2017南寧科學(xué)技術(shù)進(jìn)步獎(jiǎng)

1、2017年度南寧市科學(xué)技術(shù)進(jìn)步獎(jiǎng)推薦材料卷內(nèi)目錄項(xiàng)目名稱：HLA高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可難題解決技術(shù)體系的建立與應(yīng)用自治區(qū)科技成果登記號(hào)：201696492序號(hào)文件編號(hào)責(zé)任者文件材料題名日期頁(yè)號(hào)12017020040南寧中心血站（南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所）南寧市科學(xué)技術(shù)進(jìn)步獎(jiǎng)推薦書(shū)1-362南科驗(yàn)2016134 號(hào)、201696492南寧市科學(xué)技術(shù)局、廣西壯族自治區(qū)科學(xué)技術(shù)情報(bào)研究所第三方評(píng)價(jià)證明（項(xiàng)目驗(yàn)收證書(shū)、成果登記證書(shū)）2016.4.192016.6.3037-513南寧中心血站（南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所）公開(kāi)發(fā)表的論文專著52-914南寧中心血站（南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所）項(xiàng)目完成單位的直接經(jīng)濟(jì)效益證

2、明92-93520171490廣西醫(yī)學(xué)科學(xué)情報(bào)所科技查新報(bào)告2017.6.2394-1006南寧中心血站（南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所）公示情況說(shuō)明2017.6.30101-1077其他證明：世界衛(wèi)生組織HLA命名委員會(huì)頒發(fā)的6個(gè) 新的HLA等位基因命名證書(shū)108-1148知情同意推出南寧市科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)報(bào)獎(jiǎng)證明1152017 年度南寧市科學(xué)技術(shù)進(jìn)步獎(jiǎng)推薦書(shū)一、項(xiàng)目基本情況專業(yè)評(píng)審組：南寧市科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)委員會(huì)辦公室制項(xiàng)目HLA高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可難題解決技術(shù)體系的建立名稱與應(yīng)用是否屬于（B ）保密項(xiàng)目A、是B、否主 要 完 成 單 位南寧中心血站（南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所）主 要 完 成 人授權(quán)發(fā)明專利（項(xiàng)

3、）授權(quán)的其他知識(shí)產(chǎn)權(quán)（項(xiàng)）李恒聰、吳國(guó)光、何保仁、裴永峰、李麗蘭、黃惠妮、李彬、黎海燕、劉學(xué)軍項(xiàng)目起止時(shí)間2010年 1月1日起2016年 6月30日止所屬國(guó)民 經(jīng)濟(jì)行業(yè)（Q）衛(wèi)生、社會(huì)保障和社會(huì)福利業(yè)項(xiàng)目曾獲科技計(jì) 劃、基金資助情況計(jì)劃、基金名稱編號(hào)下達(dá)部門(mén)下達(dá)年度南寧市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目201003048C3南寧市科技局2010獎(jiǎng)勵(lì)類別（D ）A、技術(shù)開(kāi)發(fā)類B、推廣應(yīng)用類 C、重大工程類 D、社會(huì)公益類32099學(xué)科分類名稱（代碼） 32011二、項(xiàng)目簡(jiǎn)介所屬科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域、簡(jiǎn)要背景、主要技術(shù)內(nèi)容及創(chuàng)新要點(diǎn)、技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)、促進(jìn)行業(yè)科技 進(jìn)步作用及推廣應(yīng)用、效益情況。.所屬科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域

4、：本項(xiàng)目屬臨床診斷學(xué)學(xué)科（學(xué)科分類號(hào)32011 ）輸血醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)領(lǐng)域。.簡(jiǎn)要背景：本項(xiàng)目屬南寧市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目，合同編號(hào):201003048C-3），項(xiàng)目類別為科技攻關(guān)與新產(chǎn)品試制。 本項(xiàng)目系統(tǒng)分析了廣西人群 HLA-A、B、DRB1基因測(cè)序分型中模棱兩可結(jié)果的分布狀況，發(fā)現(xiàn)了 PCR-SBT測(cè)序技術(shù)出現(xiàn)模棱兩可結(jié)果的規(guī)律，建立了以組特異性測(cè)序引物法和高分辨聚合酶鏈反應(yīng) -序列特異性引物法相互補(bǔ)的模棱兩可難題解決技術(shù)體系， 有效解決HLA高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可問(wèn)題, 成功地用于臨床（社會(huì)）服務(wù)。三. 主要技術(shù)內(nèi)容及創(chuàng)新要點(diǎn)1.主要技術(shù)內(nèi)容（1）使用PCR-SBT測(cè)序技術(shù)

