紅茶菌調(diào)節(jié)小鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究(1)

1、紅茶菌調(diào)節(jié)小鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究(1)        作者：李波清，孟瑋，王志強(qiáng)，于敏，孫旭紅【關(guān)鍵詞】 紅茶菌;,小鼠;,免疫功能摘要：目的探討紅茶菌對(duì)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。方法Balb/c小鼠30只，體重1822 g，隨機(jī)分為兩組，用紅茶菌液給小鼠灌胃30 d后處死，以MTT法測(cè)定NK細(xì)胞的殺傷活性；以腹腔巨噬細(xì)胞吞噬白色念珠菌的方法評(píng)價(jià)巨噬細(xì)胞吞噬功能；以胸腺細(xì)胞增殖法和脾細(xì)胞增殖法分別測(cè)定IL1和IL2的生物活性。結(jié)果紅茶菌能顯著提高NK細(xì)胞的殺傷活性；巨噬細(xì)胞吞噬功能明顯增強(qiáng)；紅茶菌灌胃組IL1和IL2

2、活性分別為：0.549±0.024，0.405±0.018；對(duì)照組分別為：0.341±0.021，0.361±0.011，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，IL1，IL2活性得到顯著提高(P0.01)。結(jié)論 紅茶菌能顯著增強(qiáng)小鼠的免疫功能。關(guān)鍵詞：紅茶菌; 小鼠; 免疫功能Abstract：ObjectiveTo investigate the regulative effect of black tea fungus on the immunological function of mice. MethodsThirty Balb/c mice(weight 182

3、2 g) were randomly divided into two groups. All the mice were sacrificed after they had been given black tea fungus in intragastric administration for thirty days. The killing activity of NK cells were detected by MTT method, and peritoneal macrophage swallowing C. albicans test was used to appraise

4、 the phagocytes function. The activities of interleukin 1 and interleukin 2 were separately detected by mouse thymocyte or splenic cell proliferation test.ResultsThe activities of IL-1 and IL-2 of mice were 0.549± 0.024, 0.405±0.018 in experimental group respectively; they were 0.341±

5、 0.021 and 0.361±0.011 respectively in control group. They were significantly higher in experimental group than those in control group (P0.01). The killing activity of NK cell and the phagocytes function of the macrophages in vitro were also markedly promoted(P0.01).ConclusionThe black tea fung

6、us can enhance the immunological function of mice significantly.Key words：Black tea fungus; Mice; Immunological function    紅茶菌又稱“海寶”或“胃寶”，是在我國(guó)民間廣為流行的一種保健飲品，為我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分。前期研究中我們發(fā)現(xiàn)紅茶菌對(duì)小鼠具有顯著的抑瘤作用，為進(jìn)一步探討其抑瘤機(jī)制，我們通過(guò)用紅茶菌對(duì)小鼠進(jìn)行胃內(nèi)灌注的方法，觀察紅茶菌對(duì)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。1 材料與方法1.1 動(dòng)物Balb/c小鼠，體重1822 g，雌

7、雄兼有，引自北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心。1.2 細(xì)胞株K562細(xì)胞由北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部免疫系提供。1.3 試劑紅茶菌，本室保存菌種，總菌數(shù)為5.5×107CFU/ml，RPMI1640（Gibco公司），LPS（Sigma公司），白色念珠菌（本室保存），ConA（北京醫(yī)藥站），MTT（Sigma公司），DMSO（國(guó)產(chǎn)）。1.4 儀器全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Multiskan MS），CO2培養(yǎng)箱（Forma公司），低速冷凍離心機(jī)（IEC公司），電子精密天平（METTLER TOLEDO）。1.5 動(dòng)物分組隨機(jī)把Balb/c小鼠分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，各組15只。對(duì)照組以自來(lái)水0.5 ml/

8、只，實(shí)驗(yàn)組以紅茶菌0.5 ml/只，每天胃內(nèi)灌注1次，第30天頸椎脫臼處死小鼠，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀測(cè)。1.6 MTT法測(cè)定NK細(xì)胞殺傷活性常規(guī)取脾臟制成細(xì)胞懸液，用不含血清RPMI1640液洗滌2次，以10糞 RPMI1640配成1×106個(gè)細(xì)胞/ml，作為效應(yīng)細(xì)胞；取連續(xù)傳代培養(yǎng)的K562細(xì)胞懸液各100 l加入96孔平底培養(yǎng)板，再向每孔中加入MTT（5 mg/ml）10 l，每組設(shè)3個(gè)平行孔，另設(shè)3個(gè)效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照孔（100 l上述脾細(xì)胞加100 l 10糞 RPMI1640及10 lMTT）和靶細(xì)胞對(duì)照孔（100 l上述K562細(xì)胞加100 l10糞 RPMI1640及10 l MTT）

9、，置37，5%CO2培養(yǎng)箱中4 h，取出后1 000 r/min，離心10 min，測(cè)560 nm處A值，計(jì)算NK細(xì)胞殺傷活性。NK細(xì)胞殺傷活性（%）=實(shí)驗(yàn)孔A值效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照孔A值    靶細(xì)胞對(duì)照孔A值×1001.7 體外巨噬細(xì)胞吞噬功能測(cè)定各組小鼠于實(shí)驗(yàn)第30 d分別腹腔內(nèi)注射冷RPMI1640液5 ml，輕柔按摩10 s后吸出液體，1 000 r/min離心10 min，棄去大部分上清，留約5 ml，加100 l白色念珠菌液（1×105CFU）混勻，置37恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)60 min后混勻涂片，瑞氏染色，計(jì)算體外巨噬細(xì)胞吞噬百分率1

10、。1.8 IL1和IL2的誘生與檢測(cè)1.8.1 IL1的誘生無(wú)菌操作向小鼠腹腔內(nèi)注射冷RPMI1640培養(yǎng)液5 ml，輕柔按摩10 s后吸出液體，離心洗滌3次，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106/ml，加入有絲分裂原LPS（10 U/ml），置37，5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)誘導(dǎo)36 h，離心取上清為IL12 ，置-20冰箱保存?zhèn)溆谩?.8.2 IL1的檢測(cè) 無(wú)菌操作取正常Balb/c小鼠胸腺，制成1×107/ml細(xì)胞懸液，取細(xì)胞懸液及待檢上清各100 l加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置375%CO2培養(yǎng)箱中72 h。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)行1 000 r/min離心10 min，棄上清，加入200 l DM

11、SO，在全自動(dòng)酶標(biāo)儀波長(zhǎng)為560 nm處測(cè)定其A值，表示IL1的活性。1.8.3 IL2的誘生 無(wú)菌操作制備小鼠脾細(xì)胞懸液，用RPMI1640液離心洗滌（1 000 r/min，10 min）3次后以10糞 RPMI1640配成5×106/ml，取100 l加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，加入ConA（5 g/ml），置37 5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)誘導(dǎo)36 h，離心取上清為IL22，置-20冰箱保存?zhèn)溆?。制備活化脾淋巴?xì)胞：按上述方法取正常Balb/c小鼠脾臟，制成5×106/ml細(xì)胞懸液，加入ConA（5 g/ml），置37 5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，收集細(xì)胞，離心洗滌3次，用RPMI1640液配成5×106/ml細(xì)胞懸液，作為檢測(cè)IL2的反應(yīng)細(xì)胞。1.8.4 IL2活性檢測(cè)取-20冰箱保存的IL2上清及上述反應(yīng)細(xì)胞各100ul加入96孔平底