現(xiàn)代分子生物學(xué)試的題目及問題詳解

1、實用標準文案現(xiàn)代分子生物學(xué)習(xí)題及答案一、填空題1 基因工程是70 年代發(fā)展起來的遺傳學(xué)的一個分支學(xué)科。2 基因工程的兩個基本特點是：(1)分子水平上的操作，(2 ) 細胞水平上的表達3 基因克隆中三個基本要點是：克隆基因的類型 ；受體的選擇；載體的選擇4 通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定基因區(qū)域所得到的不同大小的片段，可以構(gòu)建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點相互位置的限制性酶切圖譜 。5 限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結(jié)合的原則命名的，第一個大寫字母取自 屬名的第一個字母 ，第二、三兩個字母取自 _種名的前兩個字母 ，第四個字母則用 株名 表示。6部分酶切可采取的措施有：(1

2、)減少酶量； (2) 縮短反應(yīng)時間； (3) 增大反應(yīng)體積等 。7第一個分離的限制性內(nèi)切核酸酶是EcoK；而第一個用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是_ EcoRl 。8限制性內(nèi)切核酸酶 BsuRI 和 Hae的來源不同， 但識別的序列都是 GGCC，它們屬于 異源同工酶 。9DNA聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用 _枯草桿菌蛋白酶 切割DNA聚合酶 I 得到的分子量為 76kDa 的大片段，具有兩種酶活性：(1)5-3合成酶的活性； (2)3-5外切核酸酶的活性。10為了防止DNA 的自身環(huán)化，可用堿性磷酸酶 去雙鏈DNA_5端的磷酸基團。11 EGTA是 _Ca2+_離子螯合劑。12

3、測序酶是修飾了的T7 DNA聚合酶，它只有_ 5-3合成酶的活性，而沒有3-5外切 酶的活性。13切口移位 (nick translation)法標記 DNA的基本原理在于利用 DNA聚合酶 I 的 _5 一 3 外切核酸酶 和 5 一 3 合成酶的作用。14欲將某一具有突出單鏈末端的雙鏈DNA分子轉(zhuǎn)變成平末端的雙鏈形式，通?？刹捎胈 S1 核酸酶切割 或 DNA聚合精彩文檔實用標準文案酶補平 。15反轉(zhuǎn)錄酶除了催化 DNA的合成外，還具有 _核酸水解酶 H 的作用，可以將 DNA-RNA雜種雙鏈中的 _RNA_水解掉。16基因工程中有 3 種主要類型的載體： 質(zhì)粒 DNA，病毒 DNA，質(zhì)粒

4、和病毒 DNA雜合體 。17就克隆一個基因 (DNA 片段 ) 來說，最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個部分： _復(fù)制區(qū)： 含有復(fù)制起點； 選擇標記：主要是抗性基因； 克隆位點：便于外源DNA的插入 。另外，一個理想的質(zhì)粒載體必須具有低分子量。18一個帶有質(zhì)粒的細菌在有EB 的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，一部分細胞中已測不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫質(zhì)粒消除 ( 或治愈 )。19pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，它的復(fù)制子來源于pMBl ，它的四環(huán)素抗性基因來自于 pSCl01 ，它的氨芐青霉素抗性基因來自于pSF2124(R 質(zhì)粒 ) 。20 YAC的最大容載能力是1000kb， BAC載體的最大容載能力是30

5、0kb 。21 pSCl01 是一種嚴緊復(fù)制的質(zhì)粒。22 pUCl8 質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體。pUC 系列的載體是通過pBR322和 M13兩種質(zhì)粒改造而來。它的復(fù)制子來自pMBl， Amp抗性基因則是來自轉(zhuǎn)座子。23噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的原因：一是 它在細菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源DNA的擴增 ； 二是 對某些噬菌體 ( 如噬菌 ) 的遺傳結(jié)構(gòu)和功能研究得比較清楚，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也研究得比較詳盡。24 野生型的M13 不適合用作基因工程載體，主要原因是沒有合適的限制性內(nèi)切核酸酶識別位點和選擇標記 。25黏粒 (cosmid) 是質(zhì)粒噬菌體雜合載體

6、，它的復(fù)制子精彩文檔實用標準文案來自質(zhì)粒 、COS位點序列來自噬菌體 ，最大的克隆片段達到45kb 。26野生型的噬菌體 DNA不宜作為基因工程載體，原因是： (1)分子量大， (2) 酶的多切點， (3) 無選擇標記27噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是復(fù)制區(qū) ，而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是IG區(qū)。28噬菌體載體由于受到包裝的限制，插入外源DNA片段后，總的長度應(yīng)在噬菌體基因組的75 105的范圍內(nèi)。29 在分離 DNA時要使用金屬離子螯合劑，如 EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是2+螯合 Mg 離子，抑制核酸酶的活性。30用乙醇沉淀DNA時，通常要在DNA溶液中加人單

