睪酮5-α還原酶Ⅱ基因A49T多態(tài)性與影響前列腺癌預后關(guān)系的研究

1、睪酮5-還原酶基因A49T多態(tài)性與影響前列腺癌預后關(guān)系的研究         10-05-10 16:07:00     編輯：studa20                   作者：佟明，黃偉超，王延柱，李自智【摘要】  目的 探討睪酮5-還原酶(SRD5A2)基因A49T(49密碼子

2、蘇氨酸替代丙氨酸)多態(tài)性與影響前列腺癌預后因素的關(guān)系。方法 對A49T多態(tài)性位點用Mwo-1限制性內(nèi)切酶進行酶切鑒定，觀察112例前列腺癌患者和89例前列腺增生患者的A49T三種不同基因型(AA、AT、TT)多態(tài)性分布情況的差異及其多態(tài)性與前列腺癌患者年齡、前列腺特異性抗原(PSA)、游離PSA/總PSA值(F/T)、Gleason評分、臨床分期的關(guān)系。結(jié)果 前列腺癌組與前列腺增生組的A49T基因頻度風險無顯著性差異(P>0.05)。AT+TT基因型患者發(fā)病年齡明顯低于AA型(P<0.05)。AT+TT基因型患者Gleason評分平均水平明顯高于AA型(P<0.05)。AT+

3、TT基因型可能預后較差。用分段評價PSA、Gleason評分、TNM分期、年齡均與兩種基因型無相關(guān)性，提示基因型與預后無顯著性差異。AA、AT+TT基因型與Gleason評分的關(guān)系，等級評分(210分)與分段評價法(6分、>6分)結(jié)果不一致。結(jié)論 用等級評分與分段評價法結(jié)果不一致。等級評分法比分段法或許更能反映Gleason評分與A49T基因型的關(guān)系，更適用于估計預后。 【關(guān)鍵詞】  睪酮5-還原酶;前列腺癌;基因;多態(tài)性Abstract Objective To investigate the association between A49T polymorphism of

4、SRD5A2 gene and prognosis factors of prostate cancer.Methods PCR was used to examine the A49T polymorphisms of SRD5A2 gene in the tissues of prostate cancer resected from 112 patients(CaP group)and the specimens of benign prostate hyperplasia(BPH group) resected from 89 patients.The association of A

5、49T polymorphism with age of onset，F(xiàn)PSA，TPSA，F(xiàn)/T，T stage，and Gleason score were analyzed.Results There was no significant difference in A49T polymorphism between the CaP and BPH groups(P>0.05).The average age of CaP patients was significantly higher than that of the BPH patients(P<0.05).In the

6、 CaP patients，the Gleason score was significantly higher,and the age of onset was significantly lower in the AT+TT genotype than in the AA genotype(both P<0.05).Conclusion AA+AT genotype may be of worse prognosis，however，without significant difference.Rank scoring may reflect the relation between

7、 Gleason score and A49T genotype and estimate the prognosis better than two-level discrete evaluation.Key words SRD5A2 gene;prostate carcinoma;gene;polymorphism我們通過提取前列腺癌及前列腺增生患者外周血白細胞基因組DNA，并對SRD5A2基因第一外顯子進行擴增，用Mwo-1對A49T多態(tài)性位點進行酶切鑒定，以了解SRD5A2基因A49T(49密碼子蘇氨酸替代丙氨酸)多態(tài)性與前列腺癌預后因素的聯(lián)系，并研究基因多態(tài)性與前列腺癌、前列腺增生的

8、關(guān)系。1 資料與方法1.1 研究對象 2006年3月至2008年12月，我院診治的前列腺癌患者112例作為試驗組，年齡5286歲，平均70歲，病理活檢Gleason評分3分9例，4分9例，5分12例，6分21例，7分31例，8分14例，9分14例，10分2例。臨床分期：T1 1例，T2 42例，T3 57例，T4 12例。前列腺增生患者89例作為對照組，年齡4995歲，平均68歲，所有病例經(jīng)臨床檢查、穿刺活檢、磁共振成像(MRI)、肛門指檢、血游離前列腺特異抗原(PSA)等檢查排除前列腺癌。1.2 研究方法1.2.1 外周血白細胞基因組DNA擴增與酶切 從所有112例前列腺癌和89例前列腺增生

