同步導(dǎo)數(shù)熒光光譜法測(cè)定尿樣中的痕量氧氟沙星

1、第21卷,第3期光譜學(xué)與光譜分析2001年6月SpectroscopyandSpectralAnalysisVol121,No13,pp3562358June,2001同步2導(dǎo)數(shù)熒光光譜法測(cè)定尿樣中的痕量氧氟沙星3弓巧娟1,2杜黎明1晉衛(wèi)軍13123董川1劉長(zhǎng)松1山西大學(xué)化學(xué)系,030006太原運(yùn)城高等?？茖W(xué)校,044000運(yùn)城摘要尿樣中內(nèi)源激素等物質(zhì)發(fā)射強(qiáng)的熒光,嚴(yán)重干擾氧氟沙星的測(cè)定。,很好地分辨了尿樣背景和氧氟沙星的熒光信號(hào)。譜法。測(cè)定樣品的線性范圍為:0136316gmL-1,檢測(cè)限0130gmL-1,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于215%。主題詞氧氟沙星,同步2導(dǎo)數(shù)熒光光譜法,均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水

2、為二次蒸餾水。112實(shí)驗(yàn)方法于5mL容量瓶中加入一定量的OFLX標(biāo)準(zhǔn)溶液,用不同pH的緩沖溶液定容至刻度,搖勻,用石英熒光池,于熒光光度計(jì)上,分別進(jìn)行激發(fā)和發(fā)射光譜掃描。前言氧氟沙星(屬第三代喹諾酮類藥物,為DNA螺旋酶抑制劑,同時(shí)還有破壞細(xì)胞膜導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)溶物外溢的作用。由于其獨(dú)特的作用機(jī)理,使之具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、生物利用度好、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)1,因而廣泛應(yīng)用于臨床。研究表明,該藥通過(guò)腎臟排泄,大部分以原形由尿液中排出。因此測(cè)定尿液中的OFLX含量在臨床和藥代動(dòng)力學(xué)研究方面是十分必要的。OFLX含量測(cè)定的方法多有文獻(xiàn)報(bào)道24,其中對(duì)尿液中的OFLX含量的測(cè)定方法研究較多的有分光光度法5

3、,10、HPLC法6,7和熒光分光光度法8等。這些方法仍然存在著不同程度的弱點(diǎn),如背景干擾較大、檢測(cè)限不夠低、分析成本較高等。而同步2導(dǎo)數(shù)熒光技術(shù)具有好的選擇性,從而能有效地消除背景干擾,降低檢測(cè)限。本文研究發(fā)現(xiàn)尿樣中內(nèi)源激素的熒光與OFLX的熒光光譜重疊較為嚴(yán)重。但經(jīng)同步2導(dǎo)數(shù)處理后,完全排除了尿樣背景干擾,據(jù)此建立了人體尿液中痕量OFLX測(cè)定的同步2導(dǎo)數(shù)熒光光譜法。該方法操作簡(jiǎn)單,選擇性好,靈敏度高。2結(jié)果與討論211pH對(duì)激發(fā)和發(fā)射光譜以及發(fā)光強(qiáng)度的影響由圖1可見(jiàn),在pH為3的酸性介質(zhì)中,其最大激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為300和501nm。激發(fā)光譜中還有兩個(gè)肩峰,分別位于245和348nm。1

4、實(shí)驗(yàn)部分111儀器與試劑Fig11ExcitationandemissionspectrapH=3,OFLX=5×10-5molL-1日立F24500熒光光度計(jì),激發(fā)/發(fā)射通帶215nm。pHs22型酸度計(jì)。氧氟沙星(OFLX)(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供),于105干燥至恒重,用二次蒸餾水加適量011molL-1NaOH溶液,配成5×10-3molL-1儲(chǔ)備液,使用時(shí)逐級(jí)稀釋至所需濃度。不同pH的緩沖溶液分別用KCl2HCl、NaAc2HAc、NH4Ac2NaOH、Na2B4O72NaOH配制。所用試劑OFLX分子中含有羰基、胺基和羧基,它們?cè)诓煌釅A溶液中的質(zhì)子化和去質(zhì)

