紅花黃色素對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠模型腎間質(zhì)纖維化的影響

1、紅花黃色素對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠模型腎間質(zhì)纖維化的影響    摘 要:目的:探討紅花黃色素對大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響。方法:將40只SD雄性大鼠隨機分為假手術(SO)組、單側(cè)輸尿管梗阻(UUO) 組、血管緊張素受體拮抗劑厄貝沙坦組(IRB組) 和紅花黃色素組(SY組) 。大鼠腎組織行蘇木精-伊紅和Masson染色,計算腎間質(zhì)纖維化的相對面積。免疫組化技術檢測I型膠原(Col I)和纖維連接蛋白(FN)在腎組織中的表達。結(jié)果:SY治療組和IRB治療組能有效改善UUO大鼠的腎臟間質(zhì)纖維化,SY組和IRB組中各時間點Col I和FN蛋白的表達均低于UUO組(P&l

2、t; 0.05),但高于SO組(P0.05)。結(jié)論:紅花黃色素可減輕UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化程度,延緩腎臟間質(zhì)纖維化。? 關鍵詞:紅花黃色素;腎間質(zhì)纖維化;I型膠原;纖維連接蛋白? 文獻標識碼:A文章編號: 1673-7717(2010)04-0891-03 Effect of Safflor Yellow Injection on the Renal Interstitial Fibrosis in Unilateral Ureteral Obstruction Rats SUN Shi?hua?1, YAN Fu?hua?1, JIANG Jian?jun?2,MAO Xing?mei?3

3、(1.Traditional Chinese Medical Hospital of Jiangshan, Jiangshan, 324100, Zhejiang,China; 2.Jiangshan People's Hospital,Jiangshan 324100,Zhejiang,China;3.Jiangshan Maternity and Child Care Hospital,Jiangshan 324100,Zhejiang,China)? Abstract:Objective:To investigate the antifibrotic effect of saff

4、lor yellow on renal intersititium in unilateral ureteral obstruction (UUO) rats.Methods:40 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham-operated group (SO group), unilateral ureteral obstruction model group (UUO group), irbesartan group (IRB group) and safflor yellow group (SY group). Th

5、e area of renal interstitial fibrosis was calculated by HE and Masson staining, while the expression of collagen I (Col I) and fibronectin (FN) were detected by immunohistochemistry. Results:Renal interstitial fibrosis was improved significantly in both IRB group and SY group. The expression levels

6、of Col I and FN were significantly reduced in the IRB and SY group compared with UUO group, notwithstanding the lowest in the SO group. Conclusion:Safflor yellow could ameliorate renal interstitial fibrosis which might be realized by reducing the exressio n of Col I and FN, it could delay the progre

7、ss of renal interstital fibrosis in UUO rat model.? Key words:safflor yellow; renal intersttitial fibrosis; collagen I; fibronectin 收稿日期:2009-11-27 作者簡介:孫時華(1971-),女,浙江江山人,主管藥師,研究方向:藥物的臨床研究。 紅花黃色素(Safflor Yellow)是紅花中多種水溶性有效成分的混合物,屬酮類化合物。多年來,研究發(fā)現(xiàn)其具有擴張冠狀動脈、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化等多種作用。對于肝硬化等慢性纖維化性病變也有一定療效。本研究將紅

8、花黃色素應用于單側(cè)輸尿管梗阻大鼠這一典型的慢性腎臟纖維化模型,通過檢測腎組織中膠原I(Collagen I, Col I)及纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)的表達變化,探討紅花黃色素對大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響。 1材料與方法 1.1實驗動物? 清潔級SD雄性大鼠40只(購自浙江大學醫(yī)學院動物實驗中心),體重(200±25)g。于溫度23、相對濕度(55±2)%,定時日光燈照射12h/天的房間內(nèi),保持通風、恒溫,自由飲食、飲水。 1.2藥品與試劑? 紅花黃色素注射液為浙江永寧藥業(yè)股份有限公司提供(批號0702114),厄貝沙坦為杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司提供(

