間歇低氧幼鼠8-異前列腺素F2α變化及芹菜素的干預效果

1、間歇低氧幼鼠8-異前列腺素F2變化及芹菜素的干預效果         08-11-03 10:42:00     編輯：studa20              作者：周永海，蔡曉紅，張存雪，李源，李寧，龔永生，胡良岡  【關(guān)鍵詞】  間歇低氧；8-異前列腺素F2；芹菜素    Abstract:&

2、#160; Objective: To detect the changes of 8-iso-prostaglandin F2 (8-ISO-PGF2) in serum and the hippocampus and to observe the intervention effect of apigenin in immature rats exposing to intermittent hypoxic. Methods: Thirty two 34 week-aged SD rats were randomly divided into intermittent hypoxia (I

3、H) group，air control(C) group，apigenin+ DMSO (Q) group and DMSO control(R) group. Each group had eight rats. Intermittent hypoxia model was induced by an intermittent hypoxia cabin and the cabin was flushed with 99.99% nitrogen alternating with 99.5% oxygen. The cycle of hypoxia- reoxygenation was 9

4、0 s. After 2 weeks，the serum and hippocampus levels of 8-Iso-Prostaglandin F2were tested by ELISA. Results: In the serum，the expression of 8-ISO-PGF2 in IH and R groups were significant higher than that in C and Q groups (P <0.01，respectively). There were no difference between C and Q groups (P &

5、gt;0.05)，and no difference between IH and R groups (P >0.05). The similar results were found in hippocampus. Serum 8-ISO-PGF2 and hippocampus 8-ISO-PGF2 were positively correlated (r =0.818，P <0.01). Conclusion: The 1evels of 8-iso-PGF2 increases in both serum and hippocampus of immature rats

6、with IH and the 1evels of 8-iso-PGF2 in serum can reflect indirectly the degree of oxidative stress in hippocampus. Apigenin can reduce the 1evel of 8-iso-PGF2 in serum and hippocampus. Therefore，it has plication prospect in treatment of injuries which induced by IH.    Key words:

7、0;  Intermittent hypoxia；8-ISO-PGF2；Apigenin    兒童睡眠障礙阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)可造成神經(jīng)系統(tǒng)損害，從而引起認知功能障礙、學習成績下降，其危害逐漸引起社會的廣泛關(guān)注。目前認為OSAHS最重要的病理生理改變是夜間反復的間歇低氧，進而引起機體氧化應激。芹菜素是天然存在的一種黃酮類化合物，能清除氧自由基及NO自由基等，從而體現(xiàn)了對神經(jīng)的保護作用1。本試驗模擬OSAHS的典型病理生理特征，建立慢性間歇低氧的幼

8、鼠模型，測定血清及海馬中8異前列腺素F2水平，并觀察芹菜素的干預作用，以期為臨床應用芹菜素治療間歇低氧造成的損傷提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。    1  材料和方法    1.1  動物與藥品  取體重為80100 g健康雄性SPF級SD幼鼠(34周齡)32只，由溫州醫(yī)學院實驗動物中心提供，合格證號：SYXK(浙)2005-0061。芹菜素純度為98%，批號：060313（陜西慧科植物開發(fā)有限公司）；二甲基亞砜（DMSO）批號：040602（上海生工生物工程技術(shù)服務有限公司）。芹菜素配制方法：25 mg芹菜素

9、+8 ml生理鹽水+40l DMSO，配成11.6×10-3mol/L，4 冰箱保存。溶劑配制方法：8 ml生理鹽水+40l DMSO，配成0.5%的溶劑，4 冰箱保存。    1.2  儀器  CYES蛐脫酢躉計宀舛怯繕蝦味潛沓峁湫脫醪蘸涂掌舛哉詹兆災疲魈逵剎恍飧種瞥桑嶄侵屑洳糠治黃甯制俊躚狗髁考啤刂瞥絳頡痰縉鰲绱歐拖允酒韉茸槌煽刂葡低場湫脫醪?25 cm×48 cm×24 cm大小，側(cè)壁上有4個進氣的單向閥，4個排氣的單向閥；空氣模擬對照艙60 cm×48 cm×24 cm大小，側(cè)壁上有2個

