肝硬化大鼠原位肝移植血流動(dòng)力學(xué)改變

1、肝硬化大鼠原位肝移植血流動(dòng)力學(xué)改變         11-01-07 09:46:00     編輯：studa20                         作者：?jiǎn)虃?，王楠，魯建?guó)，王青【摘要】  目的 研究肝硬化大鼠異

2、體原位肝移植術(shù)后血流動(dòng)力學(xué)改變。方法 雄性健康SD大鼠50只，采用腹腔及皮下注射四氯化碳(CCl4)，同時(shí)飲用乙醇溶液誘導(dǎo)10周，制備肝硬化大鼠模型；按KAMADA二袖套法(門靜脈和肝下下腔靜脈)對(duì)肝硬化大鼠原位肝移植；觀察肝移植前后門靜脈血流動(dòng)力學(xué)的變化。結(jié)果 制備肝硬化大鼠模型36只；進(jìn)行肝移植手術(shù)26次，術(shù)后成活并進(jìn)行門靜脈血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)12只。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢驗(yàn)，肝移植術(shù)后門靜脈壓較術(shù)前明顯降低(1.60±0.10)kPa vs. (1.70±0.25)kPa，P<0.05；門靜脈血流量明顯增加(7.55±1.02)mL/min vs. (6.15

3、±0.88)mL/min，P<0.05；門靜脈阻力明顯降低(11.84×10-2±2.51×10-2)kPa/(mL·min) vs. (16.29×10-2±2.40×10-2)kPa/(mL·min)，P<0.05。結(jié)論 異體肝移植術(shù)可改善肝硬化大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】  大鼠；肝硬化；肝移植；血流動(dòng)力學(xué)ABSTRACT: Objective  To investigate the hemodynamic changes in cirrhosis rats af

4、ter orthotopic liver transplantation. Methods  The cirrhosis model was constructed in 50 healthy male SD rats by intraperitoneal and subcutaneous injection with carbon tetrachloride (CCl4), and induced by drinking alcohol solution for 10 weeks. Orthotopic liver transplantation with twocuff tech

5、nique was adopted to these rats. The hemodynamic changes were observed. Results  Cirrhosis model was constructed in 36 rats, 26 of which then received liver transplantation. Finally 12 cirrhosis rats survived, and hemodynamics of portal vein were observed. The statistical analysis revealed that

6、 the portal venous pressure decreased significantly after the operation compared with pretransplant (1.60±0.10)kPa vs. (1.70±0.25)kPa, P<0.05; the portal vascular resistance increased significantly (7.55±1.02)mL/min vs. (6.15±0.88)mL/min, P<0.05; however, the portal venous

7、flow decreased obviously (11.84×10-2±2.51×10-2)kPa/(mL·min) vs. (16.29×10-2±2.40×10-2)kPa/(mL·min), P<0.05. Conclusion  The hemodynamics of cirrhosis rats ameliorate after orthotopic liver transplantation.KEY WORDS: rat; liver cirrhosis; liver transpla

8、ntation; hemodynamics肝硬化門脈高壓癥是一種常見(jiàn)病、多發(fā)病，傳統(tǒng)外科手術(shù)治療主要有分流術(shù)和斷流術(shù)兩類，其目的是預(yù)防食管胃底靜脈曲張破裂引起的出血，并非病因治療；只有肝移植才有可能根本治愈。研究肝硬化大鼠異體肝植入后門靜脈系統(tǒng)血流動(dòng)力學(xué)改變，可以明確移植前后門靜脈系統(tǒng)血流動(dòng)力學(xué)特征，以及術(shù)前、術(shù)后血流動(dòng)力學(xué)改變與肝臟移植預(yù)后的關(guān)系，指導(dǎo)臨床肝臟移植。1  材料與方法1.1  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組肝移植組：健康雄性SD大鼠50只，清潔級(jí)，體重(240±20)g，購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；以CCl4復(fù)合法制備肝硬化大鼠模型，共10周，為受體。供體組：雄