7、價的陽離子，如NaCl 和 NaAc，其目的是中和 DNA分子的負電荷，增加DNA分子間的凝聚力 。31 引物在基因工程中至少有4 個方面的用途：(1) 合成探針； (2) 合成 cDNA； (3) 用于 PCR反應(yīng)； (4) 進行序列分析32 Clark發(fā)現(xiàn)用 Taq DNA 聚合酶得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物不是平末端，而是有一個突出堿基末端的雙鏈 DNA分子。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)設(shè)計了克隆PCR產(chǎn)物的 T載體 。33在 cDNA的合成中要用到 S1 核酸酶，其作用是切除在 第二鏈合成時形成的發(fā)夾環(huán)34乙醇沉淀DNA的原理是 乙醇使 DNA分子脫水 。35 假定克隆一個編碼某種蛋白質(zhì)的基因，必須考慮其表達

8、的三個基本條件：(1) 保持正確的可讀框 (2) 能夠使其轉(zhuǎn)錄的啟動子 (3) 具有翻譯的起始和終止信號36 受體細胞的感受態(tài)是 接受外源 DNA的生理狀態(tài) _。37 DNA 重組連接的方法大致分為四種： (1) 黏性末端連接；(2) 平末端連接； (3) 同聚物接尾連接； (4) 接頭連接法 。精彩文檔實用標準文案38 將含有外源基因組一個酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個基因組 DNA 克隆 _，各種此類質(zhì)粒的集合體稱之為構(gòu)建了一個 基因組 DNA文庫 。39將含有一個mRNA的 DNA拷貝的克隆稱作一個_cDNA克隆 ，源于同一批RNA制備物的克隆群則構(gòu)建了一個_ cDNA文庫 _。40只要知

9、道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用_聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)可以將這段DNA進行百萬倍的擴增。41人工感受態(tài)的大腸桿菌細胞在溫度為0 C 時吸附DNA,42 C _時攝人 DNA。42目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構(gòu)思巧妙、具有極高準確性的篩選方法。大致可以分為 ：(1) 遺傳學(xué)方法； (2) 物理篩選法； (3) 核酸雜交法； (4) 表達產(chǎn)物分析法 等。43PCR擴增篩選重組體是比較簡便的篩選方法， 它適合于 _ 插入外源片段的種類較多，大小又極為相似的重組體的篩選。44 核酸雜交探針可分為兩大類：DNA 探針和 RNA探針。其中 DNA探針又分為 _基因組 DNA探針和

10、cDNA 探針。45如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈 DNA產(chǎn)生 5突出的黏性末端，則可以用 _ Klenow 酶填補的方法 _進行 3末端標記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割 DNA產(chǎn)生的是 3突出的黏性末端，可以用 _ T4DNA聚合酶 進行 3末端標記。46單鏈 DNA探針的標記可以采用下列方法： (1) 用 M13 噬菌體載體合成單鏈 DNA探針； (2) 從 mRNA反轉(zhuǎn)錄合成單鏈 cDNA探針；(3) 用不對稱 PCR合成單鏈 DNA探針。47根據(jù) Northern 雜交的結(jié)果可以說明： 外源基因是否進行了轉(zhuǎn)錄 _。48差示雜交 (differential hybridization)技

11、術(shù)需要 _兩種不同的細胞群體能夠表達不同的基因，即在一個群體中能夠表達一些基因，而在另一個細胞群體中不能表達這些基因 。49 RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜 ( 尼龍膜 )精彩文檔實用標準文案上，同一放射 DNA探針雜交的技術(shù)稱 _ Northern 印跡 _。50在 _ Southern 印跡 _技術(shù)中， DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜( 或尼龍膜 ) 上，然后與放射性的DNA探針雜交。51可用 T4 DNA 聚合酶進行平末端的DNA標記，因為這種酶具有 _53合成酶 _和 _35外切核酸酶 _的活性。52根據(jù)外源片段提供的遺傳表型

12、篩選重組體，必需考慮三種因素 ：(1) 克隆的是完整的基因；(2) 使用的是表達載體；(3) 不含內(nèi)含子 。53 Northern印跡和 Southern 印跡有兩點根本的區(qū)別：(1) 印跡的對象不同： Northern 是 RNA，Southern 是 DNA；(2) 電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條件。54放射免疫篩選的原理基于以下三點： (1) 抗體能夠被吸附到固體支持物上； (2) 同一個抗原可以同幾種抗體結(jié)合； (3) 抗體能夠被標記二、選擇題 ( 單選或多選 )1 因研究重組DNA技術(shù)而獲得諾貝爾獎的科學(xué)家是()(a)A Kornberg(b)W Gilbert(c)P

