妊高征患者絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞一氧化氮合酶含量及活性相關(guān)性的研究

1、    妊高征患者絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞一氧化氮合酶 含量及活性相關(guān)性的研究        【摘要】目的探討妊高征患者絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞一氧化氮合酶含量與活性的相關(guān)性。方法采用免疫組織化學(xué)ABC法和酶組織化學(xué)法(四唑鹽法)，檢測(cè)32例妊高征患者(妊高征組)和32例正常足月妊娠婦女(正常組)絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞一氧化氮合酶(NOS)含量及活性的改變。結(jié)果兩組絨毛均存在eNOS、iNOS抗原及NOS活性的陽性表達(dá)，且部位相同。兩組絨毛血管內(nèi)皮細(xì)胞中eNOS、iNOS抗原及NOS活性

2、的表達(dá)強(qiáng)度基本一致；而合體滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)，則妊高征組低于正常組。兩組合體滋養(yǎng)細(xì)胞中，NOS活性表達(dá)強(qiáng)度的例數(shù)分布與eNOS含量表達(dá)強(qiáng)度的例數(shù)分布呈正相關(guān)，而與iNOS含量無相關(guān)性。中、重度妊高征患者合體滋養(yǎng)細(xì)胞中，NOS活性與eNOS含量間也呈正相關(guān)。結(jié)論絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞eNOS含量及活性的改變，可能在妊高征的發(fā)病中起重要作用?！娟P(guān)鍵詞】一氧化氮合酶妊娠心血管高血壓免疫組化酶組化The relationship of expression and activity of nitric oxide synthase in placenta of pregnancy induced hypert

3、ensionZhou Rong，Cao Zeyi，Li Weimin（Second Affiliated Hospital,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041）【Abstract】ObjectiveTo determine the relationship between expression and activity of nitric oxide synthase(NOS)in placenta of pregnancy induced hypertension(PIH).Methods32 placentae

4、of normal pregnant women and 32 of PIH were studied.The expression and activity of NOS in placentae were measured by immunohistochemistry(ABC method)and enzymehistochemistry(Tetrazoleun method).ResultsThere showed eNOS antigen,iNOS antigen and NOS activity in placentae from PIH and normal pregnant w

5、omen.They were all localized in the same site and those in the vascular endothelial cells have the same expression.In the placentae from PIH and normal pregnant women,a positive correlation was seen between the expression of eNOS and the activity of NOS,but there was no correlation between the expre

6、ssion of iNOS and the activity of NOS.In addition,we found there was a positive correlation between the expression of eNOS and the activity of NOS from the moderate or severe PIH.ConclusionThe changes of the expression and the activity of eNOS may play an important role in the pathogenesis of PIH.【K

7、ey words】Nitric oxide synthasePregnancyCardiovascularHypertensionImmunohistochemistryEnzymehistochemistry研究表明，由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮(NO)及催化NO生成的一氧化氮合酶(NOS)在妊高征的發(fā)病中起重要作用1。本研究通過探討妊高征患者胎盤絨毛NOS含量與其活性間的相互關(guān)系，進(jìn)一步闡明NO在妊高征發(fā)病中的作用。1材料與方法1.1觀察對(duì)象收集我院自1996年9月至1998年2月經(jīng)剖宮產(chǎn)術(shù)分娩的胎盤共64例。其中正常足月妊娠婦女胎盤32例(正常組)，孕齡(271.48±6.09

8、)天；妊高征患者胎盤32例(妊高征組)，孕齡(270.24±5.27)天。妊高征診斷以婦產(chǎn)科學(xué)第4版2為準(zhǔn)。妊高征組中，輕、中及重度分別為6、14和12例。所有觀察對(duì)象剖宮產(chǎn)時(shí)均未臨產(chǎn)，系因臀位、骨盆因素或妊高征危及母兒安全而行手術(shù)者。待術(shù)中胎盤自娩后，立即取其母面正中組織約1cm×1cm×1cm，液氮中驟冷后，置入-70冰箱待用。取材時(shí)注意避開出血及鈣化部位。1.2方法1.2.1免疫組織化學(xué)ABC法測(cè)定胎盤中eNOS、iNOS含量方法見文獻(xiàn)3。1.2.2酶組織化學(xué)法(四唑鹽法)測(cè)定胎盤中NOS活性方法見文獻(xiàn)4。1.2.3結(jié)果判斷內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)及誘

9、導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)含量按免疫組化目測(cè)半定量法，根據(jù)著色深淺分為陰性(-)、弱陽性(+)、陽性(+)、強(qiáng)陽性(+)和極強(qiáng)陽性(+)。NOS活性按酶組化目測(cè)半定量法，其標(biāo)準(zhǔn)同上。1.3統(tǒng)計(jì)方法兩組計(jì)數(shù)資料作等級(jí)相關(guān)分析。2結(jié)果2.1免疫組化和酶組化檢測(cè)結(jié)果觀察正常組和妊高征組胎盤的血管內(nèi)皮細(xì)胞及絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿內(nèi)均有eNOS、iNOS抗原及NOS活性的陽性表達(dá)；且血管內(nèi)皮細(xì)胞中上述三者的表達(dá)強(qiáng)度在兩組胎盤基本一致，均為弱陽性；而絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞中上述三者的表達(dá)強(qiáng)度在正常組均高于妊高征組。2.2胎盤絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞eNOS、iNOS抗原含量與NOS活性的相關(guān)性(見表1)表1絨毛合體滋養(yǎng)