9、性SD大鼠30只，清潔級(jí)，體重(240±20)g，晚7周購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，正常喂養(yǎng)3周，為供體。1.2  試劑和儀器 將995mL/L CCl4與大豆油配成400、600mL/L的CCl4油溶液；950mL/L醫(yī)用酒精與飲用水配成100mL/L的酒精溶液。    壓力換能器；四道生理記錄儀(NIHON KOHDEN, Japan)；MFV3200型電磁血液流量計(jì)(NIHON KOHDEN, Japan)。1.3  肝硬化大鼠模型的構(gòu)建 肝移植組大鼠前2周腹腔注射400mL/L CCl4油溶液，首次劑量按

10、0.5mL/100g體重，以后按0.3mL/100g，每周2次，共4次；2周后改為600mL/L CCl4油溶液腹部皮下注射，按0.3mL/100g，每周2次，共16次；同時(shí)給以100mL/L酒精溶液喂養(yǎng)，自由攝取普通顆粒飼料。成模時(shí)間預(yù)計(jì)為10周。供體組大鼠正常喂養(yǎng)3周。1.4  肝硬化大鼠肝移植操作 供體操作：麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)，胸腹部剔毛，碘伏消毒，腹部大十字切口進(jìn)腹。離斷鐮狀韌帶，緊貼肝上下腔靜脈以80     11-01-07 09:46:00     編輯：studa201.5

11、60; 檢測(cè)指標(biāo)及方法 在肝移植前后分別檢測(cè)肝移植組大鼠和供體組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。以電磁血流量計(jì)測(cè)量門靜脈血流量(portal venous flow, PVF)。分別穿刺回結(jié)腸靜脈、下腔靜脈和腹主動(dòng)脈,插入測(cè)壓導(dǎo)管(導(dǎo)管內(nèi)注入肝素生理鹽水抗凝)，通過(guò)壓力換能器與四道生理記錄儀連接,分別測(cè)定門靜脈壓(portal venous pressure, PVP)、下腔靜脈壓(inferior vena cava pressure, IVCP)和平均動(dòng)脈壓(mean arterial pressure, MAP)。門靜脈阻力(portal vascular resistance, PVR)

12、和內(nèi)臟血管阻力(splanchnic vascular resistance, SVR)按下列公式1計(jì)算：PVR=(PVP-IVCP)/PVFkPa/(mL·min)SVR=(MAP-PVP)/PVFkPa/(mL·min)1.6  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包。統(tǒng)計(jì)結(jié)果以中位數(shù)±四分位間距(M±QR)表示。采用KruskalWallis秩和檢驗(yàn)，多重比較采用Nemenyi檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2  結(jié)果2.1  一般情況 肝移植組50只大鼠在注射CCl4后造模成功

13、36只，供體組30只大鼠全部存活。剔除體重懸殊過(guò)大，按體重大小配對(duì)(供體重量略小于受體)，進(jìn)行肝移植手術(shù)26次，術(shù)后存活并成功進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)12只。在肝移植手術(shù)中，供體手術(shù)一般需要3035min，袖套制備約需1215min，受體手術(shù)一般需要2535min，無(wú)肝期一般應(yīng)小于20min，熟練者可縮短至1015min。2.2  門靜脈系統(tǒng)血流動(dòng)力學(xué)改變 肝移植組肝移植手術(shù)前和供體組相比，MAP、PVP、PVF及PVR指標(biāo)有明顯差異(P<0.05)；在實(shí)施原位肝移植后，PVP較術(shù)前明顯降低，PVF明顯增加，PVR明顯降低，而IVCP及SVR指標(biāo)差異不明顯(表1)。表1&#