13、 Berg(d)B McClintock2第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是 ()(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有 ( ) 不太恰當(dāng)。(a) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構(gòu)成(b) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是類限制性內(nèi)切核酸酶(c) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對 DNA 進行修飾(d) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制 - 修飾系統(tǒng)4型限制性內(nèi)切核酸酶： ( )(a) 有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識別回文序列(b) 僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶精彩文檔實用標準文案提供(c) 限

14、制性識別非甲基化的核苷酸序列 (d) 有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供5下面有關(guān)限制酶的敘述哪些是正確的?( )(a) 限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶(b) 限制酶在特異序列 ( 識別位點 ) 對 DNA進行切割(c) 同一種限制酶切割 DNA 時留下的末端序列總是相同的(d) 一些限制酶在識別位點內(nèi)稍有不同的點切割雙鏈DNA，產(chǎn)生黏末端(e) 一些限制酶在識別位點內(nèi)相同的位置切割雙鏈 DNA，產(chǎn)生平末端6第一個被分離的類酶是：( )(a)EcoK(b)Hind(c)Hind (d)EcoB7在下列進行DNA 部分酶切的條件中，控制那一項最好?()

15、(a)反應(yīng)時間(b)酶量(c)反應(yīng)體積(d)酶反應(yīng)的溫度8在下列試劑中，那一種可以螯合Ca2+離子 ?()(a)EDTA(b)檸檬酸鈉(c)SDS(d)EGTA9在下列工具酶中，那一種可以被EGTA抑制活性 ?()(a)S1單鏈核酸酶(b)末端轉(zhuǎn)移酶(c)堿性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶10限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地識別：()(a)雙鏈 DNA的特定堿基對(b)雙鏈 DNA的特定堿基序列(c)特定的三聯(lián)密碼(d)以上都正確11下列關(guān)于限制性內(nèi)切核酸酶的表示方法中，正確一項的是() 。(a)Sau3A I (b)E coRI (c)hind III (d)Sau 3A112限制性內(nèi)切核酸酶的

16、星號活性是指：()精彩文檔實用標準文案(a) 在非常規(guī)條件下，識別和切割序列發(fā)生變化的活性。(b) 活性大大提高(c)切割速度大大加快(d)識別序列與原來的完全不同13下面哪一種不是產(chǎn)生星號活性的主要原因?()(a)甘油含量過高(b)反應(yīng)體系中含有有機溶劑(c)含有非Mg2+的二價陽離子(d)酶切反應(yīng)時酶濃度過低14關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有()不太恰當(dāng)(a) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構(gòu)成(b) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是類限制性內(nèi)切核酸酶(c) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對 DNA 進行修飾(d) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制 - 修飾系統(tǒng)15在長模板鏈

17、的指導(dǎo)下引物延伸合成長的 DNA互補鏈時應(yīng)選用( )(a)T4DNA聚合酶(b)Klenow酶(c) 大腸桿菌 DNA聚合酶 I (d)T7DNA 聚合酶16末端轉(zhuǎn)移酶是合成酶類， ( )(a) 作用時不需要模板(b) 在 Ca2+的存在下，可以在突出的 3，末端延長 DNA鏈(c) 在 Ca2+的存在下，可以在隱蔽的 3，末端延長 DNA鏈(d) 上述說法有兩種是正確的17在基因工程中，可用堿性磷酸酶()(a)防止 DNA的自身環(huán)化(b)同多核苷酸激酶一起進行 DNA的 5，末端標記(c) 制備突出的 3，末端 (d) 上述說法都正確18下列酶中，除 ( ) 外都具有磷酸酶的活性(a)核酸外

18、切酶(b)外切酶(c)單核苷酸激酶(d)堿性磷酸酶19下列哪一種酶作用時需要引物? ()(a)限 制 酶(b) 末 端 轉(zhuǎn) 移 酶(c) 反 轉(zhuǎn) 錄 酶精彩文檔實用標準文案(d)DNA 連接酶20 S1 核酸酶的功能是()(a) 切割雙鏈的 DNA (b) 切割單鏈的 RNA (c) 切割發(fā)夾環(huán) (d) 以上有兩項是正確的21Klenow 酶與 DNA聚合酶相比， 前者喪失了 ()的活性。(a)5，-3 ，合成酶，(b)3，-5 ，外切酶(c)5，-3 ，外切酶(d)轉(zhuǎn)移酶22下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒(relaxed plasmid)性質(zhì)的描述中， ()是不正確的(a) 質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)

19、的控制，而不受染色體復(fù)制機制的制約，因而有較多的拷貝數(shù)(b) 可以在氯霉素作用下進行擴增 (c) 通常帶有抗藥性標記(d) 同嚴緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子23 基因工程中所用的質(zhì)粒載體大多是改造過的，真正的天然質(zhì)粒載體很少，在下列載體中只有 ( )被視為用作基因工程載體的天然質(zhì)粒載體(a)pBR322(b)pSCl01(c)pUBll0(d)pUCl824下列哪種克隆載體對外源DNA的容載量最大 ?()(a)質(zhì) 粒(b) 黏 粒(c) 酵 母 人 工 染 色 體 (YAC)(d) 噬菌體 (e) cDNA 表達載體25. 松弛型質(zhì)粒： ( )(a) 在寄主細胞中拷貝數(shù)較

