商陸總皂苷提取工藝研究[1]

1、性, 便用冰醋酸調(diào)節(jié)pH, 冰醋酸的濃度分別為0. 2% , 0. 5%, 1. 0%, 最終確定流動(dòng)相比例為甲醇. 0. 5% 冰醋酸( 60. 40)。筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法對(duì)提取工藝進(jìn)行了加水量、浸泡時(shí)間的考察和煎煮次數(shù)以及煎煮時(shí)間的優(yōu)化, 通過(guò)試驗(yàn)使得原工藝更加完善科學(xué)和可控, 為工藝的穩(wěn)定提供了保障, 也為本品的藥材浸膏和制劑的質(zhì)量控制提供了基礎(chǔ)。 DO I . 10. 3870 /yydb. 2011. 05. 033 參考文獻(xiàn) 1 . 周平蘭, 夏新華, 歐陽(yáng)恒, 等. 紫銅消白顆粒的提取工藝研究 J . 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2005, 24( 5): 435- 436.

2、2 . 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典(一部) M . 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 附錄33- 36. 3 . 周濃. 玄參的質(zhì)量評(píng)價(jià)及其指紋圖譜研究 D . 重慶: 西南大學(xué), 2008: 26- 28. 4 . 王建華, 謝麗華, 劉洪宇, 等. 玄參不同加工中哈巴俄苷與肉桂酸的HPLC 含量測(cè)定 J. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2000, 35 ( 6): 375- 379. 5 . 張洪霞, 趙懷清, 鞏克民, 等. RP.H PLC 法同時(shí)測(cè)定玄參中肉桂酸、哈巴酯苷的含量 J. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 23( 8) : 507- 509. 6 . 李振東, 徐位良,

3、 羅嬌艷. HPLC法測(cè)定玄麥甘桔顆粒中哈巴俄苷與肉桂酸含量 J. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào), 2008, 24( 2): 130- 132. 商陸總皂苷提取工藝研究詹十音(湖北省新華醫(yī)院藥學(xué)部, 武漢. 430015) 摘. 要 . 目的. 用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化商陸總皂苷提取工藝。方法. 以商陸皂苷A 為考察指標(biāo), 通過(guò)單因素及L9 ( 34 ) 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選商陸總皂苷的提取工藝?？疾煲掖紳舛?、浸提時(shí)間、提取次數(shù)、乙醇用量對(duì)商陸皂苷A 含量的影響。結(jié)果. 最佳工藝條件為70%乙醇提取3次, 乙醇用量400 mL, 浸提3 h。該結(jié)果在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中得到確認(rèn)。結(jié)論. 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝可較好地提取商陸中皂苷類(lèi)

4、化合物, 適用于商陸總皂苷的提取。 關(guān)鍵詞 . 商陸; 商陸皂苷A; 總皂苷; 提取工藝 中圖分類(lèi)號(hào) . R286; R927. 1. . . 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 . A. . . 文章編號(hào) . 1004- 0781( 2011) 05- 0646- 03 . . 商陸為商陸科植物商陸( Phy tolacca acinosa Roxb. )和垂序商陸(Phy tolacca Americana L. ) 的干燥根, 味苦性寒, 有毒, 歸肺、脾、腎、大腸經(jīng)。功能逐水消腫, 通利二便, 解毒散結(jié), 主治水腫脹滿, 二便不利, 癰腫, 瘡毒, 為歷版.中華人民共和國(guó)藥典.收載品種 1 。主產(chǎn)于湖北、河南

5、。文獻(xiàn)報(bào)道商陸根提取物有利尿作用 2 , 煎劑有祛痰作用 3 ; 商陸多糖有免疫調(diào)節(jié)作用 4.5 和抗腫瘤作用 6 。商陸主要含有三萜皂苷類(lèi)成分, 筆者未見(jiàn)有商陸總皂苷提取工藝的研究報(bào)道。為研究總皂苷的提取工藝, 筆者在本實(shí)驗(yàn)中以商陸的主要成分商陸皂苷A 為含量測(cè)定的成分, 采用質(zhì)量型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)含量, 考察總皂苷的提取工藝。1. 儀器與試藥. 1. 1. 儀器. Waters1525高效液相色譜儀, 725型自動(dòng)進(jìn)樣器; A lltechELSD.2000ES型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。電子分析天平( SHANGPING FA1004, 上海分析儀器廠)。 收稿日期 . 2010- 09-

6、14. 修回日期 . 2010- 10- 06 作者簡(jiǎn)介 . 詹十音( 1978- ), 女, 湖北武漢人, 藥師, 學(xué)士, 主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作。電話: 027 - 65600751, E.m a i:l zsy20071104 yahoo. com. cn。1. 2. 試藥. D.101大孔吸附樹(shù)脂(天津海光化工有限公司)。商陸皂苷A 對(duì)照品(湖北省藥品檢驗(yàn)所提供) , 商陸(本院藥劑科提供, 由本院中藥師鑒定為Phy tolacca acinosa Roxb. 的根) , 乙腈(天津市科密歐化學(xué)試劑公司, 色譜純) , 其余試劑均為分析純。2. 方法與結(jié)果. 2. 1. 色譜條件. 色譜

