(xué)齊魯醫(yī)院耳鼻咽喉科； 2. 山東大學(xué)衛(wèi)生部耳鼻喉科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 濟(jì)南                             

2、0;                       【摘要】目的 研究下咽鱗狀細(xì)胞癌組織中神經(jīng)遷移蛋白Slit2的表達(dá)及其與微血管密度的關(guān)系，探討兩者對下咽鱗狀細(xì)胞癌的生物學(xué)行為的影響。方法 免疫組織化學(xué)法檢測Slit2蛋白的表達(dá)及微血管密度（MVD），并應(yīng)用RTPCR法檢測新鮮組織中Slit2 mRNA的表達(dá)。研究其表達(dá)與腫瘤臨床特征的關(guān)系。結(jié)果 Slit2蛋白在下咽鱗狀細(xì)胞癌

3、和癌旁組織中的表達(dá)率分別為65.2%和40.5%，兩者表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=6.329，P<0.05）；Slit2 mRNA在下咽鱗狀細(xì)胞癌和癌旁組織中的表達(dá)，差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.230,P<0.05）。Slit2蛋白的表達(dá)與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)；MVD計(jì)數(shù)與腫瘤大小、浸潤深度、TNM分期和淋巴節(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，兩者與腫瘤的發(fā)病年齡、部位、臨床病理分化程度均無關(guān)。腫瘤組織中Slit2陽性表達(dá)者M(jìn)VD計(jì)數(shù)高于Slit2陰性表達(dá)者，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.273,P<0.05）；并且兩者表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.430，P<0.05）。結(jié)

4、論 下咽鱗狀細(xì)胞癌組織中Slit2表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)，與腫瘤的侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其機(jī)制可能為SlitRobo信號系統(tǒng)介導(dǎo)了腫瘤新生血管的形成，從而影響了腫瘤的生物學(xué)行為。 【關(guān)鍵詞】  蛋白Slit2；下咽腫瘤；免疫組織化學(xué)；微血管密度     density in hypopharyngeal squamous cell carcinoma     YAO Lei1, ZHANG Zhonghua1, MA Chao2, LEI Dapeng1,PAN Xinliang1     (1.

5、 Department of Otolaryngology and Head & Neck Surgery, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, China;     2. Key Laboratory of the Ministry of Health ENT，Shandong University, Jinan 250012, China)     To investigate expression of Slit2 and its correlation

6、 with microvessel density in human hypopharyngeal squamous cell carcinomas, and to analyze their influences on the biological behavior of human hypopharyngeal squamous cell carcinoma. Methods  Expressions of Slit2 and CD34labeled microvessel density (MVD) were measured by immunohistochemical st

7、aining (Envision), and expression of Slit2 mRNA in 24 cases of fresh tissues was determined by reversetranscript polymerase chain reaction.  Results  The positive rates of Slit2 in cancerous tissues and paracancerous tissues were respectively 65.2% and 40.5%（2=6.329，P<0.05）. Slit2 mRNA

8、expressions between them also had statistical significance (t=8.230, P<0.05). Expression rate of Slit2 and  enumeration of MVD were significantly associated with tumor size，TNM stage, and lymph node metastasis. Enumeration of MVD was increased in  Slit2positive tissues（t=2.273, P<0.0

9、5）. Expression of Slit2 had a positive correlation with MVD（rs=0.430，P<0.05）. Conclusion  Expression of Slit2 and enumeration of MVD are significantly higher in hypopharyngeal squamous cell carcinoma than in normal mucosa. They have significant relations to tumor invasion and lymph node meta

10、stasis，and the mechanism might be that Slit2 mediated new vessel formation in tumors.     Key words: Slit2; Hypopharyngeal neoplasms; Immunohistochemical staining; Microvessel density     神經(jīng)遷移蛋白Slit是1984年NussleinVolhard等在果蠅體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的分泌型的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，由基因4p15.2編碼，有多個蛋白質(zhì)結(jié)合區(qū)域1。哺乳動物體內(nèi)