9、批號0601339),I型膠原和纖維連接蛋白抗體(武漢博士德生物工程公司),生物素化羊抗兔IgG(北京中杉金橋生物技術有限公司)。 1.3動物模型建立和分組? 單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)誘導腎間質(zhì)纖維化大鼠模型:10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后,取右側(cè)臥位,背部左肋下備皮,常規(guī)消毒,選左側(cè)背部肋下5mm做切口,打開腹腔,游離左腎及左側(cè)輸尿管,將左輸尿管用組織鉗托起,取中上段,用止血鉗夾住,在兩端以1號絲線結(jié)扎后剪斷,然后逐層縫合關閉切口;假手術組在打開腹腔、游離出左輸尿管后即關閉縫合切口。隨機分為4組:模型組、假手術組、厄貝沙坦組和紅花黃色素組。每組10只,組間大鼠體重無統(tǒng)計學差異。手術前2天開

10、始給藥,假手術組、模型組均給予同等劑量的生理鹽水灌胃;厄貝沙坦組10mg #8226;kg-1 #8226;d-1、紅花黃色素注射液10mg #8226;kg-1 #8226;d-1劑量分別灌胃治療。 1.4觀察指標和方法     1.5統(tǒng)計學方法? 數(shù)據(jù)由第一作者采用SPSS 11.0(SPSS,Chicago)統(tǒng)計包進行統(tǒng)計學分析,計量資料采用±s表示,多組均數(shù)間比較采用One-Way ANOVA分析,以PBW(D(Y,1,2)MD2 WT5”FZ中華中醫(yī)藥學刊 2結(jié) 果 2.1腎功能檢測? 表1各組大鼠的腎功能情況 組別nBUNScr U

11、UO組1012.04±0.71?*57.02±2.19?* 厄貝沙坦組1011.79±0.96*55.46±2.77* 紅花黃色素組1010.57±1.14*55.29±2.53*注:與假手術組相比,*P0.05。? 造模成功后UUO組大鼠血尿素氮和肌酐水平均顯著升高,與假手術組相比,差異有顯著性(P0.05)。見表1。 2.2腎組織病理改變? 假手術組HE染色無明顯變化;UUO組與術后第7天開始出現(xiàn)明顯的腎小管細胞腫脹,腎小管局灶性萎縮,腎小管間質(zhì)變寬,其中可見纖維細胞增生和少量淋巴單核細胞浸潤;第14天時則表現(xiàn)為腎小管的嚴重破壞,

12、腎小管和集合管擴張,管腔塌陷,小管間質(zhì)顯著增寬,間質(zhì)內(nèi)大量彌漫分布的單核巨噬細胞,較多的成纖維細胞分布。IRB組和SY組病理改變與UUO組相類似,但程度明顯減輕。Masson染色提示假手術組的腎臟膠原主要位于腎小球基底膜、系膜區(qū)和小管周圍毛細血管;UUO組可見腎組織間質(zhì)膠原沉積顯著增加,在14天時病變更為顯著。IRB組和SY組與同期的UUO組相比,間質(zhì)增寬程度和膠原沉積程度降低,有顯著的統(tǒng)計學差異(P<0.05),但仍比假手術組顯著增多(P0.05)。各組大鼠腎臟間質(zhì)纖維化相對面積見表2。 表2各組大鼠的腎臟間質(zhì)纖維化相對面積(%) 組別n第7天第14天 UUO組1018.03±

13、;3.91?*27.13±2.97?* 厄貝沙坦組1013.38±1.59*17.31±1.72* 紅花黃色素組1012.48±1.36*15.45±1.51* 注:與假手術組相比,*P<0.05;與UUO組相比,P2.3免疫組化? Col I在假手術組中僅有少量表達,腎小球和腎小管中無陽性表達,而在UUO組中則大量表達于腎臟間質(zhì);FN在假手術組中僅在腎小球和腎小管基底膜少量表達,而在UUO組中,在萎縮的腎小管周圍及腎小球、腎小管基底膜等處均可見強烈的表達。上述指標在IRB組和SY組中,雖表達部位與UUO組相同,但表達程度顯著減輕(P0.