7、柱Hypersil ODS 柱( 150 mm . 4. 6mm, 5 .m ) , 流動(dòng)相為乙腈.水( 70. 30) , 流速1 mL. m in.1, 柱溫35 . , ELSD 條件: 漂移管溫度60 . , 載氣流速2. 0 L. m in.1。2. 2. 對(duì)照品溶液的制備. 商陸皂苷A 對(duì)照品儲(chǔ)備液: 精密稱取商陸皂苷A 對(duì)照品10. 1 mg置于10 mL 量瓶中, 加甲醇溶解并稀釋, 定容, 制成濃度為1. 01mg. mL.1儲(chǔ)備液, 置4 . 冰箱備用。2. 3. 供試品溶液的制備 7 . 稱取商陸藥材粗粉, 每份50 g, 按正交表設(shè)計(jì)的提取溶劑、溶劑用量、提取次數(shù)和提取

8、時(shí)間進(jìn)行回流提取, 過(guò)濾, 濃縮至無(wú)醇味, 得浸膏。將浸膏用適量純化水溶解, 抽濾, 除去難溶性雜質(zhì)。將濾液通過(guò)處理好的D.101大孔吸附樹(shù)脂柱, 先用純化水洗滌至流出液近無(wú)色, 再用95%乙醇洗脫, 收集洗脫液。. 646. H erald ofMedicine Vo l.30 N o.5M ay 2011減壓回收乙醇, 80 . 烘箱干燥得商陸總皂苷, 稱質(zhì)量。精密稱取以上干燥產(chǎn)物約0. 2 g, 用甲醇溶解, 并定容至100mL, 用孔徑45 .m 微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣20 .L, 記錄峰面積, 代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。2. 4. 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn). 取一定濃度的對(duì)照品溶液和供試品溶液, 按照

9、. 2. 1.項(xiàng)色譜條件, 各進(jìn)樣20 .L, 記錄HPLC 圖譜。結(jié)果表明商陸皂苷A 與其他雜峰分離良好。商陸皂苷A 的保留時(shí)間約為7. 8 m in, 結(jié)果見(jiàn)圖1。. . 圖1. 商陸皂苷A對(duì)照品及樣品高效液相色譜圖. A. 對(duì)照品; B. 樣品; 1. 商陸皂苷A 2. 5. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制. 精密量取商陸皂苷A 對(duì)照品儲(chǔ)備液2. 0mL, 置于10mL量瓶中, 加甲醇至刻度, 搖勻, 靜置, 配制成濃度為202 .g. mL.1的甲醇溶液; 精密取5, 10, 20, 30, 40, 50 .L進(jìn)樣, 按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo), 質(zhì)量為橫坐標(biāo), 計(jì)算回歸方程得標(biāo)準(zhǔn)曲線

10、如下: Y = 276 921X - 13 618 ( r = 0. 999 7)。結(jié)果表明商陸皂苷A 的濃度在1. 01 10. 1 .g范圍內(nèi)與峰面積具有良好線性關(guān)系。2. 6. 精密度實(shí)驗(yàn). 取濃度為202 .g. mL.1商陸皂苷A 對(duì)照品溶液進(jìn)樣, 每次進(jìn)樣20 .L, 重復(fù)進(jìn)樣6 次, 測(cè)得峰面積。計(jì)算得RSD為1. 79%。2. 7. 重復(fù)性實(shí)驗(yàn). 取同一批藥材6份, 按. 2. 3.項(xiàng)方法制備供試品溶液, 測(cè)定商陸皂苷A 的含量, 計(jì)算得含量RSD 為2. 05% , 表明該方法重復(fù)性好。2. 8 . 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn). 取商陸供試品溶液, 用孔徑0. 45 .m微孔濾膜過(guò)濾, 于室

11、溫0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 h后分別進(jìn)樣, 記錄峰面積并計(jì)算RSD, 結(jié)果為1. 97%?？梢?jiàn)供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。2. 9. 回收率實(shí)驗(yàn). 采用加樣回收法, 精密稱取0. 75% 商陸藥材粉約0. 5 g 6 份, 分別加入濃度為1. 01mg. mL.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液1. 5, 1. 5, 3, 3, 4. 5, 4. 5mL, 每個(gè)梯度平行2 份; 按照. 2. 3.項(xiàng)制備方法制備供試品溶液, 測(cè)定并計(jì)算, 結(jié)果見(jiàn)表1。平均回收率為99. 73% , RSD= 1. 78%。2. 10. 樣品測(cè)定. 精密稱取商陸藥材粉末9份, 每份50 g, 按. 2. 3.項(xiàng)操作,