20、多(b) 可用氯霉素擴增(c)一般沒有選擇標記(d)上述 (a) 、(b) 兩項正確26Col El 是惟一用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，這種質(zhì)粒：()(a)是松弛復(fù)制型（b) 具有，四環(huán)素抗性(c)能被氯霉素擴增(d)能產(chǎn)生腸桿菌素精彩文檔實用標準文案27同一種質(zhì)粒 DNA，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是： ( )(a)OCDNASCDNALDNA (b)SCDNALDNAOCDNA (c)LDNAOCDNASCDNA (d)SCDNAOCDNALDNA28pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，含有兩個抗性基因，其中四環(huán)素抗性基因來自： ( )(a)ColEl (b)Ri質(zhì)粒(c)p

21、SCl01 (d)pUCl829關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確?()(a) 在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機制(b) 在不同的宿主細胞中使用不同的復(fù)制起點(c) 在不同的宿主細胞中使用不同的復(fù)制酶(d) 在不同的宿主細胞中具有不同的復(fù)制速率30能夠用來克隆32kb 以下大小的外源片段的質(zhì)粒載體是()(a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid31第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是 ()(a)pBR322 (b)ColEl(c)pSCl01 (d)pUCl832. Ti質(zhì)粒： ()(a)可從農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)到植物細胞中(b)作為雙鏈 DNA被轉(zhuǎn)移(c)在植

22、物中導(dǎo)致腫瘤(d)介導(dǎo)冠癭堿的合成，作為細菌的營養(yǎng)物和植物的生長激素(e)需要細菌的vir基因幫助轉(zhuǎn)移(f)在植物細胞中作為染色體外質(zhì)粒33黏粒 (cosmid) 是一種人工建造的載體，()(a)它具有 COS位點，因而可進行體外包裝(b)它具有質(zhì)粒DNA的復(fù)制特性(c)進入受體細胞后，可引起裂解反應(yīng)(d)進入受體細胞后，可引起溶源化反應(yīng)34有兩種確定核酸中核苷酸序列的方法：化學(xué)序列分析法 (Maxam-Glbert) 和酶學(xué)序列分析法 (Sanger) 。酶學(xué)測序法的基本原理優(yōu)點是： ( )(a) 堿基與特殊染料間不同的相互作用精彩文檔實用標準文案(b) 一個合成引物的延伸和 DNA修復(fù)合成

23、的可靠終止(c) 限制性位點與 DNA末端標記的相關(guān)性(d) 可同時對 DNA雙螺旋的兩條鏈進行測序(e) 反應(yīng)是 DNA特異的， RNA不會帶來干擾。這樣既減少純化步驟，也節(jié)約了開支。35關(guān)于 cDNA的最正確的說法是：()(a)同 mRNA互補的單鏈DNA(b)同 mRNA互補的雙鏈 DNA(c)以 mRNA為模板合成的雙鏈DNA(d)以上都正確36用堿法分離質(zhì)粒 DNA時，染色體 DNA之所以可以被除去，是因為： ( )(a) 染色體 DNA斷成了碎片 (b) 染色體 DNA分子量大，而不能釋放(c) 染色體變性后來不及復(fù)性 (d) 染色體未同蛋白質(zhì)分開而沉淀37. 關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒

24、DNA，下面哪一種說法不正確?( )(a)溶液 I 的作用是懸浮菌體(b)溶液的作用是使 DNA變性(c) 溶液的作用是使 DNA復(fù)性(d) 質(zhì)粒 DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復(fù)性38. Clark 做了一個有趣的實驗，發(fā)現(xiàn) TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在雙鏈 DNA的末端加一個堿基，主要是加 ( ) (a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP39根據(jù)構(gòu)建方法的不同，基因文庫分為基因組文庫、 cDNA 文庫等。在下列文庫中，( )屬 cDNA文庫(a) YAC文庫(b) MAC文庫(c)扣減文庫(d) BAC文庫40下面關(guān)于多克隆位點(multiple

25、 clone site,MCS)的精彩文檔實用標準文案描述，不正確的句是 ( )(a)僅位于質(zhì)粒載體中(b)具有多種酶的識別序列(c)不同酶的識別序列可以有重疊(d)一般是人工合成后添加到載體中41在 cDNA技術(shù)中，所形成的發(fā)夾環(huán)可用()(a)限制性內(nèi)切核酸酶切除(b)用 31外切核酸酶切除(c)用 S1 核酸酶切除(d)用 51外切核酸酶切除42在 DNA的酶切反應(yīng)系統(tǒng)中，通常：()(a)用 SSC緩沖液 (b)2+加入 Mg作輔助因子(c) 加入 BSA等保護劑 (d) 上述說法中，有兩項是正確的43 黏性末端連接法，不僅操作方便，而且( )(a)產(chǎn)生新切點(b)易于回收外源片段(c)載

