真菌mRNA提取試劑盒-一站式

1、真菌mRNA提取試劑盒-一站式One-Stop Fungal mRNAout貨號(hào)：M090093產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品專門用于從常見的各種真菌中快速提取總RNA，然后再用（dT）纖維素分離其中的mRNA，提取過的真菌包括Candida albican，Saccharomyces cerevisiae，Schizosaccharomyces pombe和Pichia pastoris、Aspergillus flavus等。本產(chǎn)品的特點(diǎn)是：1. 一站式操作，本試劑盒足夠50次微量真菌總RNA提取，25次微量mRNA提取。2. 得到的mRNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、microarr

2、ay hybridization、cDNA合成等。3. 操作比柱式法mRNA純化法更簡(jiǎn)單，不需要過柱，免去很多繁瑣步驟。4. 整個(gè)過程只需要約60分鐘。規(guī)格及成分 成 份25次包裝真菌RNAout, 50次溶液A20 mL溶液B25 mL溶液C 50 mL使用手冊(cè)1份mRNAout結(jié)合液100 mLOligo(dT)纖維素25 mg無RNase水10 mL使用手冊(cè)1份微量核酸沉淀劑微量核酸沉淀劑10 mL使用手冊(cè)1份運(yùn)輸及保存常溫運(yùn)輸， Oligo(dT)纖維素最好-20保存，RNA洗液4保存，其余產(chǎn)品可以室溫放置。本產(chǎn)品有效期一年。使用方法一：用真菌RNAout提取總RNA1. 將50 mg

3、左右的干菌絲(或100 mg 左右的鮮菌絲、或適當(dāng)數(shù)量的真菌菌落)轉(zhuǎn)移到1.5 mL塑料離心管中。如果是液體真菌培養(yǎng)物，則直接將1-10 mL液體真菌在1.5 mL塑料離心管中12000-15000 g離心 1分鐘，并棄盡液體培養(yǎng)基（可以分多次離心）。2. 加入0.4 mL溶液A并充分吹打混勻。如果A溶液存放時(shí)產(chǎn)生沉淀，請(qǐng)置于65融化，用前充分搖晃均勻。3. 加入0.4 mL溶液B，劇烈振蕩30秒。4. 65保溫5分鐘。5. 室溫12000-15000 g離心3-5分鐘，轉(zhuǎn)移上清到一干凈的1.5 mL塑料離心管中.6. 再加入0.1 mL溶液B和0.1 mL自備氯仿，振蕩混勻30秒。7. 室溫

4、12000-15000 g離心3-5分鐘，轉(zhuǎn)移上清到一干凈的1.5 mL塑料離心管中。8. 加入兩倍體積（約）的溶液C，充分混勻。9. 室溫12000-15000 g離心離心3-10分鐘，RNA將在管底形成沉淀，小心棄上清。10. 加自備的75%乙醇，振蕩器上振蕩混均30秒。11. 室溫12000-15000 g離心1分鐘。12. 小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。13. 重復(fù)75%乙醇洗滌步驟一次。14. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留液（約50 uL）。15. 短暫放1-2分鐘后加入50 uL RNA-free水使RNA沉淀溶解，可以立即用于mRNA純化或存放于-80長(zhǎng)期保存。二

5、：從真菌總RNA中提取真菌mRNA 本產(chǎn)品提供本產(chǎn)品提供25 mg Oligo(dT)纖維素，每克Oligo(dT)纖維素能夠結(jié)合50-80 OD的mRNA。1. 在一個(gè)1.5 mL塑料離心管中稱取1 mg Oligo (dT)纖維素。將0.5 mL結(jié)合液加入到一管裝有1 mg Oligo (dT)纖維素的離心管中，混勻后室溫放置5分鐘。也可以將250 uL 結(jié)合液加入到裝有25 mg Oligo(dT)纖維素的離心管中，每次取10 uL（相當(dāng)于1 mg Oligo (dT)纖維素）與0.5 mL結(jié)合液混勻，室溫放置5分鐘。剩余部分放-80保存。2. 200-2000 g離心30秒，小心吸棄上

6、清后留Oligo (dT)纖維素沉淀待用。3. 將在第一節(jié)中提取的兩管相同的總RNA（每個(gè)樣品用50 uL）混合在一起得到總RNA 100 uL，65加熱 5分鐘。也可以只用一管總RNA，但需要補(bǔ)水到100 uL，再65加熱 5分鐘。4. 加入等體積的結(jié)合液，混勻后冷卻到室溫后，全部轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中，5. 混勻后室溫放置5分鐘，期間顛倒混勻數(shù)次。6. 4 200-2000g 離心5分鐘，小心將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)離心管中。此上清液是去除了mRNA的總RNA。冰上放置待用。7. 加入0.5 mL結(jié)合液，混勻后4 200-2000g 離心5分鐘，小心棄上清。8. 重復(fù)上步2-4次。9. 加入50 uL RNA洗脫液，混勻后4 200-2000g 離心5分鐘，小心收集上清（mRNA）。10. 重復(fù)上步1-3次。11. 將各次收集的mRNA混合用于下步的核酸沉淀。三：用微量核酸沉淀劑沉淀mRNA1. 按2:1的比例將微量核酸沉淀劑與mRNA溶液混合。微量核酸沉淀劑用前需要搖勻。2. 室溫15000 g離心10分鐘(如果mRNA含量在2 ng以下，建議