11、的Slit有3個亞型，均在神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)，不僅僅能夠影響神經(jīng)元軸突（或是胞體）的遷移,還能夠抑制趨化因子誘導(dǎo)的白細(xì)胞的遷移2。后二種亞型還存在于哺乳動物神經(jīng)外系統(tǒng)中，特別是腫瘤細(xì)胞中。Wang等3研究證實(shí)，在結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌等實(shí)體瘤中均有Slit2蛋白的表達(dá),同時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞上有Robo1表達(dá)，并首次報(bào)道了SlitRobo信號系統(tǒng)在腫瘤新生血管形成中發(fā)揮的重要作用。該研究將腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞之間新的"對話"機(jī)制引入到了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程當(dāng)中，為腫瘤的發(fā)病機(jī)制和治療方法開辟了一個新的研究方向。下咽鱗狀細(xì)胞癌是頭頸部常見的惡性腫瘤，有關(guān)Slit2蛋白的表達(dá)及其所誘導(dǎo)的新

12、生血管形成在下咽鱗狀細(xì)胞癌中的報(bào)道甚少，本研究通過觀察下咽癌組織中Slit2蛋白的表達(dá)及其與新生血管密度的關(guān)系，探討Slit2基因在下咽癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。     1  資料與方法         1.1  材料  選取2006年1月至2008年6月間，山東大學(xué)齊魯醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科手術(shù)切除的下咽鱗狀細(xì)胞癌組織66例、癌旁組織42例（距離腫瘤邊緣2?cm），其中男61例，女5例，4974歲，平均63歲。所有患者術(shù)前未接受放射、化學(xué)、非甾體類抗炎藥及免疫治療，均

13、經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為鱗狀細(xì)胞癌。其中12例癌及癌旁組織為新鮮手術(shù)標(biāo)本，以無菌手術(shù)刀片取下，用生理鹽水沖洗血跡后分成兩塊，一塊用10%中性甲醛固定，用于免疫組織化學(xué)染色；另一塊在離體30?min內(nèi)放入-80?冰箱中保存。其余標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋, 4?m連續(xù)切片。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）1997年制定的下咽癌TNM分期法進(jìn)行臨床分期。     1.2  主要試劑  山羊抗人Slit2多克隆抗體（克隆號sc26599；1100）（Santa Cruz公司產(chǎn)）；鼠抗人CD34單克隆抗體（1：100）、辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗山羊IgG二

14、抗（1：500）、二步法免疫組化試劑盒（PV9000）（北京中杉金橋公司產(chǎn)）；DAB 顯色劑（上海華舜生物工程有限公司）；Trizol（Invitrogen公司產(chǎn)）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Promega公司）；PCR Mix（Takara公司）。     1.3  方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)     1.3.1  免疫組織化學(xué)法檢測標(biāo)本中Slit2蛋白的表達(dá)及檢測微血管密度  免疫組織化學(xué)染色采用Envision二步法檢測，常規(guī)脫蠟、梯度乙醇水化后微波修復(fù)抗原。30?mL/L過氧化氫甲醇溶液孵育10?min以滅活內(nèi)源性過

15、氧化物酶，100?g/L BSA溶液封閉非特異性抗原，傾去BSA后滴加一抗，4?過夜。滴加兔抗山羊IgG二抗，37?孵育60?min，DAB 顯色。蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，封片。以已知陽性的下咽癌組織切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。     Slit2陽性染色為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，陽性細(xì)胞為細(xì)胞著色且著色明顯高于背景或背景不著色。每張切片根據(jù)陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)方法：先在低倍鏡下選取有代表性的視野再在高倍鏡下計(jì)數(shù)，每例計(jì)數(shù)4個高倍鏡視野至少200個細(xì)胞。Slit2陽性等級判定參考Mattern等4的方法并