5、對(duì)1000份標(biāo)本做HLA-A、B、DRB1高分辨基因分型,HLA-A、B、發(fā)現(xiàn)96.7%的標(biāo)本其HLA-A，B，DRB1基因至少有1個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)模棱兩可,DRB1各位點(diǎn)出現(xiàn)模棱兩可結(jié)果的比例分別為65.7%、58.8%、77.2%，充分揭示了 HLA-A、B、DRB1各位點(diǎn)出現(xiàn)模棱兩可結(jié)果分布規(guī)律和高比例模棱兩可率的特點(diǎn)。（2）建立了使用組特異性測(cè)序引物法（GSSP）技術(shù)和高分辨聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異1000性引物法（PCR-SSP技術(shù)相配合的模棱兩可問(wèn)題的新解決技術(shù)體系，成功解決了 份標(biāo)本HLA-A，B，DRB1高分辨基因分型檢出的模棱兩可問(wèn)題。（3）在中華骨髓庫(kù)HLA基因分型檢測(cè)和臨床組織配

6、型中應(yīng)用所建立的技術(shù)體系，提高了分型檢測(cè)結(jié)果精確性，并成功正確鑒定和報(bào)道了 6個(gè)HLA新等位基因：HLA-A*33:88,A*02:513,B*40:01:18 ，B*40:01:40, DRB1*14:150, DRB5*01:15。(4) 發(fā)表研究論文6篇，其中SCI簡(jiǎn)報(bào)論文2篇，國(guó)內(nèi)核心論文4篇。2.創(chuàng)新要點(diǎn)1.以大樣本量數(shù)據(jù)做研究，更充分可靠地揭示了HLA-A，B，DRB1各位點(diǎn)出現(xiàn)模棱兩可結(jié)果的分布規(guī)律和高比例模棱兩可率的特點(diǎn)。2.建立了聯(lián)合使用組特異性測(cè)序引物法和高分辨聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物法解決HLA高分辨模棱兩可難題的技術(shù)體系，較好解決基因測(cè)序分型模棱兩可問(wèn)題。四. 技術(shù)

7、經(jīng)濟(jì)指標(biāo)：將研究成果應(yīng)用到臨床實(shí)踐及社會(huì)公益事業(yè)，為中華骨髓庫(kù)提供HLA基因分型檢測(cè)服務(wù)和為臨床提供 HLA組織配型服務(wù)。截止2016年底共提供6343例次檢測(cè)服務(wù)，2014年-2016年收入97.63萬(wàn)元。五. 促進(jìn)行業(yè)科技進(jìn)步作用及推廣應(yīng)用、效益情況(1) 將建立的HLA高分辨模棱兩可難題解決技術(shù)體系應(yīng)用于中華骨髓庫(kù)HLA基因分型和臨床組織配型中，顯著提高了分型結(jié)果精確性，為臨床移植配型和骨髓庫(kù)供者分型 提供更好的技術(shù)保障。(2)成功正確鑒定和報(bào)道了 6個(gè)HLA新等位基因，這些HLA新等位基因的鑒定對(duì)臨床移植配型、法醫(yī)學(xué)鑒定以及人類遷移和人類遺傳學(xué)研究等方面具有重要意義。（限1000個(gè)漢字

8、）、項(xiàng)目主要科技創(chuàng)新闡述項(xiàng)目具有創(chuàng)造性的關(guān)鍵技術(shù)或成果轉(zhuǎn)化和推廣應(yīng)用的集成創(chuàng)新與推廣模式創(chuàng)新的內(nèi) 容。一、項(xiàng)目簡(jiǎn)介人類白細(xì)胞抗原（HLA）是迄今所知人類最復(fù)雜的免疫遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，準(zhǔn)確的 HLA分型對(duì)于臨床造血干細(xì)胞移植、HLA與疾病相關(guān)性等研究有著重要的意義。聚合酶鏈反 應(yīng)-直接測(cè)序分型法（PCR-SBT）因達(dá)到高分辨水平和能鑒定新等位基因而應(yīng)用廣泛。但PCR-SBT法的一個(gè)大問(wèn)題是該法在分型判斷時(shí)存在較高比例的模棱兩可組合的結(jié)果，對(duì)HLA分型數(shù)據(jù)的精確判斷帶來(lái)了很大程度的困擾。故亟待尋找并建立有效解決HLA高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可問(wèn)題的方案，為臨床移植配型和骨髓庫(kù)供者HLA基因數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)

