硫脂致敏的實驗性變態(tài)反應(yīng)性神經(jīng)炎病理和電生理特點

1、硫脂致敏的實驗性變態(tài)反應(yīng)性神經(jīng)炎病理和電生理特點摘要目的探討硫脂誘導(dǎo)的實驗性變態(tài)反應(yīng)性神經(jīng)炎病理和電生理特點。方法以硫脂免疫豚鼠，觀察其周圍神經(jīng)電生理、病理及免疫細(xì)胞化學(xué)的變化。結(jié)果被致敏動物坐骨神經(jīng)、脊神經(jīng)根發(fā)生脫髓鞘改變，神經(jīng)鞘膜IgG熒光沉積明顯，有的同時伴有髓鞘再生，病損區(qū)CD11b+細(xì)胞顯著增加而CD5+細(xì)胞增加不明顯，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)阻滯及傳導(dǎo)速度減慢。結(jié)論硫脂致敏的實驗性變態(tài)反應(yīng)性神經(jīng)炎與慢性格林-巴利綜合征更相似。關(guān)鍵詞硫脂實驗性變態(tài)反應(yīng)性神經(jīng)炎脫髓鞘豚鼠 The features of experimental allergicalneuritis immunized again

2、st sulfatideGuan Yangtai,Qin Zhen,Cao Xiaoding. Institute of Neurology,Shanghai Medical University,Shanghai 200040AbstractObjectiveTo investigate the features of experimental allergical neuritis immunized against sulfatide. MethodsGuinea-pigs were immunized with sulfatide,and their electrophysiology

3、 and pathology were compared with animals injected simple Freund,s adjuvant. ResultsDemyelination of peripheral nerves and immunoglobulin deposits at peripheral nerves myelin sheath were found in symptomatic animals only,the phenomenon of remyelination occured in a few of the animals. Inflammatory c

4、ellular infiltration was not obvious,but immunolabeling revealed the number of CDbll+ cells increased significantly in demyelinating areas. F-wave latency became prolonged with a fall in the amplitudes of the compound muscle action potential evoked by promixmal verus distal stimulation of the sciati

5、c nerves of symptomatic animals. ConclusionExperimental allergical neuritis immunized against sulfatide was similar to chronic GBS.Key wordsSulfatideExperimental allergical neuritisDemyelinationGuinea-pig誘導(dǎo)實驗性變態(tài)反應(yīng)性神經(jīng)炎(Experimental allergic neuritis,EAN)的免疫原，從最初用整個周圍神經(jīng)組織勻漿來誘導(dǎo)EAN逐步發(fā)展到用周圍神經(jīng)髓鞘、P2蛋白、P2蛋白

6、特異性細(xì)胞株、從P2蛋白中提取的肽段及人工合成肽段等。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，相當(dāng)部分的格林-巴利綜合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)患者血清和腦脊液中存在高滴度的抗硫脂抗體1。這一結(jié)果啟發(fā)我們用硫脂免疫動物，探討硫脂誘導(dǎo)實驗性變態(tài)反應(yīng)性神經(jīng)炎的可能性及其病理和電生理特點。1材料與方法1.1材料1.1.1實驗動物豚鼠30只，重250300g,雌雄各半。上海醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。1.1.2試劑硫脂標(biāo)準(zhǔn)品、福氏完全與不完全佐劑、甲基化牛血清白蛋白為Sigma公司產(chǎn)品，CD5(T淋巴細(xì)胞標(biāo)志物)及CD11b(巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物)單抗為Dako公司產(chǎn)品。其它試劑為國產(chǎn)優(yōu)級純或分