16、加以改進(jìn)：根據(jù)陽性細(xì)胞占總計(jì)數(shù)細(xì)胞的百分率分為四級：0%、11%、26%、51%100%，分別記為“-”，“+”,“+KG-*3+”,“+KG-*3+KG-*3+”。將“”記為陰性表達(dá)，“+”，“+”和“+”記為陽性表達(dá)。     MVD計(jì)數(shù)參照Maeda等5報(bào)道的方法,以CD34作為血管 內(nèi)皮標(biāo)記物。首先在低倍鏡(100×)下全面觀察切片以確定腫瘤內(nèi)血管密度最大處,再在高倍鏡(200×)下,以與周圍腫瘤細(xì)胞和結(jié)締組織成份明顯區(qū)別的任何一個棕色染色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢作為一個血管,只要結(jié)構(gòu)不相連,其分枝結(jié)構(gòu)也作為一個微血管計(jì)數(shù)。記錄5個視野內(nèi)微血

17、管數(shù), 取其平均數(shù)作為該張切片MVD值。     1.3.2  RTPCR法檢測下咽癌中Slit2 mRNA的表達(dá)  參照Trizol 試劑說明書的操作抽提RNA，用分光光度計(jì)測定濃度之后，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以actin為內(nèi)參照，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。Slit2引物序列：上游引物為：5TGCCCATCAATGCGTTCTCCTAC3，下游引物為：5TCGTACAGCCGCACTTCACCACT3，擴(kuò)增產(chǎn)物為421?bp，循環(huán)條件為：94?,5?min94?,45?s58?,45?s72?,45?s72?，45?s72?

18、，5?min，33個循環(huán)。actin引物序列為：上游引物為：5CCCCATCGAGCACGGCATCG3，下游引物為：5GGAGTCCTGTGGCATCCACG3，擴(kuò)增產(chǎn)物為620?bp，循環(huán)條件為94?,5?min94?,45?s55?,45?s72?,45?s72?，5?min，26個循環(huán)。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳。電泳后，使用Quantity One軟件分別對目的帶進(jìn)行量化。記錄每個條帶的灰度值,將實(shí)驗(yàn)組灰度值和與之相對應(yīng)的內(nèi)參照組灰度相比,得此比值作為Slit2 相對表達(dá)水平的參數(shù)。     1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  應(yīng)用

19、SPSS 13.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料組間陽性率比較用成組2檢驗(yàn)，兩樣本計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)及Spearman等級相關(guān)性分析，以=0.05作為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。     2  結(jié)  果       2.1  Slit2蛋白在各組織中的表達(dá)及MVD計(jì)數(shù)  66例下咽鱗狀細(xì)胞癌組織中，43例Slit2表達(dá)陽性（65.2%），陽性表達(dá)部位主要位于腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，棕黃色，顆粒狀;在鱗癌癌巢的中心部位較周邊部位表達(dá)更強(qiáng)（圖1）。與癌旁組織相比，下咽癌的Slit2蛋白的表達(dá)水平增高具

20、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2 =6.329，P<0.05）（表1）。鱗癌組織中新生微血管排列紊亂，大小及密度不均，血管高密度區(qū)主要位于腫瘤邊緣的間質(zhì)內(nèi)（圖2）。     例數(shù)陰性2值P值MVD平均計(jì)數(shù)下咽鱗狀細(xì)胞癌組織6643236.3290.01226.68±5.97癌旁組織42172519.92±3.732.2  下咽鱗狀細(xì)胞癌中Slit2蛋白表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)與臨床病理特征的關(guān)系  下咽鱗狀細(xì)胞癌中，Slit2蛋白的表達(dá)與腫瘤大小、TNM分期、淋巴節(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)；MVD計(jì)數(shù)與腫瘤大小、浸潤深度、TNM分期和淋巴節(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。