9、提供可靠的HLA分型保障。本項(xiàng)目系統(tǒng)分析了 HLA-A、B、DRB1基因測(cè)序分型中模棱兩可結(jié)果的分布狀況和各類HLA高分辨基因分型模棱兩可解決技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)了 PCR-SBT測(cè)序技術(shù)出現(xiàn)模棱兩可結(jié)果的規(guī)律，建立了以組特異性測(cè)序引物法和高分辨聚合酶鏈反應(yīng) -序列特異性引物法相互補(bǔ)的模棱兩可難題解決技術(shù)體系，有效解決了HLA高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可問(wèn)題，并將創(chuàng)新成果成功應(yīng)用于中華骨髓庫(kù) HLA基因分型和臨床組織器官移植基因分型、廣西人群基因多態(tài)性和人類遺傳學(xué)研究、HLA新等位基因的鑒定中，取得新的學(xué)術(shù)發(fā)現(xiàn)、顯著的社會(huì)效益和良好的經(jīng)濟(jì)效益。二、技術(shù)特征1.通過(guò)對(duì)1000份標(biāo)本的HLA- A ,

10、B,DRB1聚合酶鏈反應(yīng)-直接測(cè)序分型（PCR-SBT）分型，探明HLA高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可的比例和分布規(guī)律，進(jìn)一步明晰解決HLA 高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可的重要性和緊迫性。本項(xiàng)目采用聚合酶鏈反應(yīng)-直接測(cè)序分型（PCR-SBT）方法對(duì)1000名中華骨髓庫(kù)廣西 分庫(kù)供者的HLA-A，B，DRB1基因進(jìn)行測(cè)序分型，發(fā)現(xiàn) HLA-A，B，DRB1基因均存在較高比例的模棱兩可分型結(jié)果。檢測(cè)的1000份標(biāo)本中，僅33份標(biāo)本無(wú)模棱兩可情況，96.7% 的標(biāo)本其HLA-A，B，DRB1基因至少有1個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)模棱兩可結(jié)果，其中 HLA-A，B，DRB1各位點(diǎn)出現(xiàn)模棱兩可結(jié)果的比例分別為65.7%、58

11、.8%、77.2%。這些結(jié)果表明，主流的 PCR-SBT方法對(duì)HLA-A，B，DRB1基因分型結(jié)果均存在較高比例的模棱兩可，嚴(yán)重影響到 HLA基因分型的精確性，厄需予以解決。2.深入系統(tǒng)地分析國(guó)內(nèi)外以往使用的各類HLA高分辨基因分型模棱兩可解決方法的 優(yōu)缺點(diǎn)，研究建立了解決 HLA高分辨模棱兩可難題的實(shí)驗(yàn)技術(shù)體系，實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明該技 術(shù)體系簡(jiǎn)單高效。（1）對(duì)國(guó)內(nèi)外以往使用的各類 HLA高分辨基因分型模棱兩可解決方法做了深入系統(tǒng) 分析：包括焦磷酸測(cè)序分型法、參照鏈介導(dǎo)構(gòu)象分析法、組特異性擴(kuò)增法（ GSA）、組特異性測(cè)序引物法（GSSP）、高分辨聚合酶鏈反應(yīng)-直接測(cè)序分型法（PCR-SBT）、克隆測(cè)

12、序 法、單倍型分離法等等，能部分解決 HLA高分辨基因分型模棱兩可問(wèn)題，但都有自身缺點(diǎn)。已發(fā)表的相關(guān)學(xué)術(shù)論文有:1李恒聰，吳國(guó)光.HLA高分辨分型模棱兩可組合研究和問(wèn)題解決的進(jìn)展.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2010,18(5):1345-1349（2）建立了解決HLA高分辨模棱兩可難題的實(shí)驗(yàn)技術(shù)體系，成功解決問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)驗(yàn) 證表明該技術(shù)體系簡(jiǎn)單高效。在通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)外以往使用的各類 HLA高分辨基因分型模棱兩可解決方法的優(yōu)缺點(diǎn)深入系統(tǒng)的分析的基礎(chǔ)上，制定了 HLA測(cè)序分型模棱兩可解決技術(shù)體系，即聯(lián)合使用組特異性測(cè)序引物法和高分辨聚合酶鏈反應(yīng)-直接測(cè)序分型法來(lái)解決模棱兩可問(wèn)題。本項(xiàng)目在中華骨髓庫(kù)標(biāo)本檢測(cè)中驗(yàn)