26、體不易環(huán)化(d)影響外源基因的表達44在下列表型中， ()是基因工程上理想的受體菌表型(a)r+ +*(b)r- -(C)r- -+mrecmrecmrec+ +-(d)r mrec45關(guān)于 DNA接頭在基因工程中的作用，下列說法中哪一項不正確 ?( )(a) 給外源 DNA添加適當(dāng)?shù)那悬c(b) 人工構(gòu)建載體(c)調(diào)整外源基因的可讀框(d)增加調(diào)控元件46 cDNA文庫包括該種生物的()(a)某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因(b)所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因(c)所有結(jié)構(gòu)基因(d)內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)47 下列關(guān)于建立cDNA 文庫的敘述中，哪一項是錯誤的?( )(a) 從特定組織或細胞中提取 DNA或 RNA(b)

27、用反轉(zhuǎn)錄酶合成 mRNA的對應(yīng)單鏈 DNA(c) 以新合成的單鏈 DNA為模板合成雙鏈 DNA(d) 新合成的雙鏈 DNA甲基化48下列對黏性末端連接法的評價中，哪一項是不正確的?精彩文檔實用標準文案()(a)操作方便(b)易于回收片段(c)易于定向重組(d)載體易于自身環(huán)化，降低重組率49 關(guān)于感受態(tài)細胞性質(zhì)的描述，下面哪一種說法不正確?()(功具有可誘導(dǎo)性(b)具有可轉(zhuǎn)移性(c)細菌生長的任何時期都可以出現(xiàn)(d)不同細菌出現(xiàn)感受態(tài)的比例是不同的50下面關(guān)于用T4 多核苷酸激酶標記5端制備探針的描述中 ()是不正確的。(a)既能標記DNA，又能標記RNA(b)既能標記雙鏈 DNA又能標記單鏈

28、DNA(c) 只能標記突出的 5 端不能標記其他類型末端(d)DNA或 RNA必須有 5-OH 的存在51 Southem 印跡的 DNA探針 ()雜交。(a)只與完全相同的片段(b)可與任何含有相同序列的DNA片段(c)可與任何含有互補序列的DNA片段(d)可與用某些限制性內(nèi)切核酸酶切成的DNA 片段(e) 以上都是52 用下列方法進行重組體的篩選，只有()說明外源基因進行了表達。(a)Southem印跡雜交(b)Northem印跡雜交(c)Western印跡(d)原位菌落雜交53下列哪一個不是Southern 印跡法的步驟 ?()(a) 用限制酶消化 DNA (a)DNA 與載體的連接(c

29、) 用凝膠電泳分離 DNA片段 (d)DNA 片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上(e) 用一個標記的探針與膜雜交54 報告基因 ( )(a) 以其易于分析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列精彩文檔實用標準文案(b) 以其易于分析的啟動子區(qū)代替感興趣基因的啟動子區(qū)(c) 能用于檢測啟動子的活性 (d) 能用于確定啟動子何時何處有活性55 在利用 lacZ 失活的顯色反應(yīng)篩選法中， IPTG 的作用是 ( )(a) 誘導(dǎo)宿主的肽的合成 (b) 誘導(dǎo)宿主的肽的合成(c) 作為酶的作用底物 (d) 作為顯色反應(yīng)的指示劑56. 切口移位是指在 ( ) 作用下，使 ( ) 帶上放射性標記。(a)DNA聚合酶 I ，

30、 RNA(b)DNA聚合酶 I ， DNA(c)DNA聚合酶， RNA(d)DNA聚合酶， DNA57用于核酸分子雜交的探針可以是放射性標記的()(a)DNA (b)RNA (c)抗體(d)抗原58Southern 印跡是用 DNA探針檢測DNA片段，而 Northern印跡則是： ()(a)用 RNA探針檢測DNA片段(b)用 RNA探針檢測 RNA片段(c)用 DNA探針檢測RNA片段(d)用 DNA探針檢測蛋白質(zhì)片段59用免疫化學(xué)法篩選重組體的原理是()(a)根據(jù)外源基因的表達(b)根據(jù)載體基因的表達(c) 根據(jù) mRNA同 DNA的雜交 (d) 根據(jù) DNA同 DNA的雜交60 隨機引

