實驗六_土壤中真菌純化、分離和培養(yǎng).

1、實驗六實驗六土壤中真菌分離、純化和培養(yǎng)土壤中真菌分離、純化和培養(yǎng) 掌握從土壤中初步分離培養(yǎng)真菌的方法，掌握從土壤中初步分離培養(yǎng)真菌的方法，從而獲得真菌純培養(yǎng)技能；了解基本接從而獲得真菌純培養(yǎng)技能；了解基本接種技術(shù)。種技術(shù)。 土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源?，F(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多；其次為放線菌和霉菌。壤中細(xì)菌數(shù)量最多；其次為放線菌和霉菌。本次實驗從土壤中分離真菌。本次實驗從土壤中分離真菌。樣品：樣品：新鮮土壤新鮮土壤培養(yǎng)

2、基：加有培養(yǎng)基：加有2ml2ml鏈霉素的鏈霉素的PDAPDA培養(yǎng)基或培養(yǎng)基或孟加拉紅培養(yǎng)基。孟加拉紅培養(yǎng)基。無菌水：無菌水：裝有裝有9mL無菌水的試管無菌水的試管4支支。其它：其它：無菌培養(yǎng)皿無菌培養(yǎng)皿4皿皿、無菌吸管、酒精、無菌吸管、酒精燈、培養(yǎng)箱等燈、培養(yǎng)箱等 。u1 1、土壤稀、土壤稀釋釋液的制液的制備備 用用“ “稀稀釋釋平板平板計數(shù)計數(shù)法法” ”中的方法中的方法進(jìn)進(jìn)行，行，將將土土樣樣稀稀釋釋至至10105 5。 將將1瓶土壤菌液（稱取土樣瓶土壤菌液（稱取土樣10g放入盛放入盛90mL無菌水）和無菌水）和4管管9mL的無菌水排列好，的無菌水排列好，按按10-1、10-2、10-3、1

3、0-4及及10-5依次編號。依次編號。在無菌操作條件下，用在無菌操作條件下，用lmL無菌移液管吸無菌移液管吸取取lmL10-1濃度的菌液于一管濃度的菌液于一管9mL無菌水無菌水中，將移液管吹洗三次，搖勻即為中，將移液管吹洗三次，搖勻即為10-2濃濃度菌液。同樣方法，依次稀釋到度菌液。同樣方法，依次稀釋到10-5。 注意：注意：在土壤稀釋過程中，吸取不同梯在土壤稀釋過程中，吸取不同梯度的菌液需換用不同的吸管。度的菌液需換用不同的吸管。土壤稀釋液的制備和稀釋液的取樣土壤稀釋液的制備和稀釋液的取樣2、分離方法、分離方法 采用稀釋平板分離法。又可分為兩種采用稀釋平板分離法。又可分為兩種方法。方法。 混

4、菌法混菌法和和涂抹法涂抹法?；旎炀ǚㄍ客磕ǚǚ╱3 3、培、培養(yǎng)養(yǎng) 將將上述接上述接種種土壤土壤懸懸液的平板液的平板倒置于倒置于2828培培養(yǎng)養(yǎng)3-5d3-5d。u4 4、挑菌、挑菌純純化化u5 5、計數(shù)計數(shù)u6 6、菌、菌種種保存保存 將將分離到的分離到的真真菌菌轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)接到接到PDAPDA斜面上培斜面上培養(yǎng)養(yǎng)，待，待長長好后，置于冰籍中保存，必要好后，置于冰籍中保存，必要時進(jìn)時進(jìn)行深入行深入研研究。究。六、注意事項六、注意事項1、混菌法接種時溫度不能過高，應(yīng)低于、混菌法接種時溫度不能過高，應(yīng)低于45，如不用溫度計，則以不燙臉、手為宜。如不用溫度計，則以不燙臉、手為宜。2、涂布法接種時一定要涂抹均勻，否則就會無、涂布法接種時一定要涂抹均勻，否則就會無法記數(shù)。法記數(shù)。3、接種后的培養(yǎng)皿應(yīng)靜置、接種后的培養(yǎng)皿應(yīng)靜置15分鐘以上，然后倒分鐘以上，然后倒置培養(yǎng)。置培養(yǎng)。1 在分離真菌時為什么需加鏈霉素（慶在分離真菌時為什么需加鏈霉素（慶大霉素或氯霉素），而不加青霉素？大霉素或氯霉素），而不