14、160; 供體與肝移植前、后大鼠血流動(dòng)力學(xué)改變（略）3  討 論3.1  肝硬化大鼠肝移植模型的建立1973年，LEE首次報(bào)道了大鼠原位肝移植模型，采用的操作方法與人體肝移植的手術(shù)步驟大致相同，手術(shù)時(shí)間長(zhǎng)，術(shù)中及術(shù)后死亡率均較高。1979年，KAMADA1將“袖套法”血管吻合技術(shù)首次應(yīng)用于大鼠原位肝移植，使無(wú)肝期控制于26min內(nèi)，而縮短無(wú)肝期對(duì)提高術(shù)后大鼠存活率有著至關(guān)重要的意義。    肝移植手術(shù)中由于大鼠肝臟分葉較多，且移動(dòng)范圍較大，分離過(guò)程中易發(fā)生扭轉(zhuǎn)，導(dǎo)致個(gè)別肝葉血流充盈受阻，門靜脈灌洗時(shí)則可能出現(xiàn)肝臟灌洗不均勻成“盲區(qū)”，術(shù)中應(yīng)及時(shí)

15、將其復(fù)位；在阻斷門靜脈后肝硬化大鼠(切除原肝前)，穿刺門靜脈左右分支，注入生理鹽水把肝內(nèi)血液沖入體內(nèi)，起到“自體輸血”的效果；在完成肝上下靜脈吻合后，首先應(yīng)檢查各肝葉是否處于原位，若有移位甚至或扭轉(zhuǎn)，應(yīng)及時(shí)復(fù)位使再灌注后門靜脈血流迅速、均勻地分布于肝臟各葉。    大鼠原位肝移植過(guò)程中，受體要經(jīng)歷無(wú)肝期，縮短無(wú)肝期對(duì)提高術(shù)后大鼠存活率有著重要的意義。研究認(rèn)為無(wú)肝期最長(zhǎng)不能超過(guò)26min，否則術(shù)后受體難以存活13。本實(shí)驗(yàn)中無(wú)肝期最短達(dá)到21min。但手術(shù)成功率較低，分析受體死亡原因，大多為肝上下腔靜脈吻合口漏、感染血栓形成或門靜脈袖套扭曲造成門靜脈系統(tǒng)淤血致死。與國(guó)

16、內(nèi)外報(bào)道的手術(shù)成功率和生存時(shí)間尚有差距46。我們考慮肝硬化大鼠肝功能及抵抗力低下，是手術(shù)成功率低的主要原因。3.2  肝移植后大鼠門靜脈血流動(dòng)力學(xué)變化 肝硬化門脈高壓癥的始動(dòng)因素是肝血管阻力增加，在疾病發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用，肝硬化時(shí)肝血管阻力增加的部位主要位于肝竇。在肝硬化發(fā)展過(guò)程中，隨著纖維血管膜形成，通向肝實(shí)質(zhì)的肝動(dòng)脈和門靜脈的小支逐漸受壓迫、扭曲和閉塞，正常的血流途徑遭受破壞。肝移植術(shù)從根本上解決了肝硬化形成的始動(dòng)因素，是目前能從病因上治療肝硬化的唯一手段。    從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，肝移植術(shù)后PVP、PVR較術(shù)前有明顯降低，PVF、M

17、AP較術(shù)前明顯增加。而在肝移植術(shù)手術(shù)前后，IVCP及SVR差異不明顯。    在本實(shí)驗(yàn)中，我們通過(guò)對(duì)肝硬化大鼠進(jìn)行原位肝移植，檢測(cè)手術(shù)前后血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，結(jié)果表明：肝移植術(shù)在短期內(nèi)能夠很好的降低門靜脈壓力和門靜脈阻力，增加門靜脈系統(tǒng)血流流量；但在肝移植前后，大鼠腹主動(dòng)脈壓如何提高不好解釋，是麻醉原因、檢驗(yàn)誤差，有待進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1KAMADA N, CALNE RY. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anast

18、omosis and biliary drainage J. Transplantation, 1979, 28(1):4750.2SIMEONORA PP, GALLUCCI RM, HULDERMAN T, et al. The role of tumor necrosis factor alpha in liver toxicity, inflammation and fibrosis induced by carbon tetrachloride J. Toxicol Appl Pharmacol, 2001, 177(2):112120.3李向農(nóng)，黃萃庭，王新慧，等. 實(shí)驗(yàn)性肝硬變大鼠血液中遞質(zhì)的變化及其對(duì)血液動(dòng)力學(xué)的影響