7、析純試劑。1.2方法1.2.1EAN的誘導(dǎo)取硫脂0.25mg，甲基化牛血清白蛋白1.0mg溶于1ml 0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)中，再與等量的福氏完全佐劑充分乳化多點注入豚鼠背部，每3周1次，共5次，首次后福氏完全佐劑改為不完全佐劑，共免疫20只豚鼠。對照組10只，免疫方法相同，但乳化劑中不含硫脂。1.2.2形態(tài)學(xué)研究免疫組5只豚鼠，對照組2只豚鼠在首次免疫后48周4%多聚甲醛心臟灌注處死，以觀察早期形態(tài)學(xué)變化，其它除免疫組2只不明原因死亡外均在免疫結(jié)束后2周處死并作免疫組化、免疫熒光和電生理研究。腦取材：皮層、基底節(jié)、中腦、橋腦、延髓和小腦。脊髓取材：頸、胸、腰段。周圍神

8、經(jīng)取材：脊神經(jīng)根、馬尾、坐骨神經(jīng)。標(biāo)本做HE和Fast-blue髓鞘染色、單纖維分離、免疫細(xì)胞染色及618環(huán)氧樹脂包埋超薄切片鉛鈾染色。免疫細(xì)胞化學(xué)：ABC法。IgG熒光免疫：直接法。1.2.3電生理檢查21只臨床觀察的豚鼠在處死前12d進(jìn)行電生理檢查，電極的放置根據(jù)Stoll等2報道方法進(jìn)行。1.2.4免疫染色陽性細(xì)胞的計算陽性細(xì)胞的計數(shù)用美國AMS公司產(chǎn)VIDS-型像分析儀，放大3.310倍，每個標(biāo)本計算4個不同視野下的陽性細(xì)胞數(shù)，取得的平均值作為該標(biāo)本的陽性細(xì)胞數(shù)。1.2.5統(tǒng)計學(xué)處理組間均數(shù)比較采用方差分析、秩和檢驗。2結(jié)果2.1一般形態(tài)學(xué)變化HE和Fast-blue染色及單神經(jīng)纖維剝

9、離術(shù)見動物免疫14周后，其周圍神經(jīng)有髓纖維明顯減少，髓鞘廣泛節(jié)段性脫失，嚴(yán)重者髓鞘崩裂(見1)，軸突損害及炎性細(xì)胞浸潤不明顯。透射電鏡下：施旺細(xì)胞變性，胞質(zhì)內(nèi)空化，髓鞘板層松散，嚴(yán)重者髓鞘消失與軸突融為一體(見2)，破壞的髓鞘被吞噬細(xì)胞分解、吸收。1例脊神經(jīng)根中可見淋巴細(xì)胞浸潤。有的粗神經(jīng)纖維軸突表面包繞著薄的發(fā)育尚不成熟的髓鞘(見3)。對照組電鏡下無病理變化。1髓鞘呈節(jié)段性脫失。(400)2一軸突髓鞘完全脫失。(6000)3部分神經(jīng)軸突表面包繞著薄的再生髓鞘(4000)2.2免疫熒光在癥狀明顯的動物脊神經(jīng)根、坐骨神經(jīng)的神經(jīng)鞘膜有強(qiáng)熒光沉積(見4)，對照組神經(jīng)鞘膜無熒光沉積。4致敏動物神經(jīng)鞘膜

10、有強(qiáng)熒光沉積。(400)2.3免疫細(xì)胞化學(xué)坐骨神經(jīng)、腰神經(jīng)根中CD11b+細(xì)胞均顯著增加，而CD5+細(xì)胞增加不明顯(見表1)。表1硫脂致敏豚鼠病損區(qū)CD11b+及CD5+細(xì)胞變化致敏組對照組CD11b+細(xì)胞CD5+細(xì)胞CD11b+細(xì)胞CD5+細(xì)胞坐骨神經(jīng)腰神經(jīng)根*2.4電生理檢查與對照組相比，動物免疫14周后。下肢近遠(yuǎn)段的肌肉復(fù)合動作電位(CAMP)的波幅比值顯著降低、運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNCV)明顯減慢，F(xiàn)波的潛伏期明顯延長(見表2)。表2硫脂致敏豚鼠坐骨神經(jīng)的電生理變化組別例數(shù)運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度(m/s)F-波潛伏期(ms)近遠(yuǎn)端波幅比值對照組致敏組813?*3討論硫脂是硫酸與腦苷脂的半乳糖