21、兩者與腫瘤的發(fā)病年齡、部位、臨床病理分化程度均無關(guān)。66例下咽癌組織中，Slit2蛋白表達(dá)陽性43例，其MVD計(jì)數(shù)為27.87±5.61；Slit2蛋白表達(dá)陰性23例，其MVD計(jì)數(shù)為24.47±6.12，兩者M(jìn)VD計(jì)數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.273,P<0.05）。表 2  Slit2蛋白表達(dá)及MVD計(jì)數(shù)與下咽癌臨床病理     特征的關(guān)系     nSlit2陽性陰性P值P值  60251690.87824.88±5.41>0.05  6041271427.

22、78±6.10腫瘤大小(cm)  23719180.01924.64±2.22<0.05  22923629.29±7.99病理分型  高/中分化4023170.10627.32±7.52>0.05  低分化2620625.69±1.71浸潤深度  T1/T23019110.96324.54±4.11<0.05  T3/T436231328.61±6.60TNM分期  +2712150.00723.40±4.56<0.01

23、  +3930928.95±5.82淋巴節(jié)轉(zhuǎn)移  有352780.01523.49±3.99<0.01  無31151630.28±5.82腫瘤部位  梨狀窩區(qū)5434200.80926.98±5.73>0.05  下咽后壁區(qū)     和環(huán)后區(qū)128425.35±7.112.3  下咽鱗狀細(xì)胞癌中Slit2蛋白表達(dá)和MVD的關(guān)系及其相關(guān)性分析  66例下咽鱗狀細(xì)胞癌中，Slit2蛋白表達(dá)陽性者的MVD值比表達(dá)陰性者的MVD值高，兩者差

24、別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。做spearman相關(guān)分析，結(jié)果顯示兩者在下咽鱗狀細(xì)胞癌中存在正相關(guān)關(guān)系（rs=0.430，P<0.05）。     2.4  下咽癌組織中Slit2 mRNA的表達(dá)  12例下咽鱗狀細(xì)胞癌組織Slit mRNA表達(dá)量較actin比值為0.90±0.23，12例癌旁組織的比值為0.32±0.09，腫瘤組織中Slit2 mRNA表達(dá)顯著增高，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.230,P<0.05）。并且在12例下咽鱗狀細(xì)胞癌組織中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，瘤體2?cm及TNM分期晚者均較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，瘤體2?

25、cm及TNM分期早者的Slit2 mRNA表達(dá)強(qiáng)度要高（圖3）。與免疫組織化學(xué)分析結(jié)果相符。圖 3  Slit2 mRNA表達(dá)結(jié)果與臨床病理特征分析圖KH*2D3  討  論     神經(jīng)遷移蛋白是近年來在發(fā)育生物學(xué)中的研究熱點(diǎn)，其主要功能是吸引或排斥神經(jīng)元軸突的遷移，在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用。目前研究發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)遷移蛋白主要由Ephrin/eph，Semaphorin/Neuropilin，Slit/Robo和Netrin/UNC40四大家族成員構(gòu)成。Slit蛋白是由神經(jīng)系統(tǒng)中線的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)和分泌的一種大分子量的細(xì)胞外基質(zhì)蛋

26、白。哺乳動物的Slit蛋白共有三型（Slit1Slit3），他們有60%的同源性6。人類Slit 2 蛋白經(jīng)水解后產(chǎn)生1個N末端片段Slit2N和1個C末端片段Slit2C。Slit2N 包含4 個LRRs和5 個EGF 重復(fù)序列，Slit2C 包含蛋白質(zhì)的其它部分。Slit2蛋白的全長和其片段都可被分泌到細(xì)胞外。Slit2蛋白的第二個LRR序列（Slit2 D2）參與和受體RoboN的兩個Ig序列的結(jié)合形成Slit2 D2Robo Ig1復(fù)合體7,此即SlitRobo信號系統(tǒng)中的關(guān)鍵結(jié)合點(diǎn)。血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)具有十分相似的結(jié)構(gòu)特征和發(fā)育機(jī)制?，F(xiàn)在越來越多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明SlitRobo信號通路

