脂肪來源的干細胞移植對大鼠腦缺血后微血管生成及bFGF和VEGF表達的影響x

1、脂肪來源的干細胞移植對大鼠腦缺血后微血管生成及bFGF和VEGF表達的影響x         11-01-30 11:32:00     編輯：studa20                 作者：王杰華, 劉楠, 杜厚偉, 翁金森, 陳榮華, 肖迎春, 張逸仙【摘要】  目的: 探討脂肪來源的干細胞（ADS

2、C）移植對大鼠腦缺血后微血管生成的可能機制。方法: 72只清潔級成年雄性SpragueDarley大鼠, 隨機分為假手術組(Sham組)、 局灶性腦缺血組（MCAO組）、 溶劑對照組（vehicle組）和ADSC治療組（ADSC組）, 每組18 只, 采用改良ZeaLonga線栓法制作大腦中動脈栓塞（MCAO）模型, ADSC移植前用DAPI標記, ADSC 組于造模成功1 d后經(jīng)側腦室注射入30 L的經(jīng)DAPI標記的ADSC細胞懸液, 內(nèi)含1×106細胞, vehicle組則注射同等劑量的PBS, 術后4 d、 7 d和14 d分批處死實驗動物, 并斷頭取腦, 采用免疫組織化學法和

3、半定量RTPCR法檢測缺血區(qū)腦組織的新生血管及bFGF和VEGF表達的動態(tài)變化。結果: 大鼠腦缺血后缺血區(qū)即可見大量的微血管生成, 2周達高峰。ADSC組較MCAO組和vehicle組缺血區(qū)微血管密度明顯增高（P<0.01）; ADSC組術后4 d、 7 d和14 d腦組織中bFGF和VEGF的表達水平較MCAO組和vehicle組明顯增高。結論: ADSC移植促進腦缺血大鼠缺血區(qū)微血管的生成, 其機制可能與促進bFGF和VEGF的表達有關 【關鍵詞】  脂肪來源的干細胞; 腦梗塞; 血管生成; bFGF; VEGF    Abstract

4、0; AIM: To investigate the effects of adiposederived stem cell (ADSC) transplantation on the angiogenesis in the brain post focal cerebral ischemia in rats. METHODS: 72 male adult SpragueDawley rats were randomly divided into 4 groups: shamoperated group, middle cerebral artery occlusion (MCAO) grou

5、p, vehicle group and MCAO+ADSCtreated group (n=18). A permenant focal cerebral ischemia model was established with the modified Longa's method. ADSC were labeled by DAPI before transplantation. One day after right MCAO, 30 L of cell suspension containing 1×106 cells were injected into the l

6、ateral ventricle of MCAO+ADSCtreated group and the same dose of PBS was given to the vehicle group. On D4, D7 and D14 after MCAO,  the rats were killed to detect the regeneration of microvessel and the expression of bFGF and VEGF in ischemic region by immunohistochemistry and RTPCR. RESULTS: A

7、lot of microvessel proliferate in the injured cortex  reached peak in 2 weeks. The microvessel density in the brain tissues of rats treated with ADSC was higher than that in MCAO group and vehicle group (P<0.01). The expression of bFGF and VEGF in the brain tissues of MCAO+ADSCtreated group

8、was higher than that in MCAO group and vehicle group on D4, D7 and D14 post MCAO. CONCLUSION: The transplantation of ADSC  can promote the revascularization of cerebral ischemia in rats partly by enhancing bFGF and VEGF synthesis in brain.    Keywordsadiposederived stem cell; cer

9、ebral ischemia; angiogenesis; bFGF; VEGF    摘 要  目的:  探討脂肪來源的干細胞（ADSC）移植對大鼠腦缺血后微血管生成的可能機制。方法: 72只清潔級成年雄性SpragueDarley大鼠, 隨機分為假手術組(Sham組)、 局灶性腦缺血組（MCAO組）、 溶劑對照組（vehicle組）和ADSC治療組（ADSC組）, 每組18 只, 采用改良ZeaLonga線栓法制作大腦中動脈栓塞（MCAO）模型, ADSC移植前用DAPI標記, ADSC 組于造模成功1 d后經(jīng)側腦室注射入30 L的經(jīng)DAP

10、I標記的ADSC細胞懸液, 內(nèi)含1×106細胞, vehicle組則注射同等劑量的PBS, 術后4 d、 7 d和14 d分批處死實驗動物, 并斷頭取腦, 采用免疫組織化學法和半定量RTPCR法檢測缺血區(qū)腦組織的新生血管及bFGF和VEGF表達的動態(tài)變化。結果: 大鼠腦缺血后缺血區(qū)即可見大量的微血管生成, 2周達高峰。ADSC組較MCAO組和vehicle組缺血區(qū)微血管密度明顯增高（P<0.01）; ADSC組術后4 d、 7 d和14 d腦組織中bFGF和VEGF的表達水平較MCAO組和vehicle組明顯增高。結論: ADSC移植促進腦缺血大鼠缺血區(qū)微血管的生成, 其機制可

11、能與促進bFGF和VEGF的表達有關。    關鍵詞脂肪來源的干細胞; 腦梗塞; 血管生成; bFGF; VEGF    有研究證實, 脂肪來源的干細胞（adiposederived stem cell, ADSC）在體外可以向多種細胞系分化, 包括成骨細胞、 脂肪細胞、 肌細胞、 神經(jīng)細胞及內(nèi)皮細胞1, 2。將ADSC注射入腦缺血大鼠側腦室, 發(fā)現(xiàn)可減輕神經(jīng)功能的缺損3, 但具體作用機制有待進一步闡明。本研究中, 我們采用大鼠大腦中動脈栓塞（middle cerebral artery occlusion,  MCAO）腦

12、缺血模型進行ADSC移植, 觀察不同時間點微血管密度（microvessel density,  MVD）并測定腦組織中堿性成纖維生長因子（basic fibroblast growth factor,  bFGF）和血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor,  VEGF）的表達, 以討探ADSC移植的腦保護機制, 為ADSC治療腦血管疾病提供理論依據(jù)。    1  材料和方法    1.1  材料  健康雄性SD大鼠72只, 質

13、量250280 g, 用于腦缺血模型制作; 雄性SD大鼠10只, 質量80100  g, 用于細胞的分離培養(yǎng)實驗, 購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司（許可證號: SCXK滬20070003）。DMEM培養(yǎng)基、 2.5 g/L胰酶為Gibco公司產(chǎn)品, 胎牛血清( fetal bovine serum,  FBS)購自?？寺」? FITC標記的小鼠抗大鼠CD45、 小鼠抗大鼠CD90、 小鼠抗大鼠CD44抗體為AbD公司產(chǎn)品, FITC標記的小鼠抗大鼠CD34抗體為Santa Cruz公司產(chǎn)品, DAPI 為Sigma公司產(chǎn)品, CO2培養(yǎng)箱為Thermo公司產(chǎn)品, 倒置相差顯微鏡為Olympus公司產(chǎn)品, 兔抗大鼠bFGF、 兔抗大鼠VEGF抗體購自Santa C