13、證 HLA高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可問(wèn)題解決技術(shù)體系。對(duì)于1000份標(biāo)本HLA-A，B，DRB1基因測(cè)序分型檢出的模棱兩可結(jié)果，發(fā)現(xiàn)采 用組特異性測(cè)序引物法可以解決 87.37%HLA-A、93.54HLA-B和60.49%的HLA-DRB1基因模棱兩可分型結(jié)果，采用高分辨聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物法解決12.63% HLA-A、4.76%HLA-B和15.29%的HLA-DRB1基因模棱兩可分型結(jié)果，剩余1.70%HLA-B 和24.22%的HLA-DRB1基因模棱兩可分型結(jié)果聯(lián)合使用組特異性測(cè)序引物法和高分辨聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物法解決。組特異性測(cè)序引物法和高分辨聚合酶鏈反應(yīng)-序列

14、特異性引物法分別對(duì)位于HLA-A，B和HLA-DRB1基因檢測(cè)區(qū)內(nèi)、外的模棱兩可分型結(jié)果具 有較高的解決能力，二者互為補(bǔ)充，可有效解決 HLA高分辨基因分型結(jié)果模棱兩可問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)表明，本項(xiàng)目建立的 HLA測(cè)序分型模棱兩可解決技術(shù)體系可有效解決模棱兩可問(wèn)題，具有簡(jiǎn)單高效的優(yōu)點(diǎn)。已發(fā)表的相關(guān)學(xué)術(shù)論文有:1李恒聰，裴永峰，黃惠妮等.人類白細(xì)胞抗原A_B和DRB1測(cè)序分型模棱兩可結(jié)果的分布及解決.重慶醫(yī)學(xué)，2017,46(13):1759-1761基因分型和臨床組織器官移植基因分型、廣西人群基因多態(tài)性和人類遺傳學(xué)研究、HLA新等3成功將建立的解決HLA高分辨模棱兩可難題技術(shù)體系應(yīng)用在中華骨髓庫(kù) HLA

15、HLHLA位基因的鑒定中，取得好的成效。(1)中華骨髓庫(kù)HLA基因分型和臨床組織器官移植基因分型中的應(yīng)用，確保了 分型檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本項(xiàng)目在中華骨髓庫(kù)HLA基因分型和臨床組織器官移植基因分型中應(yīng)用建立的 高分辨模棱兩可難題解決技術(shù)體系，有效解決了實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的分型結(jié)果模棱兩可問(wèn)題，確保了分型結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所HLA組織相容性和免疫遺傳實(shí)驗(yàn)室，在中華骨髓庫(kù)HLA高分辨基因分型數(shù)據(jù)抽檢結(jié)果正確率 100%,實(shí)驗(yàn)室參加衛(wèi)生部臨床室間質(zhì)量評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果正確率100%。(2)在廣西人群基因多態(tài)性和人類遺傳學(xué)研究中的應(yīng)用所建立的技術(shù)體系，對(duì)廣西HLA基3431名無(wú)個(gè)體血緣關(guān)系健康個(gè)體進(jìn)行了

16、HLA-A、B、D R B1等位基因進(jìn)行高分辨分型， 首次報(bào)告了廣西地區(qū)人群HLA等位基因和單體型頻率相關(guān)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)廣西地區(qū) 因座的基因型和等位基因具有較高的遺傳多態(tài)性和地域差異性且具有其自身特點(diǎn)。該工作為今后開(kāi)展臨床造血干細(xì)胞移植、中國(guó)人群CWD表的制訂和骨髓庫(kù)最適庫(kù)容的評(píng)估等研 究及相關(guān)疾病研究提供有益信息支持。已發(fā)表的相關(guān)學(xué)術(shù)論文有:1黃惠妮,裴永峰,李恒聰?shù)?廣西造血干細(xì)胞骨髓庫(kù)HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因多態(tài)性研究.中國(guó)輸血雜志，2017,30(1):51-552裴永峰，李恒聰,黃惠妮.廣西地區(qū)漢族人群HLA-B15和HLA-B40組抗原多態(tài)性的初步分析.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，

17、2017,38(9):1155-1159(3) 在HLA新等位基因的鑒定中的應(yīng)用，成功鑒定了 6個(gè)新的HLA等位基因，對(duì) 臨床移植配型、法醫(yī)學(xué)鑒定以及人類遷移和人類遺傳學(xué)研究等方面具有重要意義。通過(guò)應(yīng)用本項(xiàng)目建立的HLA高分辨模棱兩可難題解決技術(shù)體系， 鑒定HLA新等位基 因 6 個(gè)：A*33:88,A*02:513,B*40:01:18，B*40:01:40，DRB1*14:150, DRB5*01:15。該 6 個(gè) 新等位基因均已獲得世界衛(wèi)生組織(WHO)HLA命名委員會(huì)的正式命名。這些 HLA新等位基因的鑒定，對(duì)臨床移植配型、法醫(yī)學(xué)鑒定以及人類遷移和人類遺傳學(xué)研究等方面具有 重要意義。已