27、具有多種功能，其不僅在神經(jīng)系統(tǒng)的軸突導(dǎo)向生長，神經(jīng)元的遷移及白細(xì)胞趨化遷移中發(fā)揮著重要的作用，而且可以影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的生成和遷移，誘導(dǎo)腫瘤形成新生血管從而影響腫瘤的生物學(xué)行為。     腫瘤生長是血管依賴性的,若缺乏新生血管形成則腫瘤生長受限。在下咽鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生，發(fā)展和轉(zhuǎn)移的過程中，新生血管發(fā)揮著重要的作用。在腫瘤發(fā)生發(fā)展的早期，既無血管期或稱為血管生成前期，瘤體較小，氧供和營養(yǎng)供應(yīng)主要由周圍毛細(xì)血管和組織間液滲透提供，能量供應(yīng)部分依靠細(xì)胞的無氧酵解。此時(shí)腫瘤細(xì)胞數(shù)目有限且增殖緩慢，直徑一般不超過12?mm，少有轉(zhuǎn)移。隨著腫瘤的體積增大，細(xì)胞數(shù)目的增多，此種

28、營養(yǎng)供應(yīng)方式已不能滿足腫瘤生長的需要，若無足夠的血供，瘤體生長將受限并出現(xiàn)壞死810。Wang等3通過體外實(shí)驗(yàn)可觀察到Slit2在細(xì)胞表面的定植與硫酸肝素蛋白多糖(HSPG)成正相關(guān)，且TNFa、IL16能使Slit2表達(dá)增加，表明炎癥前介質(zhì)、低氧及癌基因表達(dá)與Slit2增加有關(guān)。LiJing Wang13等通過R5阻斷化學(xué)誘導(dǎo)的鱗狀細(xì)胞癌中SlitRobo信號系統(tǒng)，可以明顯抑制新生血管的形成，從而進(jìn)一步證實(shí)了該通路系統(tǒng)在新生血管形成中的誘導(dǎo)作用。根據(jù)本研究中Slit2表達(dá)及MVD計(jì)數(shù)在不同大小腫瘤中的差別具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以推斷，隨著腫瘤增大，瘤體內(nèi)出現(xiàn)缺氧、原炎癥因子表達(dá)等改變，此種內(nèi)

29、環(huán)境的變化啟動了一系列的新生血管的生成程序，打破了血管生成和血管生成抑制在瘤體局部的平衡。這就包括Slit2 基因表達(dá)的上調(diào)，使SlitRobo信號系統(tǒng)激活，其中起主要作用的是Robo4蛋白（MRB）通過激活RasRafMekErk信號通路14，從而促進(jìn)腫瘤新生毛細(xì)血管生成，為腫瘤的進(jìn)一步生長提供營養(yǎng)，并為其轉(zhuǎn)移提供必要的條件。     在本研究中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組下咽癌的Slit2的表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)明顯高于非轉(zhuǎn)移組；TNM分期晚、周圍組織浸潤明顯者與TNM分期早且瘤體局限的腫瘤組織中Slit2的表達(dá)和MVD計(jì)數(shù)相比，均有增高。由此可以認(rèn)為SlitRobo信號系統(tǒng)介導(dǎo)