5、子化作用將直接影響著發(fā)光體系的電子云分布,繼而影響體系的熒光性質(zhì)。采用KCl2HCl、NaAc2HAc、NH4Ac2NaOH和Na2B4O72NaOH分別控制溶液1999207221收,2000201211接受;3國(guó)家自然科學(xué)基金(No129875016)和山西省自然科學(xué)基金資助課題33通信聯(lián)系人弓巧娟,女,1962年生,碩士,現(xiàn)為運(yùn)城高等?？茖W(xué)校副教授第3期光譜學(xué)與光譜分析的pH值進(jìn)行熒光激發(fā)和發(fā)射掃描,由圖2可見(jiàn),OFLX熒光強(qiáng)度受pH的影響非常顯著。隨著pH值的增大,OFLX的熒光強(qiáng)度逐漸增加,pH值達(dá)到3左右時(shí)熒光發(fā)射最強(qiáng)。繼續(xù)增加溶液的堿性,熒光強(qiáng)度呈減小趨勢(shì)。不僅如此,其激發(fā)和發(fā)射

6、波長(zhǎng)也隨pH變化,在pH15發(fā)射波長(zhǎng)藍(lán)移8nm,pH57,藍(lán)移33nm,pH711發(fā)射波長(zhǎng)變化不大。激發(fā)波長(zhǎng)在pH15、pH711基本無(wú)變化,pH57,藍(lán)移17nm。故實(shí)驗(yàn)選擇最佳pH311。圖2中熒光強(qiáng)度為相應(yīng)pH條件下的最大發(fā)射。212同步2導(dǎo)數(shù)熒光光譜357取一定量的OFLX與空白尿樣的混合物,按實(shí)驗(yàn)方法分別對(duì)其進(jìn)行熒光發(fā)射光譜、同步熒光光譜和一階導(dǎo)數(shù)同步熒光光譜掃描。其結(jié)果見(jiàn)圖3圖5。Fig1Firsta1,bOFLX與尿樣的混合物X=2×10-5molL-1,pH=311Fig12Theeffect=2-5L-1由圖3可知,OFLX與空白尿樣的發(fā)射波長(zhǎng)分別為500和415n

7、m。尿液中的本底熒光物質(zhì)(內(nèi)源激素等)與OFLX熒光發(fā)射光譜互相重疊,嚴(yán)重干擾熒光測(cè)定。同步熒光光譜(圖4)雖較熒光光譜有較好的分辨率,但即使所測(cè)熒光物質(zhì)含量較高,尿樣的本底熒光干擾仍不能完全排除。而一階導(dǎo)數(shù)2同步熒光光譜對(duì)OFLX和內(nèi)源激素有良好的分辨率,結(jié)果見(jiàn)圖5。由圖可知OFLX的波峰和波谷分別位于300、336和381nm。在381nm峰谷處,尿樣背景的干擾已基本消除。實(shí)驗(yàn)時(shí)選擇381nm(波谷)采用峰零法進(jìn)行OFLX定量測(cè)定。的選擇213值的選擇在同步熒光光譜法中占重要地位,其合適與否直接影響到方法的靈敏度與選擇性9,分別實(shí)驗(yàn)了值為30,40,50,60,70,80,90,100,1

8、10,120,130=80nm時(shí)混合組分的同步2導(dǎo)數(shù)熒光光譜,結(jié)果表明,nm時(shí),OFLX與尿液中的本底熒光物質(zhì)的分辨率最好,熒光信號(hào)最大。214工作曲線與檢測(cè)限于若干5mL容量瓶中分別加入稀釋一定倍數(shù)的尿液和=80nm,在激發(fā)波長(zhǎng)為200一定量的OFLX,選擇450nm范圍內(nèi)分別對(duì)以上系列OFLX與尿樣混合液進(jìn)行同步2導(dǎo)數(shù)熒光光譜掃描,選擇381nm波長(zhǎng),用峰零法測(cè)定同步一階導(dǎo)數(shù)值。結(jié)果表明,OFLX的濃度在0136316gmL-1范圍內(nèi)與一階導(dǎo)數(shù)值具有良好的線性關(guān)系,其線性回歸方程為:dF/d=-3105×106cOFLX-01807(c:molL-1),r=01999。根據(jù)信噪比