9、患者分別取外周血5 ml，利用乙醇提取法提取血基因組DNA。然后參照分子克隆指南并通過聚合酶鏈反應(PCR)對其第1外顯子進行擴增，引物為上游1：5-GCAGCGGCCACCGGCGAGG-3，下游：5-AGCAGGGCAGTGCGCTGCACT-3(試劑購自中國賽百盛公司)。反應體系：50 l體系，模板DNA 2 l(0.1 g/1)，dNTP 2 l(10 mmol/L)，引物(上、下游)2 l，Taq酶0.2 l(5 u/l )，10×PCR緩沖液5 l，MgCl2 3 l(25 mmol/L)，超純水加至50 l，1%瓊脂糖凝膠電泳，并觀察PCR產(chǎn)物的大小(試劑購于Pharm

10、acia公司，美國)，Mwol酶切反應(試劑購于新英格蘭公司，美國)，反應體系：20 l體系，PCR產(chǎn)物4 l，10×NE緩沖液C 2 l，Mwol 0.4 l，超純水加至20 l。反應條件：反應體系恒溫水浴鍋60 ，1 h。酶切產(chǎn)物2%瓊脂糖凝膠電泳，并觀察酶切產(chǎn)物大小，以鑒定AA、AT、TT基因型。三者的堿基分別為AA：90、70、46/47 bp，AT：107、90、70、46/47 bp，TT：107、70、46/47 bp。1.2.2 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 13.0軟件，對所得數(shù)據(jù)進行t檢驗、非參數(shù)檢驗、2檢驗、多因素Logistic回歸分析進行統(tǒng)計。2 結(jié)果(1)前列

11、腺癌組和前列腺增生組的A49T三種不同基因型(AA、AT、TT)分別為104例(92.9%)、7例(6.25%)、1例(0.89%)和81例(91.0%)、8例(9.0%)、0例。前列腺癌和前列腺增生組的A49T的基因頻度分別為0.040，0.045。通過2檢驗我們比較了前列腺癌組、前列腺增生組與A49T分布之間的關(guān)系，顯示差異均無顯著性，兩組的A49T分布無區(qū)別(2=0.047，df=2，P>0.05)。OR比值表明前列腺癌與前列腺增生的A49T基因頻度風險無顯著性差異(OR=0.779)。(2)前列腺癌組AA與AT+TT基因型與年齡、游離PSA、總PSA的關(guān)系：表1示前列腺癌組中AT

12、+TT基因型組發(fā)病年齡明顯低于AA組(P<0.05)。用非參數(shù)檢驗顯示總PSA、游離PSA、游離PSA/總PSA、T分期、Gleason評分在兩組間的差異性，結(jié)果顯示游離PSA、總PSA、F/T、T分期的非參數(shù)檢驗P>0.05，差異無顯著性，而AA和AT+TT基因型與Gleason評分差異有顯著性。AT+TT基因型Gleason評分平均水平明顯高于AA基因型(P<0.05)。(3)應用多因素Logistic回歸分析研究腫瘤患者PSA水平，Gleason評分、T分期與AA、AT+TT基因型的相關(guān)性。表2示前列腺癌患者PSA10、>10，Gleason6、>6，T分期T2、>T2，年齡70歲、>70歲與AA、AT+TT基因型的關(guān)系，反映了AA、AT+TT基因型與預后關(guān)系情況。PSA10、>10時，2(df，1)=0.011，OR=1.429，最小理論頻數(shù)=3.64。Gleason6、>6時，2(df，1)=2.337，OR=6.236，最小理論頻數(shù)=3.57。T分期T2、>T2時，2(df，1)=1.405，OR=4.742，最小理論頻數(shù)=3.07。年齡70、>70時，2(df，1)=1.322，OR=0.298，均與兩種基因型無相關(guān)性