10、進氣的單向閥，2個排氣的單向閥），電磁閥由寧波亞德客自動化工業(yè)有限公司提供，單片機選用臺灣華邦（Winbond）的W78E516B八位單片機，醫(yī)用壓縮氧氣(濃度>99.5%)和壓縮高純度氮氣(濃度>99.99%)由溫州市醫(yī)用氧廠提供。    1.3  動物模型建立及分組  參照McGuire、Gozal等2，3方法建立慢性O(shè)SAHS動物模型。取34周齡雄性幼鼠32只，按數(shù)字表法隨機分為間歇低氧組（IH），空氣對照組（C），芹菜素+DMSO組(Q)和二甲基亞砜組(R)，每組各8只。IH、R、Q組置于常壓間歇低氧艙內(nèi)。90 s為一次低氧

11、囪躚罰?.3 kPa壓力通氮氣30 s、停30 s，25 L/min流量通氧氣12 s、停18 s，在停止通氣階段由連接的測氧儀分別測間歇低氧艙內(nèi)的氧濃度高值、低值和CO2 濃度，CO2 濃度始終<0.01%，濕度為（50±10）%。每天7.5 h (8:50-16:20)。C組幼鼠置于同等條件下的空氣模擬對照艙，通壓縮空氣，與間歇低氧艙由同一單片機程序控制氣體輸入。Q組幼鼠每天于常壓低氧前30 min腹腔注射25 mg/kg4用DMSO溶解的芹菜素，R組則注射同量DMSO+生理鹽水。幼鼠自由活動，不限飲食，實驗時間為2周。    實驗過程中，白天

12、各艙上面均蓋厚布，使艙內(nèi)保持黑暗，模擬黑夜，幼鼠進入睡眠狀態(tài)。每天間歇低氧結(jié)束后，幼鼠出艙，置于日光燈下，模擬白天，自由活動，飲食不限。    1.4  血清及海馬8-ISO-PGF2測定  低氧結(jié)束次日，戊巴比妥鈉（35 mg/kg，腹腔注射）麻醉，將幼鼠仰臥固定，剖開腹腔，抽取腹主動脈血3 ml，低溫離心機4 000 r/min離心15 min，取上清，-20 保存待測；取血后迅速斷頭處死幼鼠，取出海馬，留取100 mg，用磷酸緩沖液反復沖洗干凈后-80 保存待測。ELISA試劑盒購自美國Assay designs公司，按照試劑盒說明書操作

13、，用CurveExpert1.38軟件繪制標準曲線，計算各孔相應8-ISO-PGF2濃度。批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為6.5%和7.8%，最低可測范圍為40 pg/ml。    1.5  統(tǒng)計學處理方法  采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件。用單因素方差分析，方差齊者組間比較用LSD-t檢驗，方差不齊者用Tamhanes T2 檢驗。兩變量的相關(guān)分析用Pearson 直線相關(guān)分析法。    2  結(jié)果    2.1  各組幼鼠血清與海馬中8-ISO-PGF2的含量結(jié)果

14、0; 見表1。    2.2  血清和海馬組織中8-ISO-PGF2含量的相關(guān)分析  兩者呈顯著正相關(guān)（r =0.818，P0.01，n =64）結(jié)果見圖1。    3  討論    睡眠是人生命的重要組成部分，兒童睡眠障礙以O(shè)SAHS為多見，發(fā)病率約為2%。OSAHS患兒存在一定程度的執(zhí)行能力、注意力、記憶力和言語能力下降5；有研究發(fā)現(xiàn)，雖經(jīng)鼻持續(xù)氣道正壓通氣(nCPAP)、口咽部手術(shù)等方法治療，OSAHS患者受損的學習記憶等認知功能也只能得到部分改善6, 7，因此，如何早期便捷、有效地判定OSAHS所致的間歇低氧腦損傷程度及探尋一種新的方法來進行防治具有重要意義。    OSAHS特征性的低氧方式