14、05)。見表3。 表3各組大鼠的腎組織免疫組化結(jié)果 組別n型膠原(Col I)第7天第14天 纖維連接蛋白(FN) 第7天第14天 UUO組1092.15±8.32?*159.37±29.5?*83.06±12.55?*155.46±11.48?* 厄貝沙坦組1057.83±11.25*78.29±15.32*43.67±5.41*75.26±7.15* 紅花黃色素組1063.19±15.76*94.37±14.33*41.57±5.72*73.92±7.22* 注:與假手術

15、組相比,*P<0.05;與UUO組相比,P3討 論? 腎臟間質(zhì)纖維化是由各種原因的腎臟疾病引起的腎臟功能進行性惡化的過程,最終導致腎功能衰竭,其主要的病理基礎是細胞外基質(zhì)堆積和在間質(zhì)的積聚。目前認為其發(fā)生發(fā)展的機理在于:各種炎癥因子的釋放和炎細胞的浸潤,激活成纖維細胞和各種纖維化相關的生長因子如TGF、PDGF等的活化,促進腎小管上皮細胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化,向著成纖維細胞的方向發(fā)展;另外,調(diào)控細胞外基質(zhì)合成/降解的一系列酶系統(tǒng)在多種細胞因子/生長因子的作用下發(fā)生功能紊亂,是的基質(zhì)合成增多,降解減少,從而促進腎臟纖維化的進程。臨床上常用的血管緊張素II受體拮抗劑如厄貝沙坦等可以減輕上述過程的進展,

16、在一定程度上延緩腎纖維化的進程。尋找更多的抗纖維化藥物是目前腎臟病學的主要任務之一1-2。? 紅花黃色素是從紅花中提取的有效成分,屬于水溶性黃酮中的查爾酮類分子,研究發(fā)現(xiàn)其具有擴血管、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化、保護中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多重藥理學效應,在心血管疾病中已開始系列臨床觀察3-4。? 單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)是研究腎小管間質(zhì)纖維化的成熟的動物模型。在本實驗中,觀察到大鼠腎臟體積增大、皮質(zhì)變薄,腎間質(zhì)炎癥細胞浸潤、腎小管擴張、壞死,腎間質(zhì)面積增寬,膠原堆積,間質(zhì)纖維化等系列病理改變,符合慢性進展性腎纖維化的特點,提示該模型的建立是成功的。? 本研究采用經(jīng)典的UUO模型,予以紅花黃色素進行干預

17、治療,并采用血管緊張素II受體拮抗劑厄貝沙坦作為對照,進一步觀察紅花黃色素對大鼠腎纖維化的治療作用。UUO組腎臟病理見腎小管破壞明顯,間質(zhì)單核巨噬細胞浸潤、成纖維細胞增生,Masson染色見間質(zhì)膠原堆積增多,間質(zhì)纖維化成灶性分布;厄貝沙坦組和紅花黃色素組的病理改變雖然與UUO組類似,但程度明顯減輕。?        如前所述,細胞外基質(zhì)的堆積與纖維連接蛋白(FN)密切相關,FN是一種細胞外基質(zhì)糖蛋白,可與多種基質(zhì)成分結(jié)合,促進細胞外膠原I(Col I)-IV和蛋白多糖成分的沉積,FN在腎臟纖維化病變中表達較早,同時

18、FN還是成纖維細胞的趨化劑5。因此,降低FN合成和表達對于防治腎小管間質(zhì)纖維化是至關重要的。多項研究顯示,在外源性轉(zhuǎn)化生長因子的刺激下,腎臟近曲小管可產(chǎn)生FN和Col I等基質(zhì)成分6。本研究顯示,UUO組大鼠在第7天、第14天腎組織中FN和Col I表達均較假手術組顯著增強,而予以厄貝沙坦、紅花黃色素治療的,上述指標有不同程度的下降,以上說明,紅花黃色素可改善大鼠腎組織病變,減少腎臟間質(zhì)纖維化發(fā)生的面積。? 綜上,紅花黃色素可明顯減輕大鼠UUO術后的腎臟病變,降低腎組織FN和Col I的表達,抑制細胞外基質(zhì)在腎間質(zhì)的堆積,延緩腎小管損傷及腎纖維化的進展。本研究為臨床開發(fā)新的有效的抗腎臟纖維化治

19、療藥物提供了一定的理論依據(jù)。 參考文獻 1 Grande MT, López-Novoa JM. Fibroblast activation and myofibroblast generation in obstructive nephropathy J. Nat Rev Nephrol,2009,5(6): 319-328. 2 Vilayur E, Harris DC. Emerging therapies for chronic kidney disease: what is their roleJ. Nat Rev Nephrol,2009,5(7): 375-383. 3 Yang Z, Yang J, Jia Y, et al, Pharmacokinetic pro