11、3-羥基形成的酯，是周圍神經(jīng)組織中的重要酸性鞘糖脂之一，其在周圍神經(jīng)組織中的含量是神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的100倍以上3。在一些與免疫異常有關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，鞘糖脂可能作為抗原參與其發(fā)病機(jī)制4。Stoll等2用從牛的中樞神經(jīng)組織中提取的半乳糖腦苷甙或GM1作為致敏原免疫動物曾誘導(dǎo)出典型或不典型的EAN，提示鞘糖脂可能是一種致敏原，但到目前為止尚未見用硫脂誘導(dǎo)EAN的研究報道。本研究中，從Fast-blue、HE及單神經(jīng)纖維剝離切片看，頸神經(jīng)根、腰神經(jīng)根及坐骨神經(jīng)均有不同程度的髓鞘脫失，神經(jīng)根重于坐骨神經(jīng)；光、電鏡檢查未見明顯的軸突損傷及炎性細(xì)胞浸潤，有的粗神經(jīng)纖維軸突表面包繞著薄的再生髓鞘，表明硫

12、脂致敏的EAN病理變化以神經(jīng)根為主，主要侵犯神經(jīng)髓鞘，在髓鞘破壞的過程中同時存在髓鞘再生；硫脂致敏的EAN與慢性GBS更相似。硫脂致敏EAN動物下肢近遠(yuǎn)端CAMP波幅比值顯著降低，提示存在神經(jīng)傳導(dǎo)阻滯5，加之運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯減慢，表明動物外周神經(jīng)有脫髓鞘改變，反射波F波的潛伏期延長，提示傳入神經(jīng)根有損害。這與病理發(fā)現(xiàn)基本相符。免疫熒光顯示，神經(jīng)鞘膜上有IgG沉積，提示自身抗體在EAN發(fā)病過程中可能起一定的作用。其作用機(jī)理尚不明了，但有研究發(fā)現(xiàn)6，7，它們能引起郎飛氏結(jié)旁髓鞘發(fā)生細(xì)微結(jié)構(gòu)性改變或通過干擾郎飛氏結(jié)區(qū)鈉、鉀離子通道而影響動作電位的產(chǎn)生。免疫組化示：硫脂致敏豚鼠坐骨神經(jīng)、腰神經(jīng)根中

13、CD11b+細(xì)胞均顯著增加而CD5+細(xì)胞增加不明顯，提示單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)在髓鞘的破壞過程中起重要作用。腦脊髓檢查基本正常。中樞神經(jīng)系統(tǒng)不受累可能與周圍神經(jīng)髓鞘中硫脂含量較高、被接種的動物種屬差異、接種的免疫原劑量及接種的時間等有關(guān)。本課題為國家自然科學(xué)基金資助項目(No 39470264)作者單位：管陽太秦震200040上海醫(yī)科大學(xué)神經(jīng)病學(xué)研究所曹小定神經(jīng)生物國家重點實驗室參考文獻(xiàn)1 管陽太，秦震，朱國行，等.格林-巴利綜合征患者血清和腦脊液中的抗硫脂抗體.中華神經(jīng)科雜志，1997，30：135.2 Stoll G,Schwendemann G,Heininger K,et al. Rela

14、tion of clinical,serological,morphological and electrophysiological finds in galactocerebroside induced experimental allergical neuritis. J Neuro Neurosurg Psychiatry,1986,49:258.3 Svennerholm L,Fredman P. Antibody detection in Guillain-Barre syndrome. Ann Neurol,1990,27(Suppl):36.4 Nobile-Orazio E.

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