18、發(fā)表的相關(guān)學(xué)術(shù)論文有:1 YF P ei, HN Hua ng, HC Li, et al. Ide ntificatio n of a n ovel HLA-DR*14 allele,DRB1*14:150, i n a Chi nese in dividual. HLA : immu ne response gen etics, 2016,87(5) :407-408 2 YF P ei, HN Hua ng, HC Li, et al. HLA-A*02:513, a novel HLA-A*02 allele. HLA : immune res ponse gen etics, 201

19、6,87(5):382-383三、應(yīng)用本項(xiàng)目建立的技術(shù)體系，成功開(kāi)展大量的臨床和社會(huì)服務(wù)工作,取得顯著的社會(huì)效益和良好的經(jīng)濟(jì)效益。1依托本項(xiàng)目所建立的技術(shù)，充分保障了在完成中華骨髓庫(kù) HLA基因分型和臨床組織器官移植基因分型中檢測(cè)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定可靠，對(duì)于提高臨床組織器官移植患者的移植治療效 果和保護(hù)患者生命安全，起了重要積極的作用，取得了顯著的社會(huì)效益。2.本項(xiàng)目首次報(bào)告了廣西地區(qū)人群 HLA等位基因和單體型頻率相關(guān)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)明廣西地區(qū)HLA基因座的基因型和等位基因具有較高的遺傳多態(tài)性和地域差異性且具有其自身特點(diǎn)，為今后開(kāi)展臨床造血干細(xì)胞移植、中國(guó)人群CWD表的制訂和骨髓庫(kù)最適庫(kù)容的評(píng)估等研究及相

20、關(guān)疾病研究提供有益信息支持。3.本項(xiàng)目為臨床醫(yī)療單位和社會(huì)公益事業(yè)提供中華骨髓庫(kù)HLA基因分型服務(wù)和臨床組織配型服務(wù)，至2016年12月已完成6343例（份）的檢測(cè)服務(wù)，其中2014至2016年 為臨床和社會(huì)提供的檢測(cè)服務(wù)共計(jì) 2061例（份），檢測(cè)服務(wù)收入97.63萬(wàn)元，取得良好的經(jīng)濟(jì)效益。4.本項(xiàng)目成功鑒定了 6個(gè)新的人類HLA等位基因，對(duì)臨床移植配型、法醫(yī)學(xué)鑒定以及人類遷移和人類遺傳學(xué)研究等方面具有重要意義。5.經(jīng)過(guò)本項(xiàng)目的實(shí)施，項(xiàng)目組成員中有兩名主要成員被南寧市遴選為“第九批南寧市新世紀(jì)學(xué)術(shù)和技術(shù)帶頭人第一層次人選”，一名成員被評(píng)為“南寧市第七批優(yōu)秀青年專業(yè)技術(shù)人才”（限5頁(yè)內(nèi)）五、項(xiàng)

21、目曾獲科技獎(jiǎng)勵(lì)情況獲獎(jiǎng)時(shí)間獎(jiǎng)項(xiàng)名稱獎(jiǎng)勵(lì)等級(jí)授獎(jiǎng)部門(mén)（單位）六、公開(kāi)發(fā)表的論文專著（不超過(guò)20篇）序號(hào)論文專著名稱/刊名/作者年卷頁(yè)碼（年卷頁(yè)）發(fā)表時(shí)間（年 月）通訊作者第一作者1人類白細(xì)胞抗原 A B和 DRB1測(cè)序分型模棱兩可結(jié) 果的分布及解決/重慶醫(yī) 學(xué)/李恒聰，裴永峰，黃惠 妮等2017,46（13）:1759-17612017 年 5月吳國(guó)光李恒聰2廣西造血干細(xì)胞骨髓庫(kù) HLA-A B DRB1高分辨等 位基因多態(tài)性研究/中國(guó) 輸血雜志/黃惠妮，裴永 峰，李恒聰?shù)?017,30（1）:51-552017 年 1月黃惠妮3廣西地區(qū)漢族人群 HLA-B15 和 HLA-B40 組抗 原多態(tài)性的初步分