30、的新生血管的形成在下咽癌的頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和瘤體向周圍浸潤過程中發(fā)揮了重要作用。與正常的炎癥反應(yīng)過程中血管增生不同，在腫瘤新生血管生成過程中，Slit2表達(dá)失去正常的基因調(diào)控，呈現(xiàn)過表達(dá)。通過SlitRobo信號系統(tǒng)的激活不斷誘導(dǎo)新生血管的形成，血管生成失去自控。腫瘤新生的毛細(xì)血管管壁薄弱，僅排列一層內(nèi)皮細(xì)胞，缺乏平滑肌組織，基底膜不完整，使它們比正常的成熟血管更容易被腫瘤細(xì)胞穿透，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生。有研究11發(fā)現(xiàn)，在新生血管形成過程中，與Slit類似的軸突排斥因子Semaphorins，可以通過抑制細(xì)胞外基質(zhì)integrin及其配體的功能來調(diào)節(jié)胚胎內(nèi)的血管形成。由此可以推斷，Slit2Ro

31、bo信號系統(tǒng)在新生血管形成中，通過對基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的降解誘導(dǎo)了內(nèi)皮細(xì)胞的增生、遷移和分化，此過程中形成的膠原裂隙利于癌細(xì)胞對周圍的侵襲；與此同時(shí)新生血管為腫瘤的生長侵襲提供了能量基礎(chǔ)。以上機(jī)制維持了腫瘤細(xì)胞對周圍組織侵襲的持續(xù)性。但是臨床病例中下咽癌最早多為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，究其原因可以解釋如下：毛細(xì)血管內(nèi)的環(huán)境，如血流速度過快等因素，使癌細(xì)胞較難存活且不易粘附種植，在血管遠(yuǎn)端再次穿出血管壁而形成新的病灶的幾率也很小。然而與毛細(xì)血管相比，毛細(xì)淋巴管壁更薄，沒有基底膜，并且可見大量開放的裂隙，所以癌細(xì)胞更易侵入毛細(xì)淋巴管12。所以，SlitRobo信號系統(tǒng)所介導(dǎo)的腫瘤新生毛細(xì)血管的形成維持和加強(qiáng)了

32、腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，并在侵襲和轉(zhuǎn)移過程中通過增加血供的方式來提供營養(yǎng)支持。此外，在乳腺癌腦轉(zhuǎn)移模型的最新研究中15，阻斷CXCL12/CXCR4通路的化學(xué)趨化作用所介導(dǎo)的腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制后，Slit2蛋白可以直接誘導(dǎo)表達(dá)Robo蛋白的乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，從而證明了SlitRobo信號系統(tǒng)在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中的直接引導(dǎo)作用。此種機(jī)制在下咽癌的轉(zhuǎn)移中可能也發(fā)揮著同樣的功能，但尚需進(jìn)一步的驗(yàn)證。     Slit2的表達(dá)及通過SlitRobo信號系統(tǒng)介導(dǎo)的腫瘤新生血管的形成在下咽鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用。Slit2蛋白的表達(dá)強(qiáng)度及MVD的計(jì)數(shù)值

33、可以作為判斷下咽鱗狀細(xì)胞癌的生長、浸潤及轉(zhuǎn)移能力的重要指標(biāo)。對腫瘤的輔助診斷和抗血管治療具有重要的指導(dǎo)意義。其具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的深入研究。 【參考文獻(xiàn)】 1 NussleinVolhard C， Wieschaus E， Kluding H. Mutations affecting the pattern of the larval cuticle in Drosophila melanogaster IZygotic loci on the second chromosomeWilhelm Rouxs ArchJDev Biol， 1984， 193(9):267283. 2 Wu

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35、cancer growth by blocking Robo activityJ. Cancer Cell, 2003, 4(1):1929. 4 Mattern J, Koomagi R, Volm M. Biological characterization of subgroup s of squamous cell lung carcinomasJ. Clin Cancer Res, 1999, 5(6):14591463. 5 Maeda K, Chung Y S, Ogana Y， et al. Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinomaJ. Cancer, 1996, 77(5):858863. 6 Chédotal A. Slits and their receptorsJ. Adv Exp Med Biol, 2007, 621:6580. 7 Morlot C, Thielens NM, Ravelli RB,et al. Structural insights into the SlitRobo complexJ. Proc Natl Acad Sc