9、S/N=3確定被測(cè)物質(zhì)的檢出限為0130gmL-1。215樣品測(cè)定將口服奧復(fù)星(OFLX片)健康受試者尿液準(zhǔn)確稀釋一定倍數(shù),精確量取015mL,置于5mL容量瓶中,用pH=311的緩沖液稀至刻度,按上述工作曲線操作步驟進(jìn)行同步Fig13Fluorescenceemissionspectraa1尿樣背景,b1OFLXOFLX=2×10-5molL-1,pH=311Fig14Synchronousfluorescencespectraa1尿樣,b1OFLX與尿樣的混合物OFLX=6×10-6molL-1,pH=311358光譜學(xué)與光譜分析第21卷2導(dǎo)數(shù)熒光光譜掃描,將采用峰零法

10、測(cè)定的結(jié)果代入線性回行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。歸方程,計(jì)算尿樣中OFLX的含量,同樣對(duì)其加樣回收率進(jìn)Tab11Analyticalresutlsofsamples(n=5)樣品尿樣1#g測(cè)得量/(mL-1)1127,1131,1133,1128,1130gggg平均值/(mL-1)標(biāo)準(zhǔn)加入量/(mL-1)測(cè)定總量/(mL-1)平均值/(mL-1)回收率(%)RSD(%)113011082136,2142,2146,2139,2140214110311811521411083145,3133,31353137,3145313910111711211082132,2136322141,21117尿樣2#

11、2136,2124,2126,2128,21362136尿樣3#1122,1124,11231125,1124112411尿樣1#,2#,3#分別為健康受試者按臨床劑量口服奧復(fù)星(OFLX片)2h、4h和6h。21表1測(cè)得量分別為尿樣1#,2#,3#中OFLX含量的測(cè)得值,RSD%14%;1#,2#,3#中各加入1108gmL-1OFLX后的測(cè)得值,RSD分別為115%,117%,117%。%。:4h尿藥濃度最高?？嘉墨I(xiàn)1Xiuzhi).JournalofChinaPharmaceuticalUniversity(中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)),1996,27(8):482MRLockley,RJ.Ant

12、imicrob.Chemother.,1984,14:6473LHartmuetal.Antimicrob.AgentsChemother.,1987,31(9):13384HKeiji,AcyamaHiroshi,HosaakaMasakietal.Antimicrob.AgentsChemother.,1986,28(6):595FenglinZHAOetal(趙鳳林等).ChineseJ.ofAnalyticalChemistry(分析化學(xué)),1998,26(7):8406GCarlucci,SGuadagniandGPalumbo.J.Liq.Chromatogr.,1986,9(11

13、):25397TOhkubl,MKudoandKSugawara.J.Chromatogr,1992,573:2898WeihongWANGetal(王唯紅等).ChineseJournalofPharmaceuticalAnalysis(藥物分析雜志),1996,16(1):309YongZHANGetal(張勇等).ChineseJ.ofAnalyticalChemistry(分析化學(xué)),1994,22(5):44510YuhongTANGetal(唐玉紅等).SpectroscopyandSpectralAnalysis(光譜學(xué)與光譜分析),1996,16(6):120Determina

14、tionofOfloxacininUrinebySynchronous2DerivativeFluorimetryQiaojuanGONG1,2,LimingDU1,WeijunJIN1,ChuanDONG1andChangsongLIU112DepartmentofChemistry,ShanxiUniversity,030006TaiyuanYunchengAdvancedTrainingCollege,044000YunchengAbstractTheinternalhormonesinhumanurineemitstrongfluorescenceandinterferewiththedeterminationoftraceofloxacin.How2ever,theexperimentsindicatethatsynchronous2firstorderderivativefluorimetrycanbeappliedtothedeterminationoftraceofloxacinwi