10、細(xì)胞eNOS、iNOS含量與NOS活性間的相關(guān)性(例)例數(shù)eNOS含量iNOS含量NOS活性+正常組320920311316238156妊高征組328175261610091373由表1可見，兩組胎盤絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞eNOS含量不同表達(dá)強(qiáng)度的例數(shù)分布與NOS活性不同表達(dá)強(qiáng)度的例數(shù)分布相似，經(jīng)等級(jí)相關(guān)分析兩者間分別呈正相關(guān)(r=0.3749，P<0.005；r=0.4580，P<0.005)；而兩組絨毛NOS活性與iNOS含量間例數(shù)分布的等級(jí)相關(guān)分析未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)性(r=0.2389，P>0.05；r=0.1811，P>0.05)。2.3不同程度妊高征患者絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞e

11、NOS含量與NOS活性的相關(guān)性輕度妊高征患者絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞eNOS含量不同表達(dá)強(qiáng)度的例數(shù)分布與NOS活性不同表達(dá)強(qiáng)度的例數(shù)分布間無相關(guān)性(P>0.05)，而中、重度患者eNOS含量與NOS活性呈正相關(guān)(分別為r=0.9867，P<0.001；r=0.9710，P<0.001)。 3討論研究發(fā)現(xiàn)，妊高征患者存在血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能紊亂，表現(xiàn)為血管內(nèi)皮舒張因子減少，收縮因子增多，致使血管處于收縮狀態(tài)1。在血管舒張因子中NO的作用備受關(guān)注。由于在內(nèi)源性NO的產(chǎn)生過程中，NOS是唯一的限速酶，因此，NOS含量及活性的改變，必然直接影響到NO的產(chǎn)生，從而影響血管的舒縮狀態(tài)。3.1胎盤絨

12、毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞中存在NOS抗原及活性的意義我們采用免疫組化ABC法和酶組化法研究發(fā)現(xiàn)，在正常妊娠婦女和妊高征患者胎盤的絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，同時(shí)存在eNOS、iNOS抗原及NOS活性的陽性表達(dá)，且絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度均強(qiáng)于血管內(nèi)皮細(xì)胞。說明胎盤中不僅存在NOS抗原，而且這些抗原具有生物活性。這有利于胎盤局部NO的產(chǎn)生，進(jìn)而有利于胎盤血流的供應(yīng)。與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似5，6。眾所周知，正常妊娠婦女固定的絨毛滋養(yǎng)葉細(xì)胞于孕10周左右開始沿著螺旋小動(dòng)脈逆行浸潤(rùn)，逐漸取代血管內(nèi)皮，這種浸潤(rùn)至孕12周時(shí)，已達(dá)蛻膜段，孕820周達(dá)子宮肌層內(nèi)1/3深度，而妊高征時(shí)滋養(yǎng)葉細(xì)胞浸潤(rùn)僅達(dá)蛻

13、膜段，少數(shù)血管可以不發(fā)生此種變化1；同時(shí)足月妊娠時(shí)滋養(yǎng)葉細(xì)胞主要為具有功能的合體滋養(yǎng)細(xì)胞，因此，我們推測(cè)足月妊娠時(shí)合體滋養(yǎng)細(xì)胞具有血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，即可以產(chǎn)生NO并發(fā)揮生理功能。Eis等7的研究也發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用eNOS抗體對(duì)滋養(yǎng)葉細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞為陰性，而合體滋養(yǎng)細(xì)胞為陽性，也證明合體滋養(yǎng)細(xì)胞具有產(chǎn)生NO的功能。Conrad等8認(rèn)為，絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞中NOS的存在，有利于防止胎盤絨毛間隙中血小板的凝聚及血栓的形成，從而保證了胎盤絨毛間隙中血流的通暢性。3.2絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞NOS的改變與妊高征的關(guān)系為了進(jìn)一步了解絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞eNOS、iNOS含量和NOS活性間的相互關(guān)系，我們還觀

14、察了各組胎盤絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞eNOS、iNOS含量與NOS活性間的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在兩組胎盤中，絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞NOS活性表達(dá)強(qiáng)度的例數(shù)分布與eNOS含量表達(dá)強(qiáng)度的例數(shù)分布均呈正相關(guān)，而與iNOS含量無相關(guān)性；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，中、重度妊高征患者絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞NOS活性與eNOS含量間也呈正相關(guān)。上述結(jié)果說明，絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞NOS活性的改變，主要反映了eNOS活性的改變，而與iNOS的關(guān)系不明顯。提示在妊高征(尤其中、重度)的發(fā)病中，絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞eNOS含量及活性的改變起了重要作用。作者單位：周容（華西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科 成都，610041）曹澤毅（華西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科

15、成都，610041）李維敏（華西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科 成都，610041）劉淑蕓（華西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科 成都，610041）熊慶（華西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科 成都，610041）肖邦良（華西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院）程薇波（華西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院）參考文獻(xiàn)1，林其德.妊高征病因?qū)W研究進(jìn)展.中華婦產(chǎn)科雜志，1997；32(1)：32，樂杰主編.婦產(chǎn)科學(xué).第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：1133，周容，李維敏，曹澤毅，等.妊高征患者胎盤中一氧化氮合酶含量的變化及意義.華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1999；30(3)：3124，周容，李維敏，曹澤毅，等.妊高征患者胎盤中一氧化氮合酶活

16、性的變化及意義.中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志，1999；2(2)：795，Garvey EP,Tuttle JV,Covington K,et al.Purification and characterization of the constitutive nitric oxide synthase from human placenta.Arch Biochem Biophy,1994;311(2):2356，Boccardo P,Soregaroli M,Aiello S,et al.Systemic and fetal-maternal nitric oxide synthesis in normal pregnancy and preclampsia.Br J Obstet Gynecol,1996;103(9):8797，Eis ALW,Brockman DE,Pollock JS,et al.Immunohistochemical localization of endothelial nitric oxide synthase in human villous and extravillous trophoblast pop