兩親性茯苓多糖納米微球的制備及藥物負(fù)載性能研究

1、兩親性茯苓多糖納米微球的制備及藥物負(fù)載性能研究         09-08-30 10:49:00     作者：史黎黎, 章雙, 胡    編輯：studa20【摘要】  目的研究適用于水體系的羥基喜樹堿的負(fù)載載體。方法通過化學(xué)改性得到十二烷-羧甲基-茯苓多糖，并以此為載體材料，羥基喜樹堿為模型藥物，采用透析法制備載藥兩親性茯苓多糖納米微球；對(duì)納米微球的粒徑、載藥量和包封率進(jìn)行研究，考察其體外釋藥特性。結(jié)果改性后的兩親性茯苓

2、多糖在水溶液中能夠自組裝成50100 nm左右的納米微球，在透射電鏡下能看見明顯的核/殼結(jié)構(gòu)。自制的兩新性茯苓多糖納米微球?qū)αu喜樹堿有一定的負(fù)載能力，載藥量和包封率分別為2.94%和29.4%，并且具有良好的緩釋性能，為茯苓多糖的開發(fā)與利用提供了可行性依據(jù)。結(jié)論十二烷-羧甲基-茯苓多糖納米微球是一個(gè)良好的羥基喜樹堿的水分散體系。 【關(guān)鍵詞】  茯苓多糖 納米微球 取代度 藥物負(fù)載體系羥基喜樹堿（HCPT），別名羥基樹堿、10-羥基喜樹堿，是喜樹堿類的衍生物，廣泛應(yīng)用于肝癌、胃癌、白血病等多種惡性腫瘤的治療。但其特殊的理化性質(zhì):水不溶脂難溶、內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定等因素,使得目前臨床應(yīng)用HC

3、PT的療效并不樂觀1，開發(fā)一種能負(fù)載HCPT的高性能藥物載體對(duì)于抗腫瘤藥物輸送體系的研究和實(shí)際應(yīng)用均具有重要意義。茯苓多糖來源于多孔菌科植物茯苓的干燥菌核，其結(jié)構(gòu)為帶有少量(16)支鏈的 - (13)-D-葡聚糖，多糖多羥基的結(jié)構(gòu)可以進(jìn)行多種化學(xué)修飾或者高分子聚合，經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾后的茯苓多糖具有較好的水溶性和抗腫瘤活性，若將其作為抗癌藥物載體制備成納米微球，不僅可以負(fù)載難溶性抗腫瘤藥物，還可能與藥物發(fā)生協(xié)同效應(yīng)，具有很大的研究價(jià)值以及大規(guī)模應(yīng)用和開發(fā)前景。本實(shí)驗(yàn)通過化學(xué)改性，制備了兩親性的烷基-羧甲基-茯苓多糖藥物載體，并以羥基喜樹堿為模型藥物，采用透析法2制備了載藥鈉米微球，考察了載藥量和包封率

4、和體外釋放，為茯苓多糖的進(jìn)一步開發(fā)利用及新型惡性腫瘤靶向給藥體系的研制提供基礎(chǔ)研究依據(jù)。1  儀器與藥品紫外分光光度計(jì)(Lambda35 UV/VIS Spectrometer)；元素分析儀(Elementar Vario EL)；透射電鏡(JEM-100CX11)；超聲儀（Autoscience? AS2060B Ultrasonic Cleaner）；恒溫振蕩箱(THZ-98A，南京昕航科學(xué)儀器有限公司)； 真空干燥箱(DZF-6020, 鞏義市英峪予華儀器廠)。茯苓多糖（自制），溴代十二烷（AR，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），氯乙酸（AR，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），羥基喜樹堿（

5、AR，貴州漢方制藥有限公司），其他試劑均為分析純。2 方法2.1  十二烷-羧甲基-茯苓多糖的制備配置50%的NaOH溶液，稱取一定的茯苓多糖，溶入到50%的NaOH溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?，加入等量乙醇，抽濾，再用無水乙醇、丙酮依次洗滌23次，在真空干燥得茯苓多糖Na鹽。稱取自制茯苓多糖Na鹽3 g，加入到三口圓底燒瓶中，加入異丙醇60 ml，充分?jǐn)嚢璺稚?0 min，緩慢滴加9 ml的溴代十二烷，在50的溫度下反應(yīng)一定時(shí)間，充分?jǐn)嚢?。反?yīng)完畢后用HAc中和調(diào)pH值為6。加入3倍量的無水乙醇使產(chǎn)品析出，充分靜置沉淀；抽濾，用80%乙醇洗滌數(shù)次， AgNO3檢驗(yàn)Br-的存在，洗到溶液不出

6、現(xiàn)白色沉淀為止。再用無水乙醇、丙酮依次洗滌23次，得固體粉末，置真空干燥箱干燥。采用二次加堿法制備：稱取烷基茯苓多糖1.5 g，加入水3 ml，乙醇30 ml，攪拌分散20 min，再加入NaOH 0.75 g，室溫反應(yīng)4 h，加入ClCH2COOH 1.8 g，攪拌20 min ，此時(shí)測(cè)pH值小于7，再加NaOH 0.75 g，pH大于7，在4550反應(yīng)6 h。反應(yīng)完畢后用HAc調(diào)節(jié)pH值為中性。用80%乙醇反復(fù)洗滌，用AgNO3檢驗(yàn)Cl-的存在，洗到溶液不出現(xiàn)白色沉淀為止。用無水乙醇、丙酮洗滌23次，得固體粉末，置真空干燥箱干燥。將精制的茯苓多糖、十二烷-茯苓多糖、十二烷-羧甲基-茯苓多糖的粉末用 KBr 壓片后在 BIO-BADEXALIBUR FTS3000 紅外光譜儀下測(cè)定。其中，W%是元素分析中某原子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，Ma是糖單元中該原子的原子量和，Wa是取代基團(tuán)中該元素的原子量之和，Mo是取代基團(tuán)的分子量之和。本文中的取代度定義為每個(gè)葡萄糖環(huán)上烷基取代基的數(shù)量。稱取制備得到的樣品，將樣品浸泡在鹽酸乙醇溶液中（用70%的乙醇配制），攪拌過夜，使羧甲基鈉的鈉離子完全被H+取代，轉(zhuǎn)變成游離羧甲基酸，離心，水洗到洗液中無氯離子存在（用硝酸銀溶液檢查），用過量的標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液溶解，此時(shí)溶