12、 依法分別制得供試品溶液。各進(jìn)樣20 .L, 按上述色譜條件測(cè)定, 記錄色譜圖, 用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中商陸皂苷A的含量。2. 11. 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì). 按照預(yù)實(shí)驗(yàn)的提取工藝, 經(jīng)過(guò)多次單因素對(duì)比實(shí)驗(yàn), 將較重要的影響因素確定為浸提時(shí)間、乙醇用量、乙醇濃度和提取次數(shù)等4個(gè)因素, 每個(gè)因素考察3個(gè)水平(表2) , 以商陸皂苷A 的含量為考察指標(biāo), 用L9 ( 34 )正交表安排實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)表3。表1. 商陸皂苷A加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果. 藥材量/ g 原有量加入量測(cè)得量mg 回收率/ % 0. 5 3. 75 1. 52 5. 24 98. 03 0. 5 3. 75 1. 52 5. 23 97. 3

13、7 0. 5 3. 75 3. 03 6. 80 100. 66 0. 5 3. 75 3. 03 6. 83 101. 65 0. 5 3. 75 4. 55 8. 27 99. 34 0. 5 3. 75 4. 55 8. 36 101. 32 表2. 正交實(shí)驗(yàn)因素與水平考察表. 水平乙醇濃度( A ) /% 提取次數(shù)( B ) 乙醇用量( C) /mL 浸提時(shí)間( D) /h 1 60 1 200 1 2 70 2 300 2 3 80 3 400 3 表3. 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果. 序號(hào)A B C D 含量/% 1 1 1 1 1 0. 41 2 1 2 2 2 0. 48 3 1 3

14、3 3 0. 69 4 2 1 2 3 0. 51 5 2 2 3 1 0. 63 6 2 3 1 2 0. 62 7 3 1 3 2 0. 61 8 3 2 1 3 0. 53 9 3 3 2 1 0. 57 K1 1. 58 1. 53 1. 56 1. 61 K2 1. 76 1. 45 1. 56 1. 71 K3 1. 71 1. 88 1. 93 1. 73 R 0. 18 0. 43 0. 37 0. 12 . . A. 乙醇濃度; B. 提取次數(shù); C. 乙醇用量; D. 浸提時(shí)間2. 12. 最佳提取條件的確定. 表3中含量的R 值來(lái)分析, 影響提取含量的因素排序?yàn)锽 C A

15、 D。說(shuō)明提取過(guò)程中提取次數(shù)對(duì)商陸皂苷A 的含量影響最大, 乙醇用量對(duì)商陸皂苷A 含量的影響也較大。乙醇濃度和浸提時(shí)間則影響較小。從K 1、K 2、K 3的數(shù)值比較來(lái)看, 所得的商陸皂苷A 含量最佳的工藝條件為A2 B3 C3D3。因此, 以商陸皂苷A 含量為指標(biāo), 考察商陸中總皂苷地提取工藝, 結(jié)果確定最佳提取工藝條件應(yīng)為: 70%乙醇提取3次, 乙醇用量400mL, 浸提時(shí)間3 h。2. 13. 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn). 為驗(yàn)證最佳工藝, 取商陸葉粉碎, 過(guò)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2011年5月第30卷第5期. 647.內(nèi)徑0. 425mm 篩( 40目篩), 稱取50 g, 按照優(yōu)化后所得最佳提取工藝用乙醇濃度為70

16、%, 提取次數(shù)為3次, 乙醇用量為400mL, 浸提時(shí)間為3 h。按. 2. 3.項(xiàng)操作, 依法分別制得供試品溶液。各進(jìn)樣20 .L, 按上述色譜條件測(cè)定, 記錄色譜圖, 計(jì)算樣品中商陸皂苷A 的含量, 結(jié)果商陸皂苷A的含量平均值為0. 75%。可知與正交實(shí)驗(yàn)表中的最優(yōu)水平基本一致, 說(shuō)明本研究所確定的工藝合理。3. 討論. 參考文獻(xiàn) 8, 9中商陸皂苷A 地提取方法有超聲提取、乙酸乙酯萃取法等。筆者在以上文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上加以改進(jìn), 采用HPLC 法, 以乙醇為溶劑提取商陸中總皂苷, 并用大孔樹(shù)脂純化。結(jié)果表明, 所得色譜圖中商陸皂苷A 的峰可以與其他峰分開(kāi)而不受干擾。而且本法提取效果較高, 能夠

17、作為提取商陸中總皂苷的方法。根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出用乙醇為溶劑浸提商陸中的總皂苷最佳工藝條件為乙醇濃度為70%, 提取次數(shù)為3次, 乙醇用量為400 mL, 浸提時(shí)間為3 h。該結(jié)果在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中得到確認(rèn)。說(shuō)明正交設(shè)計(jì)優(yōu)化的提取工藝可較好地提取商陸中皂苷類(lèi)化合物, 適用于商陸總皂苷的提取。 DO I . 10. 3870 /yydb. 2011. 05. 034 參考文獻(xiàn) 1 . 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典( 一部) M . 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 266. 2 . 趙一, 原思通, 李?lèi)?ài)媛. 炮制對(duì)商陸毒性和藥效的影響 J. 中國(guó)中藥雜志, 1991, 16( 8):

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