31、物標記探針，下列各項中哪一項是不正確的?( )(a)雙鏈 DNA、單鏈 DNA、RNA都是可以標記的(b)不需要用Dnase I 預(yù)處理(c)反應(yīng)時可用Klenow 酶(d)反應(yīng)時可用DNA聚合酶 1精彩文檔實用標準文案61 在切口移位標記DNA探針時只能使用()(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶 I(c)DNA聚合酶(d)DNA聚合酶62 要對一雙鏈的DNA分子進行31 末端標記， 可用 ()(a)Klenow酶(b)DNA聚 合 酶I(c)T4DNA 聚合酶(d)T7DNA聚合酶答案1c；2c； 3 b； 4 b5b，C，d，e； 6 c； 7 b； 8 d；9d； 10 B； 11

32、d；12 a； 13 d； 14 b 15 d； 16 c；17a，b；18a；19c；20d；21c；22 C；23b； 24 C；25d；26a，C，d；27b；28c； 29 b；30a；31c； 32 a,c,d,e，33 a， b，c； 34 b； 35 c； 36 c； 37 d； 38 b； 39 c； 40 a； 41 c； 42 a，b，c； 43 b； 44 b； 45 d； 46 a；47 a； 48 c； 49 c；50b；51c； 52 c；53 b； 54 a,c,d ； 55a； 56 b； 57 a， b； 58 c； 59a；60d； 61 b； 62 c；三

33、、簡答題1說明 Sanger DNA 測序法的原理。Sanger DNA 測序法是建立在兩個基本原理之上：(1) 核酸是依賴于模板在聚合酶的作用下由5 端向 3 端聚合 (DNA聚合酶參與了細菌修復(fù)DNA合成過程 ) ； (2) 可延伸的引物必須能提供游離的3 羥基末端，雙脫氧核苷酸由于缺少游離的3 羥基末端，因此會終止聚合反應(yīng)的進行。如果分別用4 種雙脫氧核苷酸終止反應(yīng)，則會獲得 4 組長度不同的 DNA片段。通過比較所有 DNA片段的長度可以得知核苷酸的序列。2某學(xué)生在用EcoRI 切割外源DNA片段時，出現(xiàn)了星號活性，請分析可能的原因?鹽離子濃度不對，溫度不對，甘油濃度過高。3在序列 5

34、-CGAACATATGGAGT-3中含有一個6bp 的類限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列，該位點的序列可能是什么?回文序列是：5-CATATG-3 ，4下面幾種序列中你認為哪一個( 哪些 ) 最有可能是類酶的識別序列：GAATCG， AAATTT， GATATC， ACGGCA? 為什么 ?GATATC； AAATTT，因為它們是回文序列。5當(dāng)兩種限制性內(nèi)切核酸酶的作用條件不同時，若要進行雙酶切，應(yīng)采取什么措施?為什么 ?注意星活性，先低鹽，后高鹽；先低溫酶，后高溫酶；并且可以直接在換酶前將第一種酶失活，再加第二種酶，否則，易產(chǎn)生星活性。或使用通用緩沖液。6為什么反轉(zhuǎn)錄酶在聚合反應(yīng)中會出錯?由于反轉(zhuǎn)

35、錄酶缺少在E coli DNA聚合酶中起校正作用的3-5外切核酸酶活性，所以聚合反應(yīng)往往會出錯，在高濃度的dNTP和 Mg2+下，每 500 個堿基中可能有一個錯配。7什么是測序酶(sequenaseTM)?所謂測序酶即是修飾了的T7 DNA聚合酶，是采用缺失的方法，從外切核酸酶結(jié)構(gòu)域中除去 28 個氨基酸，這樣使T7 DNA 聚合酶完全失去了3-5的外切核酸酶活性，只有5-3聚合酶的活性，而且聚合能力提高了3 9 倍，測序時常用此酶。8什么是 S1 核酸酶作圖 (S1 nuclease mapping)?S1 核酸酶作圖是一種對RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的末端和剪接位點進行作圖的方法9YAC載體具有什么

36、樣的功能性DNA序列 ?為什么在克隆大片段時，YAC具有優(yōu)越性 ?精彩文檔實用標準文案YAC帶有天然染色體所有的功能元件，包括一個著絲粒，一個DNA復(fù)制起點，兩個端粒。YAC能夠容納長達幾百kb 的外源 DNA，這是質(zhì)粒和黏粒辦不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色體步移中每次允許更大的步移距離，同時能夠減少完整基因組文庫所需的克隆數(shù)目。10 列舉質(zhì)粒載體必須具備的4 個基本特性。(1) 獨立復(fù)制； (2) 有選擇標記； (3) 有獨特的酶切位點； (4) 能轉(zhuǎn)化但不擴散。11 什么叫穿梭載體？含有細菌質(zhì)粒和克隆的真核生物DNA片段的雜種質(zhì)粒，有兩個復(fù)制起點和既能在細菌又能在真核細

