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1、大鼠干擾素(IFN-)定量檢測試劑盒(ELISA)使用說明書 【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒試劑盒名稱】大鼠干擾素(IFN-)定量檢測試劑盒(ELISA)【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒試劑盒用途】定量檢測大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中干擾素(IFN-)的含量?!敬笫蟾蓴_素(IFN-)Elisa試劑盒檢測原理】本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠干擾素(IFN-)單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣
2、根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中大鼠干擾素(IFN-)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中大鼠干擾素(IFN-)含量?!敬笫蟾蓴_素(IFN-)Elisa試劑盒試劑盒組成】1酶標包被板12孔×8條7顯色劑A液6mL2標準品0.3mL×6管8顯色劑B液6mL320倍濃縮洗滌液25mL9終止液6mL4樣本稀釋液6mL10說明書1份5特殊稀釋液6mL11封板膜2張6酶標試劑6mL12密封袋1個備注:標準品(1號6號)濃度依次為:2000、1000、500、250、125、62.5ng/L.
3、 【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材】1、37恒溫箱2、標準規(guī)格酶標儀3、精密移液器及一次性吸頭4、蒸餾水5、一次性試管6、吸水紙【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒操作步驟】1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50L;待測樣本孔中先加入待測樣本10L,再加樣本稀釋液40L(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。4、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30
4、min。5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50L,空白對照孔不加。7、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min。8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50L,再加入顯色劑B液 50L,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37避光顯色15min。10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50L,終止反應(顏色由藍色立轉(zhuǎn)
5、黃色)。11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。12、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)?!敬笫蟾蓴_素(IFN-)Elisa試劑盒樣本要求】1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融。3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
6、【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒注意事項】1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。5、本試劑盒定量范圍為62.5-2000ng/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果(62.5-2000ng/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本最終濃度。6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白
7、對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。 【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】 準備試劑,樣品和標準品 加入準備好的樣品和標準品,37反應30分鐘 洗板4次,加入酶標試劑,37反應30分鐘 洗板4次,加入顯色液A、B,37顯色15分鐘 加入終止液 15分鐘之內(nèi)讀OD值 計算 【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒檢測范圍】62.5ng/L - 2000ng/L【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒規(guī)格】96人份/盒【大鼠干擾素(IFN-)Elisa試劑盒貯藏】2-8,避光防潮保存?!敬笫蟾蓴_素(IFN-)Elisa試劑盒有效期】6個月 本公司專業(yè)供應Elisa試劑盒,種屬齊全,現(xiàn)貨,質(zhì)量有保證。歡迎來電咨詢13641860498#160;
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