37、胞中進行選擇的選擇標記，所以，很容易從一宿主轉(zhuǎn)到另一個宿主( 來回穿梭 ) 。12如何將野生型的噬菌體改造成為一個理想的載體?(1) 削減分子量 ( 除去非必需區(qū)和整合區(qū) ) ； (2) 削減酶切位點； (3) 添加選擇標記；(4) 引入終止突變13 PCR 的基本原理是什么?用 PCR擴增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣的信息?(1)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外進行DNA的變性、復(fù)性和引物延伸。(2)至少要預(yù)先知道足夠合成一對引物的靶DNA序列。14 cDNA 克隆與基因組克隆有何不同?基因組克隆包含所有不在cDNA中出現(xiàn)的內(nèi)含子。15怎樣將一個平末端DNA片段插入到EcoR I 限制位點中去

38、?化學(xué)合成一些長為10bp 含有 EcoRI 識別位點的短的DNA片段，然后與待克隆片段兩端連接起來， 如果用 EcoRI 切割這種連接片段，就會產(chǎn)生EcoRI 的單鏈末端。 這種片段就可以插入到任何 EcoRI 的限制性內(nèi)切酶位點中16簡述以黏粒為載體構(gòu)建基因文庫的原理。(1)COS位點可以自身環(huán)化；(2)可以利用COS位點包裝噬菌體顆粒；(3)可以感染寄主細胞；(4)利用質(zhì)粒復(fù)制子復(fù)制，不整合、不裂解。17酵母人工染色體要在酵母細胞中穩(wěn)定存在，必須有哪些基本的結(jié)構(gòu)?(1) 著絲粒； (2) 端粒； (3)ARS 序列。18 何謂 YAC? 主要特性是什么 ?(1) 含有來自其他生物 DNA

39、的酵母人工染色體，叫 YAC；(2) 主要特性是可以克隆較大的外源片段。19 Muller 的 PCR反應(yīng)同大腸桿菌體內(nèi)的 DNA復(fù)制有哪些不同 ?你認為根本的差別在哪里 ?PCR 用雙引物，體內(nèi)復(fù)制用單引物。20欲將一真核生物的結(jié)構(gòu)基因克隆后轉(zhuǎn)移到原核生物( 如 Ecoli)中進行表達，克隆時應(yīng)注意哪些問題?應(yīng)注意的問題有：啟動子、密碼子、剪接、分泌。21假定你分離到一個E coli的 Thy- 突變體，并推測有可能是ThyA 基因突變。請設(shè)計一個方案用PCR從染色體DNA擴增突變的ThyA 基因，測定突變的序列。( 注： Ecoli野生型的ThyA 基因的序列是已知的)為了擴增突變體的th

40、yA 基因，先設(shè)計一對引物， 其中一個引物的序列與thyA 基因的 5端相同，另一個引物同該基因的3端互補。在引物的5端加上合適類限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列， 以便于后來的克隆。 將染色體 DNA同引物混合后， 進行 PCR擴增。 然后進行瓊脂糖凝膠電泳，純化擴增片段，可以直接測序或克隆到合適的載體再測序。22 你在做 Southern 印跡分析，并且剛完成了凝膠電泳這一步。根據(jù)方案，下面一步驟是用 NaOH溶液浸泡凝膠，使 DNA變性為單鏈。為了節(jié)省時間，你略過了這一步，直接將 DNA從凝膠轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上。然后用標記探針雜交，最后發(fā)現(xiàn)放射自顯影片是空白。錯在哪里?如果你的雜交探針是雙鏈的

41、，可能因為在加人雜交混合物之前忘記將探針變性而得到空白的放射自顯影結(jié)果。23切口移位 (nick translation)標記探針的主要步驟有哪些?(1)DNaseI造成切口；精彩文檔實用標準文案(2)DNA 聚合酶 III 的 53外切核酸酶進行切割；(3)DNA 聚合酶的 5 3合成酶進行修補；(4) 在修補過程中，隨著切口(nick) 的移動，將放射性的底物摻人到雙鏈DNA中。24用 EcoRI 和 Hind 分別切割同一來源的染色體DNA，并進行克隆，在前者的克隆中篩選到 A 基因，但在后者的克隆中未篩選到A 基因，請說明原因。原因是： Hind 的切點在 A 基因內(nèi)。25什么是 We

42、stern 印跡 ?它與 Southern 印跡有什么不同 ?Western 印跡是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后用特異性的抗體進行檢測。它與 Southern的不同在于探針的性質(zhì)不同，在Western印跡中使用的探針是抗體 (蛋白質(zhì) )。Lac+ Tet +的質(zhì)粒載體，已知該酶識別的是26用一限制性內(nèi)切核酸酶切割4 個堿基序列，并產(chǎn)生有兩個堿基突出的單鏈末端，該酶在lac 基因內(nèi)有切割位點，并在第二個氨基酸密碼子內(nèi)，該位點可以被任何氨基酸所取代而不影響酶活性。用該酶切割后，用DNA聚合酶將單鏈末端補齊為雙鏈的平末端，然后重新連接成環(huán)，轉(zhuǎn)化Lac-Tet s受體菌，篩選

43、Tet r 轉(zhuǎn)化子，問： Lac 的基因型是什么 ?并說明原因?；蛐褪?lac - 原因是在該密碼子中插入了兩個堿基，造成了移碼突變，所以Lac 的基因是缺陷的。27在基因工程中，為了在細菌細胞中表達真核生物的基因產(chǎn)物，為什么通常要用cDNA而不用基因組 DNA?為什么要在 cDNA前加上細菌的啟動子 ?這是因為細菌沒有內(nèi)含子剪接系統(tǒng)，并且不能識別真核生物的啟動子之故。四、問答題：1說明限制性內(nèi)切核酸酶的命名原則要點。2什么是限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性? 受哪些因素影向 ?3影響 DNA連接酶催化連接反應(yīng)的因素有哪些?4什么是 Klenow 酶 ?有哪些活性 ?在基因工程中有什么作用 ?5細

44、菌堿性磷酸酯酶和小牛腸堿性磷酸酯酶有什么不同 ?在基因工程中有什么用途 ?6外切核酸酶 (1ambda exonuclease) 基本活性是什么 ?在基因工程中有什么應(yīng)用 ?7 Mn2+、 Mg2+對 Dnase I(deoxyribonuclease ?)的活性有什么影響 ?Dnase I 在基因工程中有什么作用?8質(zhì)粒如何維持在細胞中的穩(wěn)定？9由于基因工程是人為改變遺傳信息的操作，因此必須注意被操作基因的安全，進行嚴格的監(jiān)控，質(zhì)粒載體的安全性是十分重要的。請問質(zhì)粒載體的安全條件包括哪幾個方面 ?10為什么野生型的噬菌體 DNA不宜作為基因工程載體?精彩文檔實用標準文案11 什么是藍白斑篩選

45、法?12 藍白斑篩選法為什么也會有假陽性?13 M13 系列載體具有哪些優(yōu)缺點?14黏粒載體具有哪些特點與不足?15輔助噬菌體DNA和相應(yīng)的噬菌粒是如何協(xié)同工作的?16 如果知道某一基因的功能及其相應(yīng)的蛋白質(zhì)的氨基酸序列組成，可以通過何種方法克隆該基因 ?17 什么是基因文庫?18 什么是基因組文庫(genomic library)?構(gòu)建基因組文庫，涉及哪些基本過程?它同遺傳學(xué)上的基因庫有什么不同?19 什么是cDNA 文庫 (complementDNAlibrary)?同基因組文庫有何差別 ?20 黏性末端連接法是最常用的連接方法，具有許多優(yōu)點，但是也有一些不足，請指出這些不足之處。21什么

46、是同聚物加尾連接法 (homopolymer tails joining)? 用何種方法加尾 ?具有哪些優(yōu)缺點 ?22何謂接頭連接法(1inker ligation)?23什么是同裂酶?為什么說用同裂酶進行體外重組效率最高 ?24為了大量獲得許多用于生化鑒定的產(chǎn)物，你想將擬南芥中的一個序列已知、編碼單體酶蛋白的基因在單細胞微生物中表達，你如何確保最終能得到產(chǎn)物 ?25某一質(zhì)粒載體具有 Tet r 和 Kanr 的表型， 在 Kan 抗性基因內(nèi)有一 Bgl I 的切點?，F(xiàn)用BglI 切割該載體進行基因克隆，問：(1) 轉(zhuǎn)化后涂皿時應(yīng)加什么樣的抗生素?(2) 培養(yǎng)后長出的菌落具有什么樣的抗性基因型

47、?(3) 如何利用抗性變化篩選到含有插入片精彩文檔實用標準文案段的重組體 ?26 以 pBR322 DNA作為載體，從四環(huán)素抗性基因區(qū)克隆外源 DNA時，可采用環(huán)絲氨酸富集法篩選重組體，說明其基本原理和基本操作過程。27 放射性抗體檢測法(radioactive antibody test)的基本原理是什么 ?28 什么是隨機引物(random primer)?如何標記 DNA?29什么是印跡 (blotting)雜交 ?30什么是原位菌落雜交(colony hybridization)?31說明 Southern 雜交的原理和方法。32 Northern印跡與 Southern 印跡有什么不同?33建立了一個基因文庫后，如何鑒定一個攜帶目的基因的克隆 ?答案：1答：限制性內(nèi)切核酸酶采用三字母的命名原則，即屬名+種名 +株名的各一個首字母，再加上序號?；驹瓌t： 3-4個字母組成，方式是：屬名 +種名 +株名 +序號； 首字母：取屬名的第一個字母，且斜體大寫；第二字母：取種名的第一個字母，斜體小寫；